Федеральная сдужба по напору к сфере защиты нрав потреби!еден и G.iaiонодучня чедовека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методические указания по методам контроля

Сборник

МУК 4.1.2593—10; 4.1.2595—10; 4.1.2673—10; 4.1.2674—10; 4.1.2680—2682—10; 4.1.2685—10; 4.1.2686—10; 4.1.2688—10; 4.1.2689—10; 4.1.2691—10

1

ББК51.21

M54

M54 Методические указания по методам контроля: Сборник.— М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2010.—179 с.

ББК 51.21

© Росно ipeona.i юр, 2010 © Федеральный цен ip гигиены н

эпидемиологии Росно ipeon ад юра, 2010 ¹

МУК 4.1.2691—10

7.6. Приготовление градуировочных растворов

7.6.1.    Исходный раствор ацетамиприда для градуировки (концентрация 100 мкг/ам³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.01 г ацетамиприда. растворяют в 50—70 см³ ацетонитрила, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Градуировочные растворы № 1—5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.6.2.    Растворы № 1 ацетамиприда для градуировки (концентрация 5 мкг/елг).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.5 см³ исходного раствора ацетамиприда с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.6.1). доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике нс более месяца.

7.6.3.    Рабочие растворы №№ 2- 5 ацетамиприда для градуировки (концентрация 0,05—0,5 мкг/см³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1.0. 2.0. 5.0 и 10 см³ раствора № 1 ацетамиприда с концентрацией 5 мкг/см³ (п. 7.6.2). доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4 тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2—5 с концентрацией ацетамиприда 0.05. 0.1, 0.25 и 0.5 мкг/см³. соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более 5-ти дней.

7.7. Приготовление растворов внесения для оценки полноты извлечения ацетамиприда из образцов

7.7.1.    Исходный раствор (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.01 г ацетамиприда. растворяют в 50—70 см³ изопропилового спирта, доводят им же до метки, тщательно перемешивают.

7.7.2.    Основной раствор ацетамиприда для внесения (концентрация 10 мкг/см³).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10.0 см³ исходного раствора ацетамиприда с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.7.1). доводят до метки изопропанолом, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике нс более месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдсно».

МУК 4.1.2691—10

7.8. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площадей пиков (мкВ*сек) от концентрации ацетамиприда в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки №№ 2—5.

В инжектор хроматографа вводят 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.1. Осуществляют нс менее 3-х параллельных измерений.

Устанавливают площади пиков (в мкВ*сек) ацетамиприда.

Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значение площадей отличается более, чем на 10% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы дтя градуировки.

7.9.    Подготовка колонки с силикагелем для очистки жстрактов

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см. внутренним

диаметром 10—12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 см³ смеси гсксан-этилацетат (1 : 1. по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают смесями гсксан-этилацетат в объемном соотношении 1 : 9. затем 1 : 3. порциями по 30 см³, скорость прохождения растворителя 1—2 капли в секу нду. Колонка готова к работе.

7.10.    Проверка хроматографического поведения ацетамиприда на

колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.2 см³ раствора № 1 ацетамиприда с концентрацией 5 мкг/см³ (п. 7.6.2). упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани нс выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 5 см³ смеси гексан-этилацетат (1:3. по объему), помещая на ультразвуковую баню на 30—40 сек. и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.9. Колбу обмывают дважды этой же смесью растворителей, порциями по 5 см³, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку -1—2 капли в сек. Промывают колонку 90 см³ смеси гсксан-этилацетат (1 : 3. по объему), элюаты отбрасывают.

Затем колонку промывают 100 см³ смеси гсксан-этилацетат (1:9, по объему) со скоростью 1—2 капли в сек. Фракционно (по 10 см³) от-

173

МУК 4.1.2691—10

бирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ. анализируют содержание ацетамиприда по п. 9.3.1.

Фракции, содержащие ацетамиприд. объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате. определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: Проверку хроматографического поведения ацетамиприда следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами 10852—86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». 10583—76 «Рапс. Требования при заготовках и поставках». 52062—2003 «Масло растительное. Правила приемки и методы отбора проб». 8988—2002 «Масло рапсовое. Технические условия». «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микро количеств пестицидов (№ 2051—79 от 21.08.79).

Семена подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температу ре не более 6-ти месяцев. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в темноте.

Перед анализом образцы семян измельчают.

