Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение бис(2-этилгексил)фталата в жидких пищевых продуктах

Методические указания МУК 4.1.2889-11

ББК 51.23 060

060 Определение бис(2-этилгексил)фталата в жидких пищевых продуктах: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011.— 12 с.

1.    Разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН В. А. Ту-тельян, проф., д.х.н К. И. Эллер, к.б.н. В. В. Пименова, С. В. Волкович, Е. П. Хромченкова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3.    Утверждены и введены в действие руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 6 июля 2011 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

Роспотребнадзор, 2011 Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011

МУК 4.1.2889-11

гексана, получая смесь с концентрацией БЭГФ 0,5 нг/мм³ и БГФ-d 0,25 нг/мм³ при соотношении стандартов 2 : 1.

Вводят 1—2 мм³ каждой смеси в ГЖХ-ПИД систему, определяют соотношения площадей пиков БЭГФ и внутреннего стандарта БГФ-d.

Строят калибровочный график зависимости соотношения площадей на хроматограммах (S/S_cx) от соотношения концентраций БЭГФ и внутреннего стандарта БГФ-d ( С/С_ст), определяя коэффициент К.

2 6.2 ГЖХ-МС анализ

Для подтверждения наличия БЭГФ используют систему ГЖХ-МС, основанную на Thermo Trace GC 200 газовом хроматографе, соединенном с квадрупольным масс-спектрометром DSQ II (подобного производства США), или аналогичную систему. Разделение проводят на капиллярной колонке 25 м х 0,32 мм х 0,25 мкм, покрытой полиметилсилоксаном типа DB-lms или полиметилси-локсаном с 5 % фенильных групп типа DB-5ms, газ-носитель — гелий, скорость потока через колонку — 1 см/мин. Температура переходных линий — 250 °С, температура термостата колонки программируется от 60 до 280 °С со скоростью 10 см/мин, диапазон регистрируемых масс — от 40 до 450 а.е.м. Базовая масса БЭГФ — m/z = 149, другие характеристические ионы 113,167 и 279. Базовая масса внутреннего стандарта БГФ-d — m/z = 153.

2.7. Обработка результатов измерения

Содержание в образцах рассчитывают методом внутреннего стандарта по формуле:

С = К х С_ст х    где

^ ап.

С — массовая концентрация БЭГФ, мкг/дм³;

С_ст — массовая концентрация добавленного внутреннего $    стандарта, мкг/дм³;

^обр' — отношение площади пика БЭГФ в образце к пло-S_cm    щади пика внутреннего стандарта;

К — калибровочный коэффициент, получаемый из калибровочной кривой (пункт 2.6.1).

За результат принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных измерений и выражают с точностью до одного десятичного знака.

11

3. Оперативный контроль результатов измерений

3.1. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

Хроматографирование проб проводят не менее двух раз, сравнивают отношение площади пика исследуемого вещества к площади пика внутреннего стандарта БГФ-d.

Допустимое расхождение между параллельными измерениями (R) определяют на основании предела повторяемости (г) (табл. 1): R = 0,01 х (V, %) х X, мкг/дм³, где

X — средняя концентрация двух определений С, и С_Т

Если расхождение между параллельными определениями не превышает допустимого:

|Ci-C₂\<R

то среднее арифметическое принимают за результат анализа.

При превышении норматива R следует повторить измерения, используя новую пробу.

4. Требования техники безопасности

При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

5. Требования к квалификации операторов

Работу по указанной методике могут исполнять высококвалифицированные специалисты в области газожидкостной хроматографии и санитарной химии. Исполнители должны быть проинструктированы по основным мерам техники безопасности при работе с веществами 1—2-го класса опасности, органическими растворителями, а также по основным правилам безопасности при работе в химлаборатории (и. 3).

6. Условия измерений

Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с веществами 1—2-го класса опасности, органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционной системой согласно ГОСТ 12.4.021.

Температура окружающего воздуха должна быть от 15 до 25 °С. Относительная влажность воздуха не более 80 % при 25 °С. Атмосферное давление 730—760 мм рт. ст. Напряжение электропитания 210—220 В. Частота переменного тока 45—50 Гц.

