Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

21 страница

258.00 ₽

Купить МУК 4.1.2550-09 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации глифосата в семенах рапса в диапазоне 0,15 - 1,5 мг/кг и в масле рапса в диапазоне 0,10 - 1,0 мг/кг.

 Скачать PDF

Оглавление

1. Метрологическая характеристика метода

2. Метод измерений

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

     3.1. Средства измерений

     3.2. Реактивы

     3.3. Вспомогательные устройства, материалы

4. Требования безопасности

5. Требования к квалификации операторов

6. Условия измерений

7. Подготовка к выполнению измерений

     7.1. Очистка органических растворителей

     7.2. Приготовление 0,5 н раствора соляной кислоты

     7.3. Приготовление 1 М раствора гидроксида натрия

     7.4. Приготовление 0,1 н раствора калия фосфорнокислого однозамещенного (рН 4,5)

     7.5. Приготовление 0,025 М раствора тетраборнокислого натрия (рН 9,0)

     7.6. Приготовление 0,001 М раствора 9-флуоренилметилхлорформиата

     7.7. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

     7.8. Кондиционирование колонки

     7.9. Приготовление градуировочных растворов глифосата

     7.10. Установление градуировочной характеристики

     7.11. Подготовка анионообменной смолы Даукс 1х8 и колонки

     7.12. Подготовка катионообменной смолы Дауэкс 50Wх2 и колонки

     7.13. Проверка хроматографического поведения глифосата на колонке с Дауэкс 1х8

8. Отбор и хранение проб

9. Выполнение определения

     9.1. Экстракция глифосата

     9.2. Очистка на ионообменных колонках

     9.3. Дериватизация

     9.4. Условия хроматографирования

10. Обработка результатов анализа

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

12. Оформление результатов

13. Контроль качества результатов измерений

14. Разработчики

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации    _

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств глифосата в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2550—09

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств глифосата в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2550—09

МУК 4 Л .2550—09

7.2. Приготовление 0,5 н раствора соляной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1 ООО см3, содержащую 200— 300 см3 деионизованной воды, вносят 41 см3 концентрированной НС1, перемешивают, доводят объём до метки деионизованной водой и перемешивают.

Растворы соляной кислоты других концентраций готовят из 0,5 н. раствора НС] соответствующим разбавлением деионизованной водой.

7.2. Приготовление 1Мраствора гидроксида натрия 40 г NaOH помещают в мерную колбу вместимостью 1 000 см3, добавляют 500—600 см3 деионизованной воды, перемешивают до полного растворения вещества, охлаждают раствор до комнатной температуры, доводят объём водой до метки и перемешивают.

7.4. Приготовление 0,1 н раствора калия фосфорнокислого однозамещенного (pH 4,5)

13,56 г КН2Р04 помещают в мерную колбу вместимостью 1 000 см3, добавляют 500—600 см3 деионизованной воды, перемешивают до полного растворения вещества, доводят объём водой до метки и перемешивают. Кислотность раствора контролируют с помощью иономера. При необходимости доводят pH раствора до 4,5 с помощью 1 М Н3Р04 или 1 М NaOH.

7.5. Приготовление 0,025 Мраствора тетраборнокислого натрия (pH 9,0)

950 мг Na2B407 х Ю Н20 помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 50—60 см3 деионизованной воды, перемешивают до полного растворения вещества, доводят объём водой до метки и перемешивают. Щёлочность раствора контролируют с помощью иономера. При необходимости доводят pH раствора до 9,0 с помощью 0,5 н. НС1 или 1 М NaOH.

7.6. Приготовление 0,001 Мраствора 9-флуоренилметилхлорформиата

31,8 мг 9-флуоренилметилхлорформиата помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 50—60 см3 ацетона, перемешивают до полного растворения вещества, доводят объём ацетоном до метки и перемешивают.

МУК 4.1.2550—09

7.7. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 ООО см3 помещают 350 см3 ацетонитрила, 650 см3 0,1 М раствора КН2Р04 (п. 7.4), перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.8. Кондиционирование колонки

Промывают колонку для ВЭЖХ 20 см3 смеси ацетонитрил-вода (1 : 1, по объему), а затем подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 7.7) при скорости подачи растворителя 1,0 см3/мин до установления стабильной базовой линии.

7.9. Приготовление градуировочных растворов глифосата

7.9.1.    Исходный раствор глифосата для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 1 000 см3 помещают 100 мг глифосата, растворяют в 400—500 см3 деионизованной воды, доводят объём водой до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре 2—4 °С не более одного месяца.

