Федеральная сдужба по напору к сфере защиты нрав потреби!еден и G.iaiонодучня чедовека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методические указания по методам контроля

Сборник

МУК 4.1.2593—10; 4.1.2595—10; 4.1.2673—10; 4.1.2674—10; 4.1.2680—2682—10; 4.1.2685—10; 4.1.2686—10; 4.1.2688—10; 4.1.2689—10; 4.1.2691—10

1

ББК51.21

M54

M54 Методические указания по методам контроля: Сборник.— М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2010.—179 с.

ББК 51.21

© Росно ipeona.i юр, 2010 © Федеральный цен ip гигиены н

эпидемиологии Росно ipeon ад юра, 2010

2

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха 20 ± 5 °С и относительной влажности нс более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7. /. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку’ (Acquit)’ ВЕН С18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0.1—0.2 см³/мин) до стабилизации ну левой линии.

7.2. Приготовление растворов

7.2.    1. 0,005 Мраствор ортофосфорной кислоты: 0.5 ±0.01 г 98 % ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм³, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.

7.2.2.    Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50 по объему. используя мерные цилиндры.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.3.1.    Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см³: точную навеску димстоморфа (50 ± 0.5 мг). переносят в мерную колбу на 100 см . растворяют в ацетонитриле и доводят объем ацетонитрилом до метки).

Градуировочные растворы с концентрациями 0.01. 0.02. 0,05 и 0.1 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0.005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50).

7.3.2.    Раствор № I с концентрацией 0,1 мкг/см³: в мерную колбу на НК) см³ пипеткой вносят 1 см³ основного раствора и доводят до метки раствором подвижной фазы (5 мкг/см³). Затем 10 см³ полученного раствора пипеткой переносят в мерную колбу на 100 см³ и вновь доводят до метки раствором подвижной фазы (0.5 мкг/см³). После этого в мерную колбу на 100 см³ вносят 20 см³ полу ченного после второго разбавления раствора и доводят до метки раствором подвижной фазы (0.1 мгк/см³).

7.3.3.    Раствор № 2 с концентрацией 0,05 мкг/см³: в мерну ю колбу на 100 см³ вносят пипеткой 50 см³ раствора № 1 и доводят до метки раствором подвижной фазы.

156

МУК 4.1.2689—10

7.3.4.    Раствор М3 с концентрацией 0,02мкг/см³: в мерную колбу на 100 см³ вносят пипеткой 40 см³ раствора № 2 и доводят до метки раствором подвижной фазы.

7.3.5.    Раствор М 4 с концентрацией 0,01 мкг/см³’. в мерную колбу на 100 см³ вносят пипеткой 20 см³ раствора № 2 и доводят до метки раствором подвижной фазы.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—I °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения диметоморфа в яходах винограда и виноградном соке используют ацетонитрильные растворы вещества. Напсример. раствор внесения с концентрацией диметоморфа 0.1 мкг/см³ готовят из основного раствора с концентрацией 0.5 мг/см³ методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом аналогично п. 7.3.2.

7.4. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика -концентрация диметоморфа в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм³ градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, нс менее 4-х точек по диапазон) измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации диметоморфа в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

С = KS. где

S- площадь пика градуировочного раствора. Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не хуже 0.99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

157

С - аттестованное значение массовой концентрации димстоморфа в градуировочном растворе.

С_к - результат контрольного измерения массовой концентрации димстоморфа в градуировочном растворе.

^чсонтр - норматив контроля градуировочного коэфицнента. %. (>iccmp= 10 % при Р = 0.95).

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб винограда производят в соответствии с ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. Технические условия». Пробы ягод винограда хранят до анализа в морозильной камере при температуре нс выше -18 °С в течение 6 месяцев. Пробы виноградного сока хранят в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение недели.

9 Проведение определения

9.1. Определение димстоморфа в виноградном соке Перед проведением анализа пробу отфильтрованного через бумажный фильтр виноградного сока объёмом 10 ± 0.05 см³ пропускают через концентрирующий патрон Диапак С16. Фильтрат отбрасывают. Диме-томорф элюируют 10 см³ смеси ацетонитрила и воды в соотношении 4:1. Элюат собирают, переносят в тефлоновую центрифужную пробирку и дальнейшую обработку проводят по п. 9.2.