МУК 4.1.2889-11

Содержание

1.    Краткая характеристика бис(2-этилгексил)фталата.................... 4

2.    Методика определения бис(2-этилгексил)фталатав воде, безал

когольных напитках и соковой продукции методом капиллярной газожидкостной хроматографии с пламенно-ионизационным и масс-спектрометрическим детектором.............................. 6

2.1.    Основные положения............................................................. 6

2.1.1.    Принцип методики........................................................ 6

2.1.2.    Метрологические характеристики методики............... 6

2.2.    Реактивы.................................................................................. 7

2.3.    Приборы, оборудование, посуда............................................ 8

2.4.    Отбор проб.............................................................................. 9

2.5.    Подготовка к определению.................................................... 9

2.5.1.    Приготовление стандартных растворов бис(2-этил-

гексил)фталата и дейтерированного бис(н-гек-сил)фталата.................................................................... 9

2.5.2.    Подготовка пробы для анализа..................................... 9

2.6.    Описание определения........................................................... 10

2.6.1.    Калибровка хроматографа............................................. 10

2.6.2.    ГЖХ-МС анализ............................................................ 11

2.7.    Обработка результатов измерения......................................... 11

3.    Оперативный контроль результатов измерений.......................... 12

3.1. Проверка приемлемости результатов параллельных

определений............................................................................ 12

4.    Требования техники безопасности............................................... 12

5.    Требования к квалификации операторов.................................... 12

6.    Условия измерений........................................................................ 12

3

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

6 июля 2011 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение бис(2-этилгексил)фталата в жидких пищевых продуктах

Методические указания МУК 4.1.2889-11

Область применения

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии с масс-спектрометри-ческим детектором для определения массовых концентраций бис(2-этилгексил)фталата в жидких пищевых продуктах (бутили-рованная вода, безалкогольные напитки, соковая продукция) в диапазоне 0,1—1 000,0 мг/кг.

Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и других служб, осуществляющих надзор (контроль) качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, аккредитованными в установленном порядке.

1. Краткая характеристика бис(2-этилгексил)фталата

Общепринятое название: бис(2-этилгексил)фталат.

Название по номенклатуре ИЮПАК: бис(2-этилгексиловый) эфир 1,2-бензолдикарбоновой кислоты.

Синонимы: бис-(изоокгил)фталат, ВЕНР.

Структурная формула:

МУК 4.1.2889-11

Эмпирическая формула: С₂₄Н3₈0₄, Молекулярная масса 390,56.

Номер CAS: 117-81-7.

Физические свойства: бесцветная или слегка желтоватая жидкость, температура плавления—55 °С, температура кипения 384 °С, плотность D 0,981 г/см³ при 25 °С. Практически нерастворим в воде (0,285 мг в 1 л при 24 °С), растворим в гексане, хлористом метилене, трихлортрифторэтилене и других органических растворителях.

В промышленности бис(2-этилгексил)фталат (далее — БЭГФ) используют в качестве пластификатора для пластмасс на основе поливинилхлорида для получения гибкости полимерных продуктов. Поливинилхлоридные пластмассы могут содержать от 1 до 40 % БЭГФ. БЭГФ относится к 3-й группе токсичности. Европейское агентство по безопасности пищи (EFSA) оценило уровень, при котором отсутствуют наблюдаемые вредные эффекты (NOAEL), в 5 мг на 1 кг веса тела в день. С учетом дополнительного коэффициента безопасности (100) допустимый уровень суточного воздействия (TDI) установлен в 0,05 мкг/дм³ веса тела, что эквивалентно 0,003—0,004 мкг/дм³ веса тела/сутки. В Российской Федерации согласно СанПиН 2.1.4.1116—02 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества» нормативами качества воды по показателю ди(2-этилгексил)фталата являются для воды первой категории — 6 мкг/дм³; для воды высшей категории — 0,1 мкг/ дм³.