7.9.2.    Раствор глифосата М 1 для градуировки (концентрация 10мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 смисходного раствора глифосата с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 7.9.1), доводят водой объём до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов М® 2—5.

Для приготовления проб семян с внесением при оценке полноты извлечения глифосата из исследуемых образцов используют водный раствор глифосата с концентрацией 10 мкг/см3.

Для приготовления проб масла с внесением при оценке полноты извлечения глифосата из исследуемых образцов используют растворы глифосата в 80 %-м ацетоне с концентрациями 10 и 100 мкг/см3.

Градуировочный раствор № 1 и растворы для фортификации хранят в холодильнике при температуре 2—4 °С не более одной недели.

1.9.3.    Рабочие растворы ММ2—5 глифосата для градуировки (концентрация 0.01—0,10мкг/см3). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 см3 градуировочного раствора № 1 глифосата с концентрацией 10 мкг/см3 (п. 7.9.2), доводят объём деионизованной водой до метки, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№2—5 с концентрацией глифосата 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/см3 соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

11

МУК 4.1.2550—09

7.10. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую зависимость высоты пика (мм) от концентрации глифосата в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В градуированные пробирки вместимостью 10 см3 вносят по 1,5 см3 рабочих стандартных растворов глифосата с концентрациями 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/см3 и упаривают их досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1,5 см3 0,025 М раствора тетрабората натрия и подвергают дериватизации по п. 9.3.

В инжектор хроматографа вводят по 50 мм3 полученных растворов флуорогенного производного глифосата и анализируют по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации.

7.77. Подготовка анионообменной смолы Дауэкс 1x8 и колонки В химический стакан вместимостью 2000 см3помещают 100 г аиио-нообменной смолы Дауэкс 1 * 8 (СГ-форма), 1 000 см3 0,5 н. НС1 и перемешивают суспензию в течение 10 мин на магнитной мешалке. После 30-минутного отстаивания декантируют надосадочную жидкость, оставшуюся суспензию смолы фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Смолу на фильтре промывают деионизованной водой до тех пор, пока pH фильтрата не достигнет pH деонизованной воды.

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм вставляют тампон из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г подготовленного анионита Дауэкс 1x8 (СГ-форма) в 50 см3 деионизованной воды. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и вводят в колонку 1 смводного раствора глифосата с концентрацией 10 мкг/см3. Колонку последовательно промывают 20 см3 деионизованной воды, 200 см3 0,5 н. НС1 и 250 см3 деионизованной воды со скоростью 5 см3/мин, после чего она готова к работе.

7.72. Подготовка катионообменной смолы Дауэкс 50W*2 и колонки В химический стакан вместимостью 2 000 см3помещают 100 г катионообменной смолы Дауэкс 50Wx2 (Н+-форма), 1 000 см3 0,25 н. НС1 и перемешивают суспензию в течение 10 мин на магшшюй мешалке. После 30-минутного отстаивания декантируют надосадочную жидкость, оставшуюся суспензию смолы фильтруют на воронке Бюхнера через

МУК 4.1.2550—09

бумажный фильтр. Смолу на фильтре промывают деионизованной водой до тех пор, пока pH фильтрата не достигнет pH деонизованной воды.

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм вставляют тампон из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г подготовленного катионита Дауэкс 50W*2 (Н+-форма) в 50 см3 деионизованной воды и дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Затем колонку последовательно промывают 200 см3 0,25 н. НС1, 200 см3 деионизованной воды и 50 см3 0,03 н. НС1 со скоростью 5 см3/мин, после чего она готова к работе.

7.73. Проверка хроматографического поведения глифосата на колонке с Дауэкс 1x8

В подготовленную по п. 7.11 колонку с Дауэкс 1 * 8 вводят 5 см3 водного раствора глифосата с концентрацией 0,4 мкг/см3, подщелоченного 1 М NaOH до pH 11,0. Колонку промывают 200 см3 деионизованной воды со скоростью 5 см3/мин и элюат отбрасывают. Затем через колонку последовательно пропускают 50 см3 0,01 н. НС1 и 100 см3 0,03 н. НС1 со скоростью 2 см3/мин. Фракционно (по 10 см3) отбирают элюат, упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °С и эту операцию повторяют трижды с последовательно вносимыми 5 см3 порциями деионизованной воды для удаления следов кислоты. Остатки растворяют в 1,5 см3 0,025 М тетрабората натрия, подвергают дериватиза-ции по п. 9.3 и анализируют на содержание глифосата по п. 9.4.

