Федеральная служба по надзору в сфере защиты нрав потребителей и благополучии человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение непищевых красителей Судан I, Судан П, Судан Ш, Судан IV и Para Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище

Методические указания МУК 4.1.2483—09

ББК 51.21

060

060 Определение непищевых красителей Судан 1, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище: Методические указания.—М.; Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.—10 с.

1.    Методические указания разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РЛМ11 В. А. Тугельин, к. т. н. В. Г. Байкой к. х. н. В. В. Бессонов, 10. В. Ведищева, к. ф. и. О. И. Передержав., К. II. Хромченкова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору н сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. №3).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным нрачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 5 февраля 2009 г.

4.    Введены в действие с момента угвсрждсиия.

5.    Введены впервые.

ББК5К21

© Роспотрсбпалэор, 2009 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

Определение непищевых красителей Судан I, Судан П, Судан Ш, Судан IV и Рага Red в пишелых продуктах и бнолотчески активных добавках к пипке

Методические указания МУК 4.1.2483—09

Технический редактор A. D. Терентьева

Подписано в печать 31.07.09 Формат 60x88/16    Печ.    л.    0,75

Тираж 200 зкз.

Федеральная служба по надзору о сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Банковский пср., д. 18/20

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федеральною центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшапское ш.> 19а Отделение реализации, телефакс 952-50-89

МУК 4.1.2483—09

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

5 февраля 2009 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение непищевых красителей Судан I, Судак II, Судан III, Судан IV и Рага Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище

Методические указания ______ МУК    4Л    .2483—09    __

Введение

Красители Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Рага Red (Пара Ред) (далее - Судан 1—IV и Para Red) в сферах экономики используются при производстве дизельного топлива, в легкой промышленности для окрашивания тканей, а также при проведении биохимических исследований для окрашивания препаратов, и относятся к непищевым красителям.

Необходимость определения непищевых красителей Судан I—IV и Para Red (Пара Ред) обусловлено их использованием при фальсификации специй и пряностей, а также продуктов их переработки, БАД к пище, изготовленных с использованием специй и пряностей, и других пищевых продуктов, в состав которых входят специи и пряности, с целью придания им более интенсивной окраски.

1. Общие положения и область применении

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методику определения возможного присутствия непищевых красителей Судан I— IV и Рага Red в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматшрафни в специях, пряностях и продуктах их переработки, а также в биологически активных давках к нише (БАД) и других пищевых продуктов (в состав которых входят специи и пряности).

3

1.2.    Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящиеся в обращении па территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.3.    Присутствие непищевых красителей Судан I—IV и Para Red в пищевых продуктах в пределах обнаружения данным методом является основанием для запрещения продукции к реализации.

2. Краткая характеристика красителей Судан I, Судан П, Судан ПХ, Судан IV и Para Red (Пара Ред)

Судан I, Судан П, Судан Ш, Судан IV и Para Red (Пара Ред) являются сшпгетическими непищевыми красителями, практически нерастворимыми в воде, хорошо растворимыми в органических растворителях (хлороформе, ацетоне, эфире), и имеющих интенсивную окраску от оранжевого до ярко-красного цвета. Структура непищевых красителей Судан I—IV и Para Red приведена на рис. 1.

	Ri	R2	Кз
Судан 1	И	Н	Н
Судан ГГ	И	СИз	Н
Судан Ш	И	Н	Ph-N-N-
Судан IV	СИз	И	o-CH3-Ph-N~N*
Para Red (Пара Ред)	Н	н	М02

МУК 4.1.2483—09

3. Принцип метода определения красителей Судан I-FV и Рага Red

Обнаружение и определение содержания непищевых красителей Судан I—IV и Para Red (Пара Ред) яров од шея методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с диодно-матричпым детектированием (при длине волны 504 нм). В качестве арбитражного метода используют метод ВЭЖХ с масс-детектироваиием (по молекулярным и дочерним ионам, см. табл. 1).

Таблица 1

Параметры масс-детсктирования представлены

Наименование Молекулярные ионы, m/z Энергия разрушения Основные дочерние ионы, m/z Para Red 294 (М т 1-Г) 0,9 277 156 . Судан-1 249 (М + Н*) 1,0 232 156 - Судан-11 277 (М + Н4) ... w 260 156 120 Судан-Ш 352 (М + Н*) U 197 336 156 Судан-IV 382 (М + Н4) 1,2 224 364 156

4. Средства измерения, материалы и реактивы

Высокоэффективный жидкостной хроматограф Хроматографическая кологгка С18,5ц, 4,6 х 250 мм Ультразвуковая баня

Весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания 100 г и погрешностью + 0,000] г Дистиллятор

Установка для фильтрования и дегазирования подвижной фазы pH-метр лабораторный

Центрифуга лабораторная ОПН-8 8000 об/мин

Мембранный филыр с диамегром пор 0,45 мкм

Пипетки 2-1 -2' I или 1-1-2-1,2-1-2-10 или

2-2-2-10 или 3-2-2-10    ГОСТ    29227

Колбы мерные К 1-50-1, К 1-50-2    ГОСТ    1770—74

5

Вода дистиллированная Ацетонитрил дня жидкостной хроматографии Тстрагидрофуран для жидкостной хроматографии Трифторуксусная кислота квалификации осч Ацетон квалификации хч