5

2. Методика определения бис(2-этилгексил)фталата в воде, безалкогольных напитках и соковой продукции методом капиллярной газожидкостной хроматографии с пламенно-ионизационным и масс-спекгрометрическим детектором

2.7. Основные положения

2 7.7. Принцип методики

Методика основана на определении бис(2-этилгексил)фталата методом капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) с использованием пламенно-ионизационного детектора (ПИД) или масс-спектрометрического детектора (далее — МС) после экстракции водного раствора гексаном (в случае воды) и перегонки с водяным паром и экстракции гексаном из водного дистиллята (в случае безалкогольных напитков и соковой продукции). Для количественного определения применен метод внутреннего стандарта, в качестве которого используется дейтерированный аналог бис-(н-гексил)-фталат-с!⁴ (БГФ-d).

2 7.2 Метрологические характеристики методики

Метрологические характеристики методики определения при анализе воды

Таблица 1

Метрологические характеристики Диапазон концентраций БЭГФ в пробе 0,05—50,0 мкг/дм3 50—5 000 мкг/дм3 Предел повторяемости (г), % 19,2 15,5 Предел воспроизводимости (К),% 23,2 19,3 Относительная систематическая погрешность измерений (+5), %, Р = 0,95 16,9 13,8

Примечание: метрологические характеристики рассчитаны для образцов с содержанием бис(2-этилгексил)фталата 1,0 и 500,0 мкг/дм3

Метрологические характеристики методики определения при анализе безалкогольных напитков и соковой продукции

2.2. Реактивы

Бис(2-этилгексил)фталат, кат.

№ 48557, подобные производства фирмы «Sigma-Aldrich» или с аналогичными характеристиками

Бис(н-гексил)фталат-б⁴, кат.

№ 34167, подобные производства фирмы «Riedel-de Наеп» — внутренний стандарт или с аналогичными характеристиками

Гексан, ч    ТУ 6-09-3534-74

Дихлорметан (хлористый метилен), осч

Натрий хлористый

Натрий серно-кислый безводный, хч    ГОСТ 199-68

Вода бидистиллированная (в стеклянной посуде)

7

2.3. Приборыу оборудование, посуда

Система капиллярной ГЖХ с пламенно-ионизационным детектором (ПИД)

Система капиллярной ГЖХ с квадрупольным масс-спектрометром

Микрошприц МШ-10 для жидкостной хроматографии или аналогичный

Аппарат для встряхивания проб

типа АВУ-6С или аналогичный ТУ 64-1-2451—78

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г и погрешностью + 0,0001 г

Колбы плоскодонные с конусом 14/23 объемом 100 см³

Цилиндры вместимостью 100 см³

Пипетки 4-1-2 или 5-1-2, , 4-2-25 или 5-2-25

Вайл (ёмкость 4—6 см³ с герметично завинчивающейся крышкой)

Фильтры беззольные ФО-ФС-15 «Синяя лента»

Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных в МУК.

Все растворители перед проведением анализа следует перегонять с использованием только стеклянной лабораторной посуды. На дальнейших этапах используется только стеклянная лабораторная посуда, предварительно промытая перегнанным в стекле гексаном или хлористым метиленом. Для исключения возможности получения ложноположительных результатов на всех этапах проведения анализа экстракты не должны контактировать с пластиками.

МУК 4.1.2889-11

2.4. Отбор проб

Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией на конкретную продукцию.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Приготовление стандартных растворов бис(2-этилгексил)фталата и дейтерированного бис(н-гексил)фталата

Навеску (0,01 ± 0,001) г БЭГФ количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в 20 см³ метиленхло-рида, затем добавляют гексан до метки. Получают основной стандартный раствор БЭГФ в 100 см³ смеси гексан-хлористый метилен (4 : 1) с концентрацией 100 мг/дм³. Аналогично готовят основной стандартный раствор внутреннего стандарта БГФ-d с концентрацией 100 мг/дм³. Рабочие растворы с концентрацией фталатов 1 мг/дм³ (1 нг/мм³) готовят разбавлением в 100 раз гексаном стандартных растворов. Основной и рабочие стандартные растворы хранят в стеклянной посуде (мерной колбе) с притертой стеклянной пробкой в прохладном месте (при температуре около 0 °С). Сроки годности основного раствора — 9 месяцев, рабочих растворов — 1 месяц.