Фракции, содержащие глифосат, объединяют и вновь анализируют по п. 9.4. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79 г.) и правилами, определенными ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приёмки и методы отбора проб» и ГОСТ 8988-77 «Масло рапсовое, ТУ».

Пробы семян высушивают до стандартной влажности и хранят в сухом проветриваемом помещении. Масло хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4—6°С. В некоторых случаях масло получают из семян рапса экстракцией органическими неполяр-

МУК 4.1.2550—09

ными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

Перед анализом образцы семян размалывают на мельнице.

9.Выполнение определения

9.1. Экстракция глифосата

9.1.1 . Семена. Навеску (10 г) размолотых семян рапса помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, приливают 125 см3 0,1 н НС1 и перемешивают в течение 30 мин на аппарате для встряхивания. Суспензию центрифугируют 10 мин при 5 000g. Надосадочную жидкость декантируют в мерный цилиндр, осадок повторно обрабатывают 50 см0,1н НС1, центрифугируют и полученный экстракт объединяют с первым. Отбирают 1/2 объёма раствора, эквивалентного 5 г образца, и переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3. Добавляют 30 см3 хлороформа и содержимое энергично встряхивают в течение

1    мин. После разделения слоев хлороформную фракцию отбрасывают. Водную фазу подщелачивают 1 М NaOH до pH 11,0 и центрифугируют 5 мин при 5 000 g. Супернатант декантируют в мерный цилиндр и доводят деионизованной водой до объема 100 см3. Дальнейшую очистку проводят по п. 9.2.

9.1.2. Масло. Навеску (5 г) масла помещают в делительную воронку вместимостью 100 см3, приливают 50 см3 0,1 н. НС1 и энергично встряхивают в течение 1—2 мин. Нижний водный слой отделяют, а масло повторно обрабатывают 30 см3 0,1 н НС1. Объединённые водные экстракты переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3, добавляют 50 см3 хлороформа и энергично встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев нижнюю хлороформную фракцию отбрасывают, а водную фазу подщелачивают 1 М NaOH до pH 11,0 и центрифугируют 5 мин при 5 000 g. Супернатант декантируют в мерный цилиндр и доводят деионизованной водой до объема 100 см3. Дальнейшую очистку проводят по п. 9.2.

9.2 Очистка на ионообменных колонках

Аликвоты экстрактов семян и масла объёмом 12 см3(из пп. 9.1.1 и 9.1.2) пропускают через колонку с Дауэкс 1*8 (п. 7.11) со скоростью

2    см/мин. Колонку последовательно промывают 200 см5 воды и 50 см0,01 и. НС1 со скоростью 5 см3/мин, которые отбрасывают. Глифосат элюируют 60 см3 0,03 н. НС1 со скоростью 2 см3/мин. Полученный элю-ат пропускают через колонку с Дауэкс 50W*2 (п. 7.12) со скоростью 2 см3/мин. Отбрасывают первые 5 см3 элюата и собирают в грушевид-

МУК 4.1.2550—09

ную колбу остальной элюат. Колонку промывают 10 см3 0,03 н. НС1 и элюат объединяют с ранее полученным. Объединенный элюат упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °°С, и эту операцию повторяют трижды с последовательно вносимыми 5 см3 порциями деионизованной воды для удаления следов кислоты. Сухой остаток экстракта рапсового масла растворяют в 6 см3, а семян в 9 см3 0,025 М раствора тетрабората натрия. Отбирают аликвоту раствора объёмом 1,5 см3, переносят в градуированную пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 10 см3 и подвергают дериватизации по п. 9.3.

9.3. Дериватюация

К 1,5 см3 приготовленного для дериватизации раствора глифосата (п. 7.10) или образца (п. 9.2) прибавляют 1,5 см3 0,001 М ацетонового раствора 9-флуоренилметилхлорформиата (п. 7.6) и содержимое хорошо перемешивают. Реакционную смесь выдерживают 20 мин при комнатной температуре, а затем трижды обрабатывают 2 см3 порциями диэти-лового эфира для удаления избытка флуорогенного реактива. К водному остатку добавляют деионизованной воды до объема 2,5 см3. 0,5 см3 водного раствора переносят в мерную пробирку вместимостью 5 см3, прибавляют 4,5 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 7.7), перемешивают и анализируют на содержание глифосата по п. 9.4.