10.2 Определение диметоморфа в ягодах винограда Гомогенизированные пробы ягод винограда массой 10 ±0.1 г помешают в тефлоновую центрифужную пробирку вместимостью 50 см³, прибавляют 2 см³ воды. 8 см³ ацетонитрила. 0.1 см³ ледяной уксусной кислоты. 4 г безводного сульфата магния и 1 г уксуснокислого натрия. Пробирку плотно закрывают пробкой, встряхивают на аппарате в течение 15 минут и центрифугируют при скорости 8000 об/мин в течение 10 минут. Измеряют объем супернатанта и количественно переносят его в другую тефлновую центрифужную пробирку. Прибавляют силикагель и безводный сульфат магния из расчета 50 мг силикагеля и 150 мг сульфата магния на 1 см³ супернатанта. Пробирку плотно закрывают пробкой. встряхивают на аппарате в течение 15 минут и центрифугируют при скорости 8000 об/мин в течение 10 минут. Количественно отбирают с помощью шприца верхний ацетонитрильный слой, переносят его в мерную колбу вместимостью 10 см³ и доводят объем до метки 0.005 М фосфорной кислотой. 10 мм³ полученного раствора вводят в хроматограф. 158

МУК 4.1.2689—10

10.3. Условия хроматографирования Ультраэффективный жидкостной хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (2.1 х 100) мм. 1,7 мкм (Waters). Температура колонки 30 ± 1°С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0.00$ М ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50. Скорость потока элюента: 0.2 см³/мин. Рабочая длина волны УФ-детсктора 245 нм. Объем вводимой пробы 10 мм³.

Время удерживания /s-диметоморфа 3.2 ± 0.1 мин.

Время удерживания Z-диметоморфа 4.5 ± 0.1 мин.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в интервале концентраций 0.01—0.1 мкг/см³.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки. содержание диметоморфа в ягодах винограда и виноградном соке (X. мг/кг) вычисляют по формуле:

(Si +S%) - сумма площадей пиков изомеров диметоморфа в анализируемой пробе, мм² (AU);

К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения градуировочной зависимости (мкг/см³: мм²);

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа. см³;

Р - навеска анализируемого образца, г, для виноградного сока -объём в см³;

/- коэффициент извлечения диметоморфа = 100/полноту определения (приведенную в табл. 2. например, для ягод винограда 100/88.7= 1,13). '

Содержание остаточных количеств диметоморфа в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор диметоморфа 0.1 мкг/см³. разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

159

11. Оценка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми нс превышает предела повторяемости (1).

2-1*, -100

(Xi+X₂)

Л'/, Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (г = 2.8ст_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(Л' ± Д) мг/кг при вероятности Р = 0.95.

где Л' - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг:

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

А = 6Х/100.

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0.01 мг/кг*. где *-0.01 мг/кг - предел обнаружения димстоморфа в вннграде).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

МУК 4.1.2689—10

13.2.    Плановый внутри-лабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

С₀⁼ Дог⁺ А*.х s

где ±Л_лЛ(± Д,х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг: при этом:

Д_л = ± 0.84Д

где Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

Д = б • Х/100,

б - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К=Х'-Х-С₀.

где - X' X, С_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испыту емом образце, концентрация добавки. соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

tf = -M.r+4.v .    О)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К). Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3.    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

161

МУК 4.1.2593—10; 4.1.2595—10; 4.1.2673—10; 4.1.2674—10, 4.1.2680—2682—10; 4.1.2685—10; 4.1.2686—10; 4.1.2688—10; 4.1.2689—10; 4.1.2691—10

Содержание

Определение остаточных количеств Флурохлоридона в почве, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2593—10........................................................4

Определение остаточных количеств имидаклоприда в томатном соке методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2595—10.......................................................21

Определение остаточных количеств дитнанона в ботве и клубнях карто(|юля методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2673—10.......................................................35

Определение остаточных количеств бифентрнна в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2674—К).......................................................47

Определение остаточных количеств метаза хлора в капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2680—10...................................................................................59

Определение остаточных количеств пиклорама в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2681—10.......................................................71

Определение остаточных количеств тстраконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2682—10.......................................................87

Измерение концентраций топрамезона в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2685—10.................................................................................101

Определение остаточных количеств Бста-цифлутрина в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной

газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2686—10.........................115

Определение остаточных количеств азоксистробина в зеленой массе, семенах и масле рапса методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2688—10................................135

Определение остаточных количеств димстоморфа в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2689—10................................149

Определение остаточных количеств ацетамиприда в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2691—10.....................................................163

3

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств диметоморфа в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

МУК 4.1.2689—10

ББК 51.21

060

060 Определение остаточных количеств димстоморфа в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические у катания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотрсбнадюра.

2010.—14 с.

1.    Разработаны сотрудниками Всероссийского НИИ защиты расiспин (В. И. Долженко. И. А. Цибульская. И. К. Журкович. И. В. Луговкина, Н. Г. Ковров).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическом) нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 2 ав1уста 2010 г.

4.    Введены в действие с 1 октября 2010 г.

5.    Введены впервые.

МУК 4.1.2689—10

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|>ерс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

02 августа 2010 г.

Дата введения: 1 октября 2010 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств днметоморфа в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2689—10

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в ягодах и соке винограда массовой концентрации днметоморфа в диапазоне концентраций 0.01—0.1 мг/кг.

Действующее вещество: Димстоморф.