5. Определение содержания Судаиов I—TV и Para Red методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

5.1. Подготовка стандартных растворов

Навеску стандартного вещества около 0,02 г (с точностью 0,0001 г) помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 30 мл 95 % этанола, интенсивно встряхивают, при необходимости озвучивают на ультразвуковой бане до полного растворения вещества. После этот объем доводят до метки 95 %-м этанолом (основной раствор). R мерную колбу на 50 mjj помещают 1 мл основного раствора и доводят объем до метки 95 %-м этаполом (рабочий раствор). Полученный рабочий раствор фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Приготовленные стандартные растворы хранят в прохладном месте в течение 1 месяца.

5.2. Подготовка проб для анализа

Около 1,0 г (точная навеска) образна помещают во флакон, объемом 20 мл с завинчивающейся крышкой, добавляют 10 мл ацетона, интенсивно встряхивают в течение 2 мин и озвучивают на ультразвуковой бане в течение 5 мин. После озвучивания образец снова встряхивают и центрифугируют на 6 000 об/мин. После центрифугирования супернатант отбирают и исследуют. При необходимости отобранный супернатант фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

При подготовке контрольных образцов указанным способом извлекается более 95 % добавленного количества каждого из исследуемых красителей.

МУК 4.1.2483 -09

5.3. Приготовление подвижной фазы

При постоянном перемешивании к бидистиллированной воде добавляют по каплям трифторуксусную кислоту до pH — 2,4 и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Подвижная фаза хранится в холодильнике при температуре 2—8 °С нс более 3 месяцев.

5.4. Проведение анализа ВЭЖХ

Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения со временем удерживания стандарта красителя. УФ и видимого спектра. Для подтверждения рекомендуется сравнивать также молекулярные массы каждого компонента и его дочерних ионов.

Идентификация крастслей Судан I—IV и Рага Red только по времени удерживания не будет являться достоверной, ввиду сложного матрикса исследуемых объектов, и наличия природных компонентов, обладающих сходными спектральными характеристиками и хромат01рафи-ческим поведением.

5.5. Условия хроматографического анализа

Колонка 5u С 18(2), 5р, 4,6 к 250 мм.

Приготовление подвижной фазы: бшшетиллировалпую воду доводят трифторуксусной кислотой до pH 2,4 (мл на 1 л бидистиллированной воды).

Подвижная фаза: смесь ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH - 2,4 (Б). Оптимальным является градиентное элюирование смесью ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кисло гой до pH = 2,4 (Ь): 0 мин. - 80 % (А), 10 мин- 98 %(А) (градиент линейный), 20 мин - 98 %(А), 21 мин - 80 %(А). Регенерация колонки занимает не менее 9 мин. Общее время анализа составляет 30 мин.

В случае использования только диодно-матрщшого детектора вместо бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 допускается использование бидисти-глированной воды. Также возможно использование изократического элюирования смесью

7

МУК 4.1.2483—09

ацетонитрила - бидистиллированной воды с содержанием ацетонитрила 90—95 % (в зависимости от параметров колонки).

Для полной регенерации колонки следует использовать подвижную фазу на основе тетрагидрофурана, обладающего такой же элюирующей силой, как и ацетон.

Скорость подачи подвижной фазы: 1,0 см³/мин.

Детектирование: А.=504 нм.

Объем вводимой пробы 5 мкл.

Порядок выхода и параметры количественного определения непищевых красителей Судан I—IV и Para Red приведены в табл. 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I—IV и Рага Red представлен на рис. 2.

Проведение количественного определения красителей Судан I—IV и Рага Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается, поскольку они являются не пищевыми веществами, и их присутствие в пределах обнаружения данного метода является основанием для запрещения продукции к реализации. Пределы обнаружения красителей Судан I—IV и Para Red приведены в табл. 2.

Таблица 2

МУК 4.1.2483—09

С - содержание красителя, мг/кг.

С; - концентрация красителя в стандартном растворе, мкг/мл.

Si - площадь лика красителя в стандартном растворе.

Sj - площадь пика красителя в определяемом образце.

V- объем раствора образца, мл. т - масса навески, г.

* проведение количественного определения красителей Судан I— IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается.

Таблица 3

Основные метрологические показатели

№ Наименование Транша относительной погрешности (±6) в % при Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости (аг) % 1 Рага Red 2,1 ЗД 3 Судан-1 3,6 3,5 2 Судан-И 2,8 3,8 4 Судан-Ш 3,3 4,9

Таблица 4

Параметры определении непищевых красителей Судан 1—IV и Para Red

J'fe Наименование Время удерживания, мин. 1 Рага Red 6,2 3 Судан-! 7,5 2 Судан-] I 10,9 4 Судан-Ш 12,9 5 Судин-lV 15,5

9

МУК 4.1.2483—09

11

Рис. 2. пример хроматограммы смеси стаяларгов Судан 1-IV и Рага Red