МУК 4.1.2785-10
Определение остаточных количеств паклобутразола в воде, почве, зеленой массе, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и б. iai оно.|учия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник МУК 4Л .2777—4Л.2786—10

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 20И.—179 с.

< Росно ipcona. пор. 2011 С Федеральный пен ip гигиены н энндемнологнн Росно ipcoiia.i юра, 2011

МУК 4.1.2785—10

6.2. Условия хроматографического анализа Температура термостата испарителя 270 °С;

Температура детектора 300 °С.

Режим программирования температуры колонки: начальная температура 170°С (1 мин), скорость подъема температуры до 245 °С (0 мин) 20 °С/мин;

от 245 до 260 °С (4 мин), скорость подъема температуры 5 °С/мин; от 260 до 280 °С (5 мин), скорость подъема температуры 20 °С/мин. Расход газов:

газа-носителя (азот) 2.2 см³/мин; водорода 12.2 см³/мин; воздуха 185 см³/мин.

Деление потока: 1:1.

Объем вводимой пробы: 1 мм³.

Время удерживания паклобутразола: 6 мин 07 с ± 2 %.

Линейный диапазон детектирования: (0,05—1.0) нг.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем.

7.1. Очистка органических растворите, iей 7.1.1. Очистка н-гексана Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод. перегоняют над поташом.

7.1.2. Очистка этилацетата Эгилацстат промывают последовательно 5 %-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

7.1.3. Очистка ацетона Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 дм³ ацетона 10 г КМпО., и 2 г К_:СОз).

147

7.1.4. Очистка силикагеля

Силикагель 60 (0.063—0.2 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1.5 объемом ацетона, высушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 5—6 часов и затем активируют при температу ре 130 °С в течение 5 часов.

7.2. Подготовка колонки с силикагелем для очистки жстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8—10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля в 15 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 см³ гексана со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

7.3. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания паклобутразола из колонки с силикагелем

При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента. необходимого язя полного вымывания паклобутразола из колонки с силикагелем.

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.1см³ градуировочного раствора № 1 паклобутразола с массовой концентрацией 10.0 мкг/см³ в смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему) (п. 7.5.2) и отдувают растворитель током теплого воздуха. Остаток растворяют в 3 см³ смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему). помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.2. Промывают колонку 30 см³ смеси гексан-этилацетат (1 : 1. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду . Затем через колонку с силикагелем пропускают 50 см³ смеси гексан-этилацетат (4 : 6. по объему), отбирая последовательно по 5 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температу ре нс выше 40 °С, су хие остатки растворяют в 2 см³ смеси гексан—этилацетат (8 : 2. по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. и затем хроматографируют в соответствии с п. 6.2. По результатам обнаружения паклобутразола в каждой фракции определяют объем смеси гексан-этилацетат (4 : 6. по объему), необходимый язя полного вымывания вещества с колонки.

МУК 4.1.2785—10

Примечание При разработке метода анализа паклобутразола в масличных культурах целесообразно проверку хроматографического поведения вещества на колонке с силикагелем проводил» с использованием экстрактов контрольных образцов семян и масла.

7.4. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки

Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и. не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °С и скорости газа-носителя 2 см³/мин в течение 8—10 часов.

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.5.1. Исходный раствор паклобутразола для градуировки с массовой концентрацией 100 мкг/см³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0.010 ±0.0001) г паклобутразола. растворяют в 40 см³ ацетона, доводят объем раствора этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °С в течение 2-х месяцев.

7.5.2.    Градуировочный раствор паклобутразола

с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (раствор N° 1)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10.0 см³ исходного раствора паклобутразола с массовой концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.5.1). разбавляют смесью гсксан-этилацстат (8:2. по объему) до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов № 2—5.

Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре нс выше (-18) °С в течение месяца.

7.5.3.    Градуировочные растворы паклобутразола

с массовой концентрацией (0,05—0,5) мкг/см³ (растворы N° 2—5)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0,5. 1,0, 2.5 и 5.0 см³ градуировочного раствора № 1 паклобутразола с массовой концентрацией 10,0 мкг/см³ (п. 7.5.2). доводят до метки смесью гсксан-этилацстат (8 : 2. по объему), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2—5 с концентрацией паклобутразола 0.05. 0.1. 0.25 и 0.5 мкг/см³. соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

149

7.6. Градуировка хроматографа

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ с) от концентрации паклобутразола в растворе (мкг/см³). устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м градуировочным растворам (п. 7.5.3).

В испаритель (инжектор) хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 7.5.3) и анализируют при условиях хрома-тогрфирования по п. 6.2. Осуществляют нс менее 3-х параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не до.тжно превышать предела повторяемости г.

7.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят нс реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменения условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

1005 К_гр. где

$гр

S_UiU и S,_p - значение площади пика паклобутразола в образце для контроля, измеренное и на аде иное по градуировочной характеристике, соответственно, уел. ед.;

Кгр - норматив контроля. Kgp = 0.5 Д. где

± 6 - границы относительной погрешности. % (табл. 1).

Если условие стабильности нс выполняется только для одного образца. то повторно анализируют этот образец для исключения результата. содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

8. Отбор, подготовка и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов

МУК 4.1.2785—10

питания и объектов окружающей среды для определения мнкроколи-чсств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.1979) и правилами, определенными ГОСТ Р.51592—2000 «Вода. Общие требования к отбору проб». ГОСТ 17.4.3.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб». ГОСТ 28168—89 «Почвы. Отбор проб». ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». ГОСТ 8988-2002 «Масло рапсовое. ТУ».

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре (-18) °С не более 2-х недель.

Образцы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре (4—6) °С нс более 4-х недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температу ре (-18) °С.

Пробы зеленой массы рапса хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 дня: для длительного хранения пробы замораживают и хранят при (-18) °С.

Пробы семян подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре (0—1) °С. В некоторых случаях масло получают из семян рапса экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

Перед проведением анализа зеленую массу измельчают, а семена размалывают на электрической мельнице.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракции и очистка

9.1.1. Вода. 100 см³ отфильтрованной воды помещают в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 30 см³ смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему) и воронку интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний органический слой отделяют и фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Водную фазу экстрагируют указанной выше смесью еще дважды порциями по 25 см³. Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на роторном испарителе при температуре нс выше

151

30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси гсксан-этилацстат (8 : 2. по объему), раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 минуту и анализируют на содержание паклобутразола по 10.

9.1.2.    Почва. Образец воздушно-сухой почвы массой 25 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³. добавляют 125 см³ смеси ацетон-вода (8 : 2. по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватсль на 1 час. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Почву повторно экстрагируют 75 см³ указанной выше смеси в течение 30 минут при встряхивании и фильтруют. Измеряют объем объединенного экстракта и 1/5 его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

9.1.3.    Зеленая масса. Навеску (20 г) измельченного растительного материала помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, приливают 100 см³ смеси ацетон-вода (8 : 2. по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватсль на 40 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Остаток на фильтре промывают 50 см³ смеси ацетон-вода (8 : 2. по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и Va его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.4.    Семена. Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 50 см³ ацетонитрила и колбу помещают на аппарат для встряхивания на 40 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Растительный материал, оставшийся на фильтре, повторно экстрагируют 30 см³ ацетонитрила в течение 30 минут при встряхивании и суспензию фильтруют. Измеряют объем объединенного ацетонитрильного экстракта и Уг его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 10 см³ насыщенного ацетонитрилом гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию упаривают досуха на роторном испарителе при температуре нс выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.

9.1.5.    Масю. Образец масла массой 5 г переносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 50 см³ ацетонитрила и колбу

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств паклобутразола в воде, почве, зеленой массе, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2785—10

МУК 4.1.2785—10

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии (Л. 15. Дубовая, Л. М. Макеев).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

140

Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления 165—166 °С. Давление паров при 20 °С: 0.001 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_Gw log Р = 3.2. Растворимость (г/дм³) при 20 °С: вода - 0.026. н-гсксан - 10. дихлор метан - 100. ацетон - 110, метанол - 150. циклогексан - 180.

Вещество устойчиво к фотолизу и гидролиз) в кислой, нейтральной и щелочной средах.

В почвах паклобутразол разрушается очень медленно (в среднем DT5o= 180—360 дней): только в щелочных почвах (pH 8.8) этот процесс протекает быстрее (DTso < 42 дней).

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - 1 300— 2 000 мг/кг: острая дермальная токсичность (LD50) для крыс и кроликов - > 1 000 мг/кг: острая ингаляционная токсичность (LC») для крыс -3.2—4.8 мг/дм³ воздуха. Оказывает слабое раздражающее действие на слизисту ю оболочку глаз и кож> . LC» для рыб - 27.8 мг/дм³ (96 ч). Паклобутразол нетоксичен для птиц. пчел, дафний, водорослей.