9.4. Условия хроматографирования

Жидкостной хроматограф фирмы Altex, мод.322 (США) с флуоресцентным детектором фирмы Shimadzu, мод.КР-5301 (Япония).

Хроматографическая колонка стальная, 4 х 150 мм, заполненная Диасорб-130-Амин (7 мкм).

Подвижная фаза; ацетонитрил - 0,1 М раствор КН2РО4, pH 4,5 (35 : 65, по объему).

Скорость потока элюента: 1,0 см3/мин.

Температура колонки: комнатная.

Длина волны: Amax возбуждения 270 нм; Лтах эмиссии 313 нм.

Чувствительность детектора: 4.

Объем вводимой пробы: 50 мм3.

Время удерживания глифосата: около 9 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,03—1,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

15

МУК 4.1.2550—09

10. Обработка результатов анализа

Содержание глифосата рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

где

„ H{xAxV

Л. —    ■

Н0хт

X - содержание глифосата, мг/кг;

Н\ - высота пика образца, мм;

Н0 - высота пика стандарта, мм;

А - концентрация стандартного раствора глифосата, мкг/см3;

V- объём экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3; т - масса анализируемой части образца, г (для семян и масла - 0,6 г).

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

2х\Хх -^[±100 {Х.+Хг)


(1)


^ г, где


За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

ХиХ2 - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом г = 2,8аг. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

X ± А мг/кг при вероятности Р - 0,95, где

X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

А- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где

SxX

100

в - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

МУК 4.1.2550—09

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения»

<0,15* мг/кг для семян рапса.

< 0,10** мг/кг для масла рапса.

*0,15 мг/кг - предел обнаружения для семян рапса.

**0,10 мг/кг - предел обнаружения для масла рапса.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 « Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:

±АЯ % (±ДТ jp,) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Ая = ±0,84Д, где

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где

SxX

100

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

Kk = X'-X-~Сд> где

17

МУК 4Л .2550—09

X', Х,Сд - среднее арифметаческое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

2х|Лг|-*2|х100


£ R, где


(3)


Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Хи Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/юг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

14. Разработчики

Микитюк О. Д., ст. науч. сотр., канд. биол. наук; Назарова Т. А., науч. сотр., канд. биол. наук; Макеев А.М., зав. лаб., канд. биол. наук.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вя-земы, тел. 692-92-20.

18

МУК 4.1.2550—09

Приложение

Таблица

Полнота определения глифосата в модельных матрицах (п = 5)

Матрица

Внесено, мг/кг

Открыто, %

Доверительный интервал среднего, %

Семена

0,15

76,2

±3,5

0,30

78,8

±3,5

0,75

83,9

±3,3

1,50

85,8

±3,2

Масло

0,Ю

76,2

±3,6

0,20

80,7

±3,6

0,50

83,4

±3,2

1,00

87,5

±2,7

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств глифосата в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:    Методические указания.—М.:    Федеральный

центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.— 19 с.

1.    Разработаны ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений (Микитюк О. Д., Назарова Т. А., Макеев А.М.).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 июня 2009 г. № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 сентября 2009 г.

4.    Введены в действие с 1 декабря 2009 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

Определение остаточных количеств глифосата в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1,2550—09

Технический редактор А. В. Терентьева

Подписано в печать 18.12.09 Формат 60x88/16    Печ. л. 1,25

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5, 7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел./факс 952-50-89

МУК 4.1.2550—09

Содержание

1.    Метрологическая характеристика метода.............................................................5

2.    Метод измерений....................................................................................................6

3.    Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и

материалы................................................................................................................6

3.1.    Средства измерений........................................................................................6

3.2.    Реактивы...........................................................................................................7

3.3.    Вспомогательные устройства, материалы.....................................................7

4.    Требования безопасности.......................................................................................8

5.    Требования к квалификации операторов..............................................................9

6.    Условия измерений.................................................................................................9

7.    Подготовка к выполнению измерений..................................................................9

7.1.    Очистка органических растворителей............................. 9

7.2.    Приготовление 0,5 н раствора соляной кислоты........................................10

7.3.    Приготовление 1 М раствора гидроксида натрия......................... 10

7.4.    Приготовление 0,1 н раствора калия фосфорнокислого однозамещенного

(pH 4,5)..................................................................................................................10

