Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств амидосульфурона в масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2477—09

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств амидосульфурона в масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указании МУК 4.1.2477—ао

МУК 4.1.2477—09

7.8. Приготовление градуировочных растворов

7.8.1.    Исходный раствор амидосулъфурона для градуировки (концентрация 100 мкг/см ). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,010 г амидосулъфурона, растворяют в 40—50 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца.

7.8.2.    Раствор амидосулъфурона N9 1 для градуировки (концентра

ция 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора амидосулъфурона с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.8.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов    2—5.

Для приготовления проб масла с внесением при оценке полноты извлечения амидосулъфурона из исследуемых образцов используют ацетоновый раствор амидосульфурона с концентрацией 5 мкг/см³.

Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца.

7.8.3.    Рабочие растворы №№2—5 амидосулъфурона для градуировки (концентрация 0,05— 0,5 мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 см³ градуировочного раствора № 1 амидосульфурона с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.8.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.6, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2—5 с концентрацией амидосульфурона 0,05, 0,10, 0,25 и 0,5 мкг/см³, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.9. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость высоты пика (мм) от концентрации амидосульфурона в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 50 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 7.8.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производятся в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными

10

МУК 4.1 ,2477—09

ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».

Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более 3 месяцев. В некоторых случаях масло получают из зерна кукурузы экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

9. Выполнение определения

9.L Экстракция амидосулъфурона

Образец масла массой 10 г вносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, добавляют 30 см³ ацетонитрила и содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз ацетонитрильный слой собирают в делительную воронку вместимостью 250 cm^j. Операцию экстракции масляной фазы повторяют еще два раза, используя по 25 cm^j ацетонитрила. Дальнейшую очистку объединенной ацетонитрильной фазы проводят по пп. 9.2 и 9.3.

9*2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К ацетонитрильному экстракту, полученному по п. 9.1 и помещенному в делительную воронку, прибавляют 30 см³ гексана и воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фазу повторно обрабатывают 30 см³ гексана при встряхивании, гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию переносят в круглодонную колбу емкостью 100 мл и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 45 см³ 0,1 М раствора К2НРО4. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, приливают 15 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения органическую фазу отбрасывают, а водную фракцию еще дважды обрабатывают хлористым метиленом порциями по 15 см³. Водную фракцию переносят в химический стакан, подкисляют 2 М орто-фосфорной кислотой до pH 3, контролируя кислотность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, приливают 15 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения слоев органическую фазу фильтруют через 1 см слой хлопковой ваты в мерный цилиндр вместимостью 100 см³. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 15 см³ хлористого метилена.

И

Измеряют объем объединенной органической фазы и 1/10 его часть (эквивалентна 1 г образца) переносят в круглодонную колбу вместимостью 25 см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п.9.3.

9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 1,8 см³ ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, добавляют 1,2 cm^j гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.4. Колбу обмывают 5 см³ смеси гексан-ацетон (2 : 3, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку промывают 25 см³ смеси гексан-ацетон (2: 3, по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Амидосульфурон элюируют с колонки 100 см³ смеси гексан-ацетон (1 : 9, по объему), отбрасывая первые 20 см³ элюата и собирая последующие 80 см³ элюата непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по п. 7.6, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание амидосульфурона по п. 9.4.

9.4. Условия хроматографирования

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирма Knauer, Германия)

Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасфер 110-С 18, зернением 5 мкм

Температура колонки:    комнатная

Подвижная фаза:    ацето нитрил-метанол-

0,005 М-орто-фосфорная кислота (45 :1:54, по объему) Скорость потока элюента:    0,5 см³/мин

Рабочая длина волны:    233 нм

Чувствительность:    0,01 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы:    50 мм³

Время удерживания амидосульфурона 9,6 мин.

Линейный диапазон детектирования:    2,5—25 нг

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ,

12

МУК 4.1.2477—09

Альтернативная неподвижная фаза: Hipersil ODS, колонка длиной 25 см и внутренним диаметром 4,6 мм.

Время выхода амидосульфурона:    около    12    мин

10. Обработка результатов анализа

Содержание амидосульфурона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

_v_H_txAxV л. — ■■■

Н₀хт

ЛГ— содержание амидосульфурона, мг/кг;

Я,- высота пика образца, мм;

Но - высота пика стандарта, мм;

А - концентрация стандартного раствора амидосульфурона, mkt/cm^j; V— объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; т — масса анализируемой части образца, г (для масла - 1 г).

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

Х_}иХ₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

г - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом г ~ 2,8 а_г. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов Результат анализа представляют в виде:

(X ± А) мг/кг при вероятности Р - 0,95, где

^-среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

13

А = 8 х-j где

100

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения»

< 0,05 мг/кг для кукурузного масла*

*- 0,05 мг/кг — предел обнаружения для масла кукурузы.

13* Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

^С0 ^{= А},.Т^+Л*,?’^где

± А_я j (±    j,) - характеристика погрешности (абсолютная погреш

ность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/кг, при этом:

Д_ж =±0,84Д, где

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Л *    ^

А = ох-, где

100

5 — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном определяемых концентраций, таблица 1), %.

Контрольный параметр процедуры К_к рассчитывают по формуле:

МУК 4.1.2477—09

К_к=Х-Х - С_д, где

X*, X ,С_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле

К= /л²^+Д²-

\ я,Х к.Х

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

КМ    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости^)

Xj₉ Х₂, - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном определяемых концентраций, таблица 1), %.

14. Разработчики

Назарова Т. А., науч. сотр., канд. биол. наук; Микитюк О. Д., ст. науч. сотр., канд. биол. наук; Макеев А. М., зав. лаб., канд. биол. наук.

15

Приложение

Таблица

Полнота определения амидосульфуроиа в модельных матрицах (л = 5)

Матрица	Внесено, мг/кг	Открыто. %	Доверительный интервал среднего, %
Sfocsio кукурузы	0,05	79,0	±3,3
	0,10	81,1	±3,1
	0,25	83,5	±3,1
	0,50	86,6	±2,3

ББК51.21

060

060 Определение остаточных количеств амидосульфурона в масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.—16 с.

1.    Разработаны Всероссийским НИИ защиты растений (Т. А. Назарова, О. Д. Микитюк, А. М. Макеев)

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. Х°3).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 9 февраля 2009 г.

4.    Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

Технический редактор А. В. Терентьева

Подписано в печать 29.06.09 Формат 60x88/16    Печ. л. 1,0

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18/20

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, телефакс 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

МУК 4.1.2477—09

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

9 февраля 2009 г.

Дата введения: 29 апреля 2009 г,

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств амидосульфурона в масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2477—09

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации амидосульфурона в масле кукурузы в диапазоне концентраций 0,05—0,5 мг/кг.

Название вещества по ИСО: Амидосульфурон Название вещества по И ЮНАК: 3-(4,6-диметоксипнримидин-2-ил)-1-[(К-метил-Н-метилсульфонил)аминосульфонил]-мочевина

c₉h₁₅n₅o₇s₂

Мол. масса: 369,4

Белый кристаллический порошок. Температура плавления: 160— 163 °С. Давление паров при 25 °С: 2,2 х 10"² мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kqw logР =1,63 (pH 2). Растворимость (г/дм³) при 20 °С: дихлорметан - 6,9, ацетон - 8,1, этилацетат - 3,0, метанол -0,87, толуол - 0,256, изопропанол - 0,099; растворимость в воде (мг/дм^э): 3,3 (pH 3), 9 (pH 5,8) и 13500 (pH 10).

Нестабилен в кислой среде: период полураспада в воде при pH 5, 7, 9 составляет 33,9, 365 и 365 дней, соответственно.

В почве амвдосульфурон относительно быстро разлагается (DT₅₀ - 3—29 дней); скорость деградации зависит в основном от биологической активности почвы.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для мышей и крыс более 5 ООО мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс более 5 ООО мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс более 1 800 мг/м³ воздуха. ЬС₅₀ для рыб - > 320 мг/дм³ (96 час.).

Амвдосульфурон нетоксичен для птиц, рыб, земляных червей, почвенных микроорганизмов и пчел.

Гигиенические нормативы для амидосульфурона в России:

ДСД - 0,3 мг/кг массы тела человека; МДУ в масле кукурузы - ОД мг/кг.

Область применения

Амвдосульфурон - избирательный гербицид системного действия из класса сульфонилмочевин. Механизм его действия связан с подавлением биосинтеза аминокислот с разветвленной цепью (валин, изолйцин), приводящего к прекращению клеточного деления и роста. Эффективно уничтожает однолетние и многолетние двудольные сорные растения, в т. ч. устойчивые к 2,4-Д и 2М-4Х, в посевах зерновых культур, кукурузы, льна и посадках картофеля. Избирательность действия амидосульфурона обусловлена повышенной скоростью его детоксикации в устойчивых видах. Применяется в России в качестве гербицида в составе смесевых препаратов на посевах зерновых колосовых культур, кукурузы и льна-долгунца с нормой расхода 5—10 г д.в./га.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Z⁵- 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±4 % Стандартное отклонение повторяемости, % Предел повторяемости, г, % Предел воспроиз водимости, к% Кукуруза (масло) от 0,05 до ОД вкл. 50 2,9 8,1 12,5 более 0,1 до 0,5 25 2,7 7,6 11,7