2.5.2. Подготовка пробы для анализа 2.5.2.1. Подготовка образца воды

К 100 см³ образца воды продукта добавляют 5 г сухого хлористого натрия. Добавляют 0,2 см³ рабочего раствора БГФ-d и 0,8 см³ гексана, добавка соответствует концентрации внутреннего стандарта в 2 мкг/дм³.

Встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев из верхнего органического слоя вносят микрошприцем 1—2 мм³ в инжектор ГЖХ-ПИД системы. Количество БЭГФ в образце воды определяют по сравнению площади его пика с пиком внутреннего стандарта по калибровочной зависимости площади пиков анализируемого вещества и его дейтерированного аналога по формуле .

При анализе воды высшей категории, где установленный уровень МДУ составляет 0,1 мкг/дм³, применяют следующий вариант подготовки пробы: к 1дм³ образца воды добавляют 0,2 см³ рабочего раствора БГФ-d и 9,8 см³ гексана (добавка соответствует концентрации внутреннего стандарта в 0,2 мкг/дм³). Смесь встряхивают, отделяют верхний гексановый слой и удаляют гексан в токе азота до

объема примерно в 1,0—1,5 см³, вносят микрошприцем 1—2 мм³ в инжектор ГЖХ-ПИД системы.

2.5.2.2. Подготовка образца безалкогольных напитков и соковой продукции

В круглодонную перегонную колбу на 250 см³ помещают 100 см³ напитка, добавляют 5 г хлористого натрия и 0,2 см³ (2 мкг/дм³ БГФ-d в напитке) рабочего раствора внутреннего стандарта. Смесь нагревают на глицериновой бане до кипения, отгоняя 50 см³ дистиллята. К водному дистилляту добавляют 1 см³ гексана, встряхивают, после разделения слоев 1—2 мм³ из верхнего органического слоя вносят в инжектор ГЖХ системы. Далее анализируют по пункту 2.5.2.1.

2.6. Описание определения

Образцы анализируют с помощью системы ГЖХ-ПИД. Разделение проводят на капиллярной колонке 30 m х 0,32 mm х 0,25 шп, покрытой полиметилсилоксаном типа DB-lms или полиметилси-локсаном с 5 % фенильных групп типа DB-5ms, газ-носитель — азот, скорость потока до сброса — 40—42 мл/мин, входное давление— 15 psi. Температура инжектора 280 °С, режим ввода без разделения потока (splitless) газа-носителя, температура программируется от 60 до 280 °С со скоростью 20 °С/мин, температура детектора 300 °С. Примерное время выхода растворителя 1,2—1,4 мин, БЭГФ — около 11 мин, внутреннего стандарта БГФ-d — около 10 мин. Относительное приведенное время удерживания выхода БЭГФ по внутреннему стандарту составляет примерно 1,095—1,085. ГЖХ-ПИД должна обеспечивать уровень сигнала фталатов, превышающий шум в 3 раза, при вводе 0,05 нг БЭФГ или БГФ-d.

2.6. L Калибровка хроматографа

Для градуировки в хроматограф из рабочих растворов БЭГФ и внутреннего стандарта с концентрацией 1 нг/ мм³ каждый готовят смеси.

Калибровочная смесь № 1: к 1 см³ рабочего раствора БЭГФ добавляют 1 см³ рабочего раствора внутреннего стандарта, получая смесь с концентрацией каждого вещества 0,5 нг/мм³ при соотношении стандартов 1:1.

Калибровочная смесь № 2: к 0,5 см³ рабочего раствора БЭГФ добавляют 1,0 см³ раствора внутреннего стандарта и 0,5 см³ гексана, получая смесь с концентрацией БЭГФ 0,25 нг/мм³ и БГФ-d 0,5 нг/мм³ при соотношении стандартов 1 : 2.

Калибровочная смесь № 3: к 1,0 см³ рабочего раствора БЭГФ добавляют 0,5 см³ рабочего раствора внутреннего стандарта и 0,5 см³