7.5.    Приготовление 0,025 М раствора тетраборнокислого натрия (pH 9,0).....10

7.6.    Приготовление 0,001 М раствора 9-флуоренилметилхлорформиата........10

7.7.    Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ....................................................11

7.8.    Кондиционирование колонки.......................................................................11

7.9.    Приготовление градуировочных растворов глифосата..............................11

7.10.    Установление градуировочной характеристики.......................................12

7.11.    Подготовка анионообменной смолы Дауэкс    1x8 и колонки....................12

7.12.    Подготовка катионообменной смолы Дауэкс 50W*2 и колонки.............12

7.13.    Проверка хроматографического поведения глифосата на колонке с

Дауэкс 1x8.............................................................................................................13

8.    Отбор и хранение проб......................................... 13

9. Выполнение определения......................................................................................14

9.1. Экстракция глифосата...................................................................................14

9.2 Очистка на ионообменных колонках............................................................14

9.3.    Дериватизация............................................. 15

9.4.    Условия хроматографирования....................................................................15

10.    Обработка результатов анализа.........................................................................16

11.    Проверка приемлемости результатов параллельных определений................16

Оформление результатов..........................................................................................16

13.    Контроль качества результатов измерений.......................................................17

14.    Разработчики.......................................................................................................18

МУК 4.1.2550—09

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

9 сентября 2009 г.

Дата введения: 1 декабря 2009 г

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств глифосата в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК 4.1.2550—09_

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации глифосата в семенах рапса в диапазоне 0,15—1,5 мг/кг и в масле рапса в диапазоне 0,10—1,0 мг/кг.

Название вещества по ИСО: глифосат.

Название вещества по ИЮПАК: Ы-(фосфонометил)-глицин.

О

Ю2ССН^НСН2Р(ОН)2

c3h8pno5.

Молекулярная масса: 169,1.

Белый порошок без запаха. Температура плавления: 189,5 ± 0,5 "С. Давление паров при 25 °С: 1,31 * 10'2 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода; Kow logР < - 3,2 (pH 2—5, 20 °С). Хорошо растворим в воде (11,6 г/дм3) и практически нерастворим в органических растворителях (ацетон, этанол, ксилол).

Вещество стабильно при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в водных растворах при pH 3—9.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD5o) для крыс и мышей составляет соответственно 5 600 и

4

МУК 4.1.2550—09

11 300 мг/кг. Острая дермальная токсичность (LD50) для крыс -5 ООО мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс -> 4,98 мг/дм3 воздуха (4 ч). LC50 для рыб > 1 ООО мг/дм3, LC5o для дафний - 780 мг/дм3, LC50 Для водорослей - 1,2—42 мг/дм3.

Глифосат малотоксичен для человека, животных, пчёл и птиц, нс обладает побочными токсическими эффектами.

В России установлены следующие гигиенические нормативы.

ДСД - 0,01 мг/кг массы тела человека; МДУ в семенах рапса -0,3 мг/кг, в масле — 0,1 мг/кг.

Область применения препарата, Глифосат - системный гербицид сплошного действия из группы ингибиторов биосинтеза ароматических аминокислот. Применяется для уничтожения злаковых и широколистных сорняков, в том числе с глубокоукореняющейся корневой системой, в посевах сельскохозяйственных культур, в садах и виноградниках, на пастбищах, откосах оросительных и осушительных каналов, промышленных территориях, а также для борьбы с кустарниками в лесных насаждениях. Помимо этого глифосат обладает способностью вызывать десикацию ряда культур, таких как подсолнечник, гречиха, соя и др.

В России глифосат применяется в качестве довсходового или допо-севного гербицида на посевах сельскохозяйственных культур, а также для десикации зерновых культур, льна-долгунца, гороха, подсолнечника и сои с нормой расхода до 1,44 кг д.в. на га.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализи

руемый

объект

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Показатель точности (граница относительной погрешности), ±5, %Р- 0,95

Стандартное отклонение повторяемости, ог, %

Предел

повторяе

мости,

г,%

Предел

воспроиз

водимости,

/?,%

Семена

от 0,15 до 1,0 вкл.

25

3,1

8,7

13,4

Масло

от 0,1 до 1,0

вкл.