9. Выполнение определения

9.1.    Семена рапса

9.1.1.    Экстракция

Образец измельченных семян массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, вносят 50 см³ ацетонитрила и помещают на встряхиватсль на 1 час. Полученный экстракт (надосадочная жидкость) фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр «красная лента». Осадок возвращают в коническу ю колбу и повторяют экстракцию дополнительной порцией ацетонитрила объемом 30 см³, выдерживая на встряхиватслс 20 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера с по-174

МУК 4.1.2691—10

мошью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр «красная лента», осадок на фильтре промывают 10 см³ ацетонитрила. Объединенный отфильтрованный экстракт подвергают очистке по п. 9.1.2.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Объединенный отфильтрованный экстракт, полученный по п. 9.1.1 или 9.2.1. переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 30 см³ гексана (насыщенного ацетонитрилом), интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническу ю колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки, используя 25 см³ гексана (насыщенного ацетонитрилом). Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 см³. упаривают досуха на ротационном испарителе при температу ре водяной бани не выше 35 °С и подвергают очистке на колонке с силикагелем по п. 9.1.3.

9.1.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Остаток, полученный по п. 9.1.2. находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 5 см³ смеси гексан-этилацетат (1:3. по объему), помещая на ультразвуковую баню на 1 мин. Затем раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.9. Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (1 : 3. по объему) порциями по 5 см³, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку -1—2 капли в сек. Промывают колонку 90 см³ смеси гексан-этилацетат (1 : 3. по объему), элюат отбрасывают.

Ацстамиприд элюируют с колонки 100 см³ смеси гексан-этилацетат (1 : 9. по объему) со скоростью 1—2 капли в сек. собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 250 см³, раствор упаривают досуха при температу ре нс выше 35 °С. подвергают очистке окислением и перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.1.4.

9.1.4. Очистка экстракта окислением и перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Остаток в колбе, полученный после упаривания по п. 9.1.3 растворяют в 10 см³ ацетонитрила, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, вносят в воронку 30 см³ деионизованной воды, предварительно ополоснув ими колбу, где находилась проба, колбу дополнн-

175

МУК 4.1.2691—10

тельно обмывают 20 см³ воды, которую также переносят в воронку. Вносят в воронку 10 см³ 4 N раствора серной кислоты, доводя pH до 1—2 (контроль по индикаторной бумаге).

Добавляют в воронку 10 см³ 0,1 %-ного водного раствора марганцовокислого калия (если раствор при перемешивании обесцвечивается, добавляют дополнительно 2—3 см³ 0.1 %-ного водного раствора марганцовокислого калия), встряхивают 1 мин. Затем в делительную воронку с водным раствором вносят 15 см³ дихлормстана. интенсивно встряхивают в течение 1 мин. после полного разделения фаз нижний дихлор-метановый слой переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 см, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (толщиной около 1 ем), помещенный на бумажном фильтре в химической воронке. Экстракцию ацетамипрнда повторяют еще дважды порциями дихлормстана объемом 15. затем 10 см³. Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10—15 мин. Следы ди-хлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества.

Объединенный дихлормстановый экстракт, пропущенный через слой сульфата натрия, упаривают, остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы, анализируют содержание ацетамипрнда по п. 9.3.1.

9.2. Масло рапса

9.2.1. Экстракция

Образец масла массой 10 г помещают в делительную воронку вместимостью 250 см³, растворяют его в 50 см³ гексана, вносят 30 см³ ацетонитрила (насыщенного гексаном) и интенсивно встряхивают в течение 5 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в коническую колбу вместимостью 250 см³. Экстракцию повторяют дважды дополнительными порциями ацетонитрила (насыщенного гексаном) объемом 20 ем³. Объединенный отфильтрованный экстракт подвергают очистке по п. 9.1.2. 9.1.3. затем 9.1.4.

Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны

Рабочая длина волны: 248 нм

Хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм. внутренним диаметром 4.6 мм. содержащая Zorbax SB С8. зернением 5 мкм

176

МУК 4.1.2691—10

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (30 : 70. по объему)

Скорость потока элюента: 1,0 см²/мин Объем вводимой пробы: 20 мм²

Ориентировочное время выхода ацетамиприда: 8.4—8.7 мин Линейный диапазон детектирования 1—10 нг Проб) вводят в инжектор хроматографа нс менее двух раз. Устанавливают площади пиков (в мкВ*сск) вещества, находят среднее значение. с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию ацетамиприда в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0.5 мкг/см², разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4. не более чем в 50 раз.