Область применения

Паклобутразол - системный ретардант, обладающий также фунгицидными свойствами. Как ретардант активен на ряде плодовых, древесных. декоративных и зерновых культур. Препарат ингибирует вегетативный рост и увеличивает образование плодовых почек у некоторых плодовых культур, тормозит рост и уменьшает полегание зерновых культур. Помимо этого в небольших дозах он проявляет фунгицидный эффект в отношении возбудителей мучнистой росы и парши. Паклобутразол свободно передвигается по флоэме и ксилеме и поэтому активен как при опрыскивании растений, так и при внесении в почву.

Проходит регистрационные испытания в России в качестве ретарданта и фунгицида в составе смсссвых препаратов на посевах ярового рапса при норме расхода до 60 г д.в./га и двукратной обработке за сезон.

1. Метрологические характеристики метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и се составляющих) результатов измерений нс превышает значений, приведенных в табл. 1.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2.

142

МУК 4.1.2785—10

Таблица 1

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/дм3, мг/кг 1 Указатель точности (граница относительной погрешности), ±5, % Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости, <7„ % 11редел повторяемости, г,% 11редел воспроизводимости, R,% Вода от 0,001 до 0,01 вкл. 100 2,9 8 9 11очва от 0,02 до 0,1 вкл. 50 2,8 8 9 более 0,1 до 0,2 вкл. 25 2,5 7 8 Зеленая масса от 0,05 до 0,1 вкл. 50 2,9 8 10 более 0,1 до 0,5 вкл. 25 2,7 7 9 Семена от 0,02 до 0,1 вкл. 50 2,7 7 9 более 0,1 до 0,2 вкл. 25 2 Л 6 7 Масло от 0,05 до 0,1 вкл. 50 3,0 8 10 более 0,1 до 0,5 вкл. 25 2,6 7 8

Таблица 2

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 11редел обнаружения, мг/дм3 мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/дм3, мг/кг Полнота извлечения вещества, % Стандартное отклонение, S, % Доверительный интервал среднего результата, ± % Вода 0,001 0,001—0,01 91,3 2,6 ±2,5 Почва 0,02 0,02—0,2 88,7 3,6 ±3,3 Зеленая масса 0,05 0,05—0,5 86,1 4,1 ±3,8 Семена 0,02 0,02—0,2 84,8 3,3 ±3,1 Масло 0,05 0,05—0,5 86,0 3,4 ±3,2

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД). Контроль паклобутразола в матрицах осуществляется по

содержанию вещества после экстракции его из воды смесью гсксан-этилацетат (8 : 2. по объему), из почвы и зеленой массы рапса водным ацетоном, из семян и масла рапса ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешнвающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем.

Идентификация вещества проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Газовый хроматограф «Кристалл 2(Ю0М» ТИД (СКВ «Хроматэк». Россия)

Весы анал»ггнческис Sartorius 6110с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и пределом допустимой погрешности 0.0001 г Весы лабораторные Metier Р-160 с наибольшим пределом взвешивания до 160 г и пределом допустимой погрешности 0.005 г Набор гирь

Колбы мерные вместимостью 2-100-2.2-1000-2 Пипетки градуированные 1-1-2-1. 1-1-2-2.

1 -2-2-5. 1-2-2-10

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-54). Г. П-2-10-0.2 Цилиндры мерные 1-25: 1-50: 1-100; 1-500; 1-1000

Микрошприц МШ-1А

3.2. Реактивы

Аналитический стандарт паклобутра юла (CAS 76738-62-0) с содержанием основного вещества 99.7 % (Сингента. Швейцария) Ацетон, квалификации чда Ацетонитрил, квалификации хч Вода дистиллированная или деионизированная н-Гексан. квалификации хч Калий углекислый, квалификации хч Калия перманганат, квалификации хч

Силикагель 60 (0.063—0.2 мм) для колоночной хроматографии (Мерк. Германия)

Стаканы химические вместимостью 50 и 5(Х) см³ ГОСТ 25336-82 Стекловата

Установка для перегонки растворителей с    ГОСТ 9737-93

дефлегматором    (ИСО 641—75)

Фильтры бумажные «красная лента».

обеззоленные    ТУ 6-09-2678—77

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 3.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019. а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение до.тжно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не до.тжно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование. опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия выполнения измерении

6.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

•    температура воздуха (20 ± 5) °С;

•    атмосферное давление (84—106) кПа;

•    относительная влажность воздуха не более 80 %.

146