МУК 4,1.2477—09

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для л = 20, Р = 0,95

Анализи руемый объект Метрологические параметры, Р ~ 0,95, я — 20 Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг значение 1 Стандартное ____ _ отклонение, о пределе- j ^ НИЯ, % 1 0 Доверительный интервал среднего, % Кукуруза (масло) 0,05 0,05—0,5 1 82,6 1 4,0 1 ±3,8

2, Метод измерений

Методика основана на определении амидосульфурона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором. Контроль амидосульфурона в образцах кукурузного масла осуществляется по содержанию вещества после извлечения его из масла ацетонитрилом, очистки экстракта путем распределения действующего вещества между несмешивающимися растворителями при щелочных и кислых значениях pH и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.L Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)

Весы аналитические ВЛА-200 Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г Колбы мерные вместимостью 2-100-2,2-1 000-2 Меры массы

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 см

5

МУК 4.1,2477—09

Пробирки градуированные с пришлифованной

пробкой вместимостью 5 см³    ГОСТ    1770

Цилиндры мерные 2-го класса точности

вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1 000 см³    ГОСТ    1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетон, чда

Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода бидистиллированная или деионизованная н-Гексан, хч

Калий фосфорнокислый двузамещенный, чда Кислота орто-фосфорная, хч, 85,6 %

Метилен хлористый (дихлорметан), хч Спирт метиловый (метанол), хч

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией

3.3. Вспомогательные устройства, материалы Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Со. (США)

Воронки делительные вместимостью 100 и

Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 м и внутренним диаметром 8—10 мм Колонка хроматографическая, стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасфер 110-С 18 (5 мкм)

(ЗАО «БиоХимМак СТ», Москва)    ТУ 4215-001-05451931—94

Насос водоструйный вакуумный    ГОСТ    10696

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169

МУК 4.1.2477—09

фирмы Buchi (Швейцария)    ТУ 25-11-917—74

Силикагель 60 (0,063—0,2 мм) для колоночной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности

Стаканы химические вместимостью 100 и 500 см³ ГОСТ 25336 Стекловата

Установка для перегонки растворителей Фильтры бумажные «красная лента»,

Обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман ЗММ    ТУ 6-09-2678—77

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 100 мм³, модель Micrliter #1710 (Hamilton,США)

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими веществами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

7

МУК 4.1.2477—09

• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем.

7.7. Очистка органических растворителей

7.1.1.    Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2.    Очистка н-гексана. Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания ее в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.3.    Очистка силикагеля. Силикагель 60 (0,063—0,20 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 5 ч.

7,2. Приготовление 2 М и 0,005 Мрастворов орто-фосфорной кислоты

Для получения 2 М раствора Н3РО4 в мерную колбу вместимостью 1 000 см³ вносят 137 см³ 85,6 %-ной орто-фосфорной кислоты, добавляют 500—600 см³ деионизованной воды, перемешивают и доводят объем водой до метки.

Для получения 0,005 М раствора Н3РО4 отбирают 2,5 см³ приготовленного 2 М раствора орто-фосфорной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 1 000 см , добавляют деионизованную воду до метки и перемешивают.

7.3. Приготовление 0,1 Мраствора К2НРО4 х ЗН₂0

22,8 г К2НРО4 ^х ЗН₂0 растворяют в химическом стакане в 400 мл деионизованной воды, раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1 000 см³, добавляют деионизованную воду до метки и перемешивают.

8

МУК 4.1.2477—09

7,4, Подготовка колонки с силикагеле для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8—10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля I степени активности в 20 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 см* смеси гексан-ацетон (1 : 9, по объему) и 30 см³ смеси гексан-ацетон (2 : 3, по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

7.5. Проверка хромйтографического поведения амидосульфурона на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1см³ градуировочного раствора № 1 амидосульфурона с концентрацией 10 мкг/см³ в ацетонитриле (п. 7.8.2), раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 см³ смеси гексан-ацетон (2 : 3, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.4. Промывают колонку 30 см³ смеси гексан-ацетон (2:3, по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 100 см³ смеси гексан-ацетон (1 : 9, по объему). Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 см³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, вносят 1 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 7.6, перемешивают и анализируют на содержание амидосульфурона по п. 9.4. Фракции, содержащие амидосульфурон, объединяют и вновь анализируют по п. 9.4. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Профиль вымывания амидосульфурона может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

7,6. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 450 см³ ацетонитрила, 10 см³ метанола и 540 см³ 0,005 М водного раствора орто-фосфорной кислоты (п. 7.2), перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.7. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.6) при скорости подачи растворителя 1 см³/мин не менее часа до установления стабильной базовой линии.

9