10. Обработка результатов анализа

Содержание ацетамиприда в пробе (X. мг/кг) рассчитывают по формуле:

v ^cv А =-.    где

///

С - концентрация ацетамиприда. найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см²;

V-объем экстракта, подготовленного для хроматографирования. см²; т - масса анализируемого образца, г.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми нс превышает предела повторяемости (1):

A'i,A'₂ - результаты параллельных определений, мг/кг; г значение предела повторяемости (таблица 1). при этом г = 2.8а_г. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

177

МУК 4.1.2593—10; 4.1.2595—10; 4.1.2673—10; 4.1.2674—10, 4.1.2680—2682—10; 4.1.2685—10; 4.1.2686—10; 4.1.2688—10; 4.1.2689—10; 4.1.2691—10

Содержание

Определение остаточных количеств Флурохлоридона в почве, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2593—10........................................................4

Определение остаточных количеств имидаклоприда в томатном соке методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2595—10.......................................................21

Определение остаточных количеств дитнанона в ботве и клубнях карто(|юля методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2673—10.......................................................35

Определение остаточных количеств бифентрнна в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2674—К).......................................................47

Определение остаточных количеств метаза хлора в капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2680—10...................................................................................59

Определение остаточных количеств пиклорама в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2681—10.......................................................71

Определение остаточных количеств тстраконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2682—10.......................................................87

Измерение концентраций топрамезона в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2685—10.................................................................................101

Определение остаточных количеств Бста-цифлутрина в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной

газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2686—10.........................115

Определение остаточных количеств азоксистробина в зеленой массе, семенах и масле рапса методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2688—10................................135

Определение остаточных количеств димстоморфа в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2689—10................................149

Определение остаточных количеств ацетамиприда в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2691—10.....................................................163 ²

МУК 4.1.2691—10

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|>ерс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

02 авгу ста 2010 г.

Дата введения: 1 октября 2010 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств ацетамнпрнда в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2691—10

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций ацетамнпрнда в семенах и масле рапса в диапазоне 0.01 -0.1 мг/кг.

(£)-^^-[(6-хлор-3-пиридил)метил)-Л^-циано-Л'*-метилацетамиприд

(ШРАС)

ChL    CN

\ /

С = N

ChLrsT

'СН₃

C,oH„ClN, Мол. масса 222.7

Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления: 98.9 °С. Давление паров при 25 °С < 1 * 10 ² мПа. Коэффициент распределения н-октанол-вода Kq_W logP = 0.80 (25 °С). Хорошо растворим в ацетоне, метаноле, этаноле, дихлорметане. хлоро(1юрме. ацетонитриле и

МУК 4.1.2691—10

тстрагидрофуранс. растворимость в н-гсксанс - 6.5 мг/дм³. Растворимость в воде при 25 °С - 4.25 г/дм³. Стабилен в буферных растворах при pH 4. 5. 7. медленно разлагается при pH 9. Устойчив к воздействию солнечного света. Является слабым основанием. рКа - 0.7.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD ») для крыс - 217 мг/кг (самцы). 146 мг/кг (самки): острая дермальная токсичность (LD so) хтя крыс > 2000 мг/кг. острая ингаляционная токсичность (LKso) для крыс > 290 мг/м³(4 часа).

Область применения препарата

Ацетамиприд - инсектицид системного, контактного и кишечного действия из группы нсоникотиноидов. эффективно подавляет развитие тли. бслокрылкн. клопов, трипсов и жесткокрылых в посевах многих культур, особенно овощных и плодовых.

ВМДУ ацетамипида в семенах и масле рапса - 0.01 мг/кг.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и еб составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 нс превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±6, % Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости. <т„% 11редел повторяемости, г, % 11редел воспроиз-ВОДИМОСТИ, R, % Семена рапса от 0,01 до 0,1 50 5,0 14 17 Масло рапса от 0,01 до 0,1 50 5,8 16 19

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (п = 20) приведены в таблице 2.

МУК 4.1.2691—10

Хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм. внутренним диаметром 4.6 мм. содержащая Zorbax SB С8. зернением 5 мкм Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50—100 мм³ Центрифуга

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76. требования элсктробсзопасностн при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79. а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожароту шения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельнодопустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию нс ниже лабо ра нта-исс ледо вате ля. с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности нс более 80 %.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов. 170

МУК 4.1.2691 — 10

градуировочных растворов, растворов внесения, подвижной фазы для ВЭЖХ. кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка препаративной колонки для очистки экстрактов, проверка хроматографического поведения вещества на ней.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пснтоксидом фосфора нс менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2. н-Гексан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор. пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод. перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.3. Хлористый метилен и этилацетат

Каждый растворитель промывают последовательно 5 %-ным водным раствором углекислого натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным углекислым калием и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок нс менее 30.

7.2. Приготовление -4 N раствора серной кис:юты

В мерную колбу вместимостью 500 см³ помещают 200—300 см³ деионизованной воды, вносят 56 см³ концентрированной серной кислоты. доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.3. Приготовление 0,1 % раствора марганцовокислого калин

В мерную колбу вместимостью 5(Х) см³ помещают 0.5 г марганцовокислого калия, доводят водой до метки, перемешивают.

7.4. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 300 см³ ацетонитрила. вносят 700 см³ дсион изо ванной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.5. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.4) при скорости подачи растворителя 1 см7мин не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.

171

1

2