25

3,2

9,0

13,9

МУК 4.1.2550—09

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (и = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Анализи

руемый

объект

Метрологические параметры, Р - 0,95, п - 20

Предел обнаружения, мг/кг

Диапазон

определяемых

концентраций,

мг/кг

Среднее значение определения, %

Стандартное отклонение,

S, %

Доверительный интервал среднего результата, ±, %

Семена

0,15

0,15—1,5

81,2

5,1

±4,7

Масло

0,10

0,10—1,0

82,0

5,4

± 5,0

2. Метод измерений

Методика основана на определении глифосата с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуоресцентным детектором. Контроль глифосата в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из семян и масла рапса подкисленной водой, очистки экстракта хлороформом и на ионообменных смолах Дауэкс 1 х 8 и Дауэкс 50WX2, дериватизации глифосата с помощью 9-флуоренилметилхлорформиата в щелочной среде.

Количественное определение глифосата проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора колонки, состава подвижной фазы и условий хроматографирования.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3*1. Средства измерений

Номер Госреестра 19419-05 ГОСТ 2104

Хроматограф жидкостной фирмы Altex, мод. 322 (США) с флуоресцентным детектором Фирмы Shimadzu, мод. RF-5301 (Япония)

Весы аналитические ВЛА-200

Весы лабораторные общего назначения

с наибольшим пределом взвешивания до 500 г

и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г

Иономер универсальный ЭВ-74

Колбы мерные вместимостью 100, 1 000 см3

Меры массы

6

МУК 4.1.2550—09

Пипетки градуированные 2 класса точности

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 см3    ГОСТ    29227

Пробирки градуированные с пришлифованной

пробкой вместимостью 5 и 10 см3    ГОСТ    1770

Цилиндры мерные 2 класса точности

вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1 000 см3    ГОСТ    1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками,

3.2. Реактивы

Глифосат, аналитический стандарт с содержанием д.в.99,8% (Monsanto, США) Ацетон, хч Ацетонитрил, ч

Вода дистиллированная, деионизованная

Кислота ортофосфорная, хч

Кислота хлороводородная, хч

Калий фосфорнокислый однозамещенный, хч

Натрия гидроксид, хч

Натрий тетраборнокислый, хч

Хлороформ, хч

Эфир диэтиловый, хч

9-флуоренилметилхлорформиат

(Sigma - Aldrich, Германия)

Анионообменная смола Дауэкс 1 * 8 (100—200 меш)/СГ-форма/(8егуа, Германия) Катионообменная смола Дауэкс 50W*2 (100—200 меш)/Н+- форма/(8егуа, Германия)

ТУ 64-1-2851—78 ГОСТ 10696-75

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-бс Вакуумный водоструйный насос Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Со. (США)

Воронка Бюхнера

Воронка делительная вместимостью 250 см3 Воронки конусные диаметром 30—37 мм Дефлегматор елочный Колба Бунзена вместимостью 500 смКолбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 см3

7

МУК 4.1.2550—09


Колбы плоскодонные вместимостью 250 см3 Колонка хроматографическая, стеклянная (10 x 250 мм)

Колонка хроматографическая, стальная для ВЭЖХ (4 х 150 мм), заполненная Диасорб 130-NH:, 7 мкм (ЗАО БиоХимМак СТ, РФ)

Мельница электрическая лабораторная Микрошприц вместимостью 100 мм(Hamilton, США)

Насос водоструйный вакуумный Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Bttchi (Швейцария)

Стаканы химические вместимостью 500 и 2 000 смСтекловата

Установка для перегонки растворителей Фильтры бумажные «красная лента», обеззолен-ные

или фильтры из хроматографической бумаги Центрифуга Т-23 (Janetzki, Германия) или аналогичная

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.


ТУ 4215-001-05451931—94 ТУ 46-22-236—79



ТУ 25-11-917—74



ТУ 6-09-2678—77


4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими веществами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые кон-ценграции (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.


8


МУК 4.1.2550—09

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонок с ионообменными смолами Дауэкс 1 * 8 и Дауэкс 50W*2.

7. L Очистка органических растворителей

7.1.1.    Очистка ацетона. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 ООО см3 ацетона 10 г КМп04 и 2 г К2С03).

7.1.2.    Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным.

7.1.3.    Очистка хлороформа. Хлороформ встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель промывают водой, после чего сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют.

7.1.4.    Очистка диэтилового эфира. Диэтиловый эфир встряхивают со свежеприготовленным раствором железного купороса (30 г сульфата железа, 655 см3 воды с добавлением 1,5 см3 концентрированной серной кислоты), затем диэтиловый эфир последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5 %-м раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.