Структурная формула:

а>

Мол. масса: 387.9 Брутто формула: C21H22CINO.1

151

(£,2)-4-[3-(4-хлорофенил)-3-(3,4-диметоксифснил)акрилоил1морфо-лин (IUPAC)

(А',/)-4-|3-(4-.хлорофснил)-3-(3.4-димстоксифенил)-1-оксо-2-пропс-нил] морфолин (CAS)

Смесь изомеров представляет собой бесцветные кристаллы с температурой плавления 125.2—149.2 °С. (Е)-иэомер имеет температу ру плавления 136.8—138.3 °С. давлением паров 9.7 х К)⁴ мРа (25 °С). (Z)-изомер имеет температуру плавления 166.3—168.5 °С. давлением паров 1.0 X 10 ³ мРа (25 °С).

Коэффициент piicпределения в системе н-октанол-вода К,_лч lgP = 2.63 для (Е)-изомсра: 2.73 для (Z)-H30MCpa (20 °С). Растворимость в воде 81.1 (pH 5). 49.2 (pH 7). 41.8 (pH 9) (мг/дм³. 20 °С).

Растворимость в органических растворителях (мг/дм³. 20 °С): н-гск-сан - 0.11; толуол - 49.5: дихлормстан - 461: метанол - 39: ацетон - 100: этила цетат - 48.3.

Гидролитически и термически стабилен в нормальных условиях. (Е)- и (Z)-inoMep переходят друг в друга на свету.

Краткая токсикологическая характеристика: LD50 для крыс 3500— 4300. мышей 3700—5000 мг/кг. Острая кожная активность для крыс LD50 > 5000 мг/кг. Не ирритант для кожи и глаз (кролики). Ингаляционная активность LC50 > 4.2 мг/дм³. LD*» для пчёл > 100 мкг/особь.

Область применения: локальный системный фунгицид, ингибитор образования клеточной стенки грибного оомицста. ингибитор роста и спороношсния грибов.

Гигиенические нормативы: ВМДУ димстоморфа в винограде

0.5 мг/кг.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0.95 нс превышает значений, приведенных в таблице 1. для соответствующих диапазонов концентраций.

МУК 4.1.2689—10 Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Норматив точности Ораницм относительной погрешности), ± б, % 1 Указатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), о„ % Предел повторя емости, г, % Предел воспроизводимости, R, % Ягоды винограда 0,01—0,10 £ 50 6 16,6 28 Виноградный сок 0,01—0,10 £50 7 19,4 28

Таблица 2

Полина извлечения диметоморфа, стандартное отклонение, доверите. 1Ы1ЫЙ ши ерши среднею результата для п = 20, Р = 0,95

Анализируемый объект 11редел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых кон-цен-траций. мг/кг Среднее значение определения. % Стандартное отклонение, S,% Доверительный интервал среднего результата. ±% Ягоды винограда 0,01 0,01—0,10 88,7 7,5 15 Виноградный сок 0,01 0,01—0,10 84,8 7,7 15,5

2. Метод измерения

Методика основана на определении диметоморфа методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов ацетонитрилом в присутствии ацетатного буфера, насыщенного сульфатом магния, и обеспечивающего разделение водной и органической фаз. и очистки ацетонитрильного экстракта силикагелем с помощью дисперсионной твердофазной экстракции при одновременном удалении воды безводным сульфатом магния.

Идентификация диметоморфа проводится по времени удерживания. количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

153

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерения Жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ детектором. снабженном дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки

Весы аналитические ВЛА-200    ГОСТ    24104—2001

Весы технические ВЛКТ-500    ГОСТ 24104-80

Колбы мерные на 10. 25. 50. 100 см³    ГОСТ 23932-90

Микродозаторы Ленпипст переменного объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см³

Пипетки градуированные    ГОСТ 29227-91

Цилиндры мерные на 50 и 100 см³    ГОСТ 23932-90

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы и материалы Ацетонитрил для ВЭЖХ. «В-230НМ» или хч

Вода бидистиллированная, деионизированная Димстоморф с содержанием основного компонента 99.7 % (Shell Research Limited)

Кислота ортофосфорная. хч Кислота уксусная, ледяная Магнии сернокислый безводный, хч Натрий уксуснокислый, ч Силикагель. Merck 1.09385.1000 Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0.005 М НЗР04 в соотношении 50 : 50

Допускается использование реактивов квалификацией нс ниже указанных.

3.3. Вспомогательные устройства и материи, im Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (100 х 2.1) мм. 1.7 мкм (Waters)

Аппарат для встряхивания Воронки лабораторные В-75-110 Бидистиллятор

154

МУК 4.1.2689—10

Концентрирующие патроны Диапак С16 (БиоХимМак)

Пробирки с притертыми пробками на 10. 20 см³

Фильтры бумажные «красная лента»

Центрифуга ОПн-8УХЛ4.2 Шприц медицинский с разъемом Льюера.

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками нс хуже указанных.

4. Требования безопасности

4.1.    При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005. ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробез-опасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

5. Требования к* квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия: