МУК 4.1.2454-09
Определение остаточных количеств фолпета в виноградном соке методом газожидкостной хроматографии. Методические указания

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств фолпета в виноградном соке методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2454—09

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств фолпета в виноградном соке методом газожидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.—15 с.

I.Разработаны Российским государственным аграрным университетом -МСХА им. К. Л. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и шрохими катов», Минсельхоза России (В. А. Калинин, профессор,    канд. с-х. наук,    Е. В Довгилсвич,

ст. науч. сотр., канд биол. наук,    А. В. Довгнлевич,    ст. науч. сотр.,

кянл. хим. наук, М. В Разумихин, науч. сотр., Е. Н. Щербин кипа ., инженер).

2 Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитнрно-эпиде-миологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. № 3).

3. Утверждены Руководи гелем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.

4.    Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5.    Введены впервые.

ЬБК 51.21

® Роспотребнадзор, 2009 €> Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

МУК 4.1.2454—09

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

2 февраля 2009 г.

Дата введения: 29 апреля 2009 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств фолиета в виноградном соке методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2454—09

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств фолпета в виноградном соке в диапазоне 0,02—0,1 мг/кг.

Краткая характеристика препарата.

Название действующего вещества по ИСО: Фолпст.

Название действующего вещества по ИЮПАК: N-трихлорметил-тиофталимид.

C₉H4C1₃N0₂S Мол. масса: 296,6 Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.

Цвет, запах: белое вещество, почти без запаха.

Температура плавления: 177 °С.

Летучесть (давление паров): 2,1 * 10'² мПа (при 25 °С). ³

3

МУК 4.1.2454—09

Растворимость: в воде 0,8 мг/дм³ при комнатной температуре; в органических растворителях при 25 °С (г/дм³): толуоле - 26; метаноле - 3. Коэффициент перераспределения в системе октанол : вода: K₀^\ogP - 3,11.

Стабильность в водных растворах: быстро разрушается в щелочной среде. DT5Q - 1,1 ч (pH 7), в водных кислых растворах разрушается с DT50 10,5 ч при pH - 3,0.

Отличается высокой реакционной способностью, быстро разрушается в биологических средах и почве.

Краткая токсикологическая характеристика

Фолпст относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД50 для крыс > 9 ООО мг/кг), дермальной (ЛД50 для кроликов > 4 500 мг/кг), но к опасным по ингаляционной токсичности (ЛК50 Для крыс - 1 890 мг/м³ при 4-часовой экспозиции). Может вызывать раздражение кожи с сенсибилизацией и слизистых оболочек глаз, проявляет канцерогенный эффект в опытах на животных.

В России для фолпета установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,01 мг/кг массы тела человека; МДУ в продукции (мг/кг): содержание вещества в картофеле, винограде, плодовых ягодных, томатах не допускается (на уровне чувствительности метода контроля).

Область применения

Фолпет - контактный фунгицид с неспецифическим местом действия и коротким защитным действием. Высокоэффективен в борьбе с болезнями растений, вызываемыми ложномучнисторосяными и мучнисторосяными грибами, в плодовых садах, на виноградниках, в посевах овощных культур и плантациях картофеля.

Применяется в России на виноградниках против милдью и плантациях картофеля против фитофтороза и макроспориоза с нормой расхода 1,25—1,5 кг д.в./га.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2. ⁴

4

МУК 4.1.2454—09

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализи

руемый

объект

Диапазон определяемых концешраций, мг/кг

Показатель точности (граница относительной погрешности), **,%

Р = 0,95

Стандартное отклонение повторяемости, а_п %

Предел повторяемости, г, %

Предел вос-производи-мосгиД %

Виноградный сок

0,02—0,1

50

9

25

29

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализи

руемый

объект

Метрологические параметры, Р « 0,95, л = 20

Предел обнаружения, мг/кг

Диапазон определямых концентраций, мг/кг

Среднее значение определения, %

Стандартное

отклонение,

S,%

Доверительный интервал среднего результат а, ±%

Виноградный сок

0,02

0,02—0,10

85

5,7

2,2

2. Метод измерений

Метод основан на определении фолпета методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора постоянной скорости рекомбинации электронов после экстракции данных веществ из исследуемой пробы ацетонитрилом и очистки экстракта путем перераспределения в несмешивающихся жидкостях и с помощью колоночной хроматографии на флоризиле.

Идентификацию веществ проводят по времени удерживания путем сравнения с аналитическим стандартом, а количественное определение -методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора колонки и изменения температуры колонки.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства, и материалы

3.1. Средства измерений Весы аналитические £ И140 с пределом допустимой погрешности ± 0,0001 г, фирма «OHAUS» ⁵

5

МУК 4.1.2454—09

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания

до 600 г и пределом допустимой погрешности * 0,038 г V600, «ДССШАВ»

Колбы мерные вместимостью 10, SO и 100 см⁵ ГОСТ 1770-74 Микрошпрнц Гамильтон, вместимостью 10 мм³ Пипетки мерные вместимостью 1,2, 5 и 10 см¹ ГОСТ 20292-74 Хроматограф газовый «Кристалл 2 000м» с терм оконным детектором ('ГИД) с пределом

детасправюост ло азоту в азобензоле 5 х 10'° г/см³

и приспособлениями для капиллярной колонки

Цилнвдры мерные 2-го класса точности

вместимостью 25,50,100 и 230 см⁵    ГОСТ    1770

Допускаете» использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Аналитический стандарт фояпста, содержание основного вещества 99,5 К фирмы Маггешим Аган Иидастриз Лтд. Азот особой чистоты Ацетонитрил, хч Вода дистиллированная Гексан ч

Натрий хлористый чда, водный раствор массовой концентрации 40 г/дм*

Флоризма для колоночной хроматографии с размером частиц 60—80 меш, фирма «Агрос Органике», Бельгия, код 205450010 Хлористый метилен, хч

Допускается нспользоввняе реактивов логичными или лучшими характеристиками

ГОСТ 9293 ТУ 6-09-06-1092—83 ГОСТ 7602-72 ТУ 6-09-3375

ГОСТ 4233

ГОСТ 19433-88 иных производителей с ака-

3.3. Вспомогательные устройства и материалы Аппарат для встряхивания проб TYP LT1 фирмы oSKLO UNION»

Банки с крышками для экстракции на 250 см³, полипропилен, кат.ХвЭ 120-0250, NALGENE Воровки химические для фильтрования, стеклянные    ГОСТ 8613-75

6

МУК 4. J. 2454—09

Вороша делительные на 250 си⁵    ГОСТ 10054-75

Испаритель ротационный вакуумный

ИР-IM    ТУ 25-11-917

Испаритель ротационный Rota vapor

R110 Bucfai с водяной баней В-480

Концентраторы грушевидные на 100 к 250 см\

НШ29КГУ- 100(250)    ГОСТ 10394-72

Колонка хроматографическая, капиллярная

кварцевая ИР-5 длина 15 ы, внутренний диаметр

032 мм, толщина плети 0,25 мхм,

фирма J&W Scientific

Насос вакуумный диафрагменный FT. 19

фирмы KNF Neu Laboport

Фильтры бумажные «красная лента»    ТУ 6-09-2671—77

Допускаете* применение хроматограф ичеоккх колонок и другого оборудования с аналогичными дли лучшими техническими характеристиками.

4. Требования бетой ясности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования зпехтробеэопасяостн ври работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2-5.1313—03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредный веществ в воздухе рабочей зоны». Органика ция обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих каа лификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жид костном хроматографе.

К проведению пробоподготоеки допускают операторе с каалиф> нацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории

■/

МУК 4.1.2454—09

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

7. 1. Подготовка растворителей

Все растворители используют свсжсперегнанными. Перегонку растворителей проводят, строго отбирая фракцию, соответствующую по температуре кипения основному веществу.

7.2.    Приготовление стандартных и градуировочных

растворов фол пета

Основной раствор фолпета готовят, количественно перенося навеску вещества массой по 100 мг в мерные колбы вместимостью 100 см³. В колбы вносят 20 см³ ацетона, содержимое колб перемешивают до полного растворения кристаллов фолпета. Объем раствора в колбах доводят до метки ацетоном, после чего содержимое колб тщательно перемешивают. Получают раствор фолпета массовой концентрации 1 мг/см³ (раствор № 1), кот орый может храниться не более 1 месяца.

Методом последовательного разбавления раствора Ха 1 ацетоном в мерных колбах готовят рабочие растворы с концентрациями фолпета 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/см³, которые могут храниться в холодильнике нс более 10 суток.

Основной и градуировочные растворы фолпета хранят в холодильнике.

7.3.    Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации фолпета в растворе устанавливают методом абсолютной калибровки по стандартным растворам с концентрациями 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/см³.

Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора фолпета и хроматографируют в условиях п. 9.2. Проводят не менее 3 параллельных из-

8

МУК 4.1.2454—09

мерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации фолпета в растворе в мкг/см³

7.4. Подготовка колонки для очистки экстракта В пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно чистую стекловату и заполняют колонку 5 г флоризила 60/100 меш, уплотняя его путем вибрации колонки. На слой флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. Флоризил в колонке промывают 15 мл ацетона, ацетон под давлением удаляют из колонки. Затем колонку промывают 15 мл гексана.

7.5. Проверка хроматографического поведения фолпета на колонке для очистки экстракта Хроматографическое поведение фолпета проверяют каждый раз при использовании новой партии флоризила. В стаканчик помещают 1 мл стандартного раствора фолпета с концентрацией 0,1 мкг/мл, добавляют 9 мл гексана, перемешивают содержимое и наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 10 мл гексана и 5 мл смеси гексан: ацетон - 4 : 1, смывы озбрасывают.

Пропускают через колонку 4 порции смеси гексан-ацетон (1 : 1) по 5 мл каждая, собирая их в отдельные концентраторы. Собранные фракции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Фракции, содержащие фолпет, объединяют, выпаривают досуха, сухой остаток вновь растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смыва с колонки и необходимый для очистки объем элюата.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколи-честв пестицидов», № 2051—79 от 21.08.79 г., а также с ГОСТ 25892— 83 - «Вииоградшлй сок, ТУ».

Пробы соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре + 4 °С нс более 10 суток.

9

МУК4.1.2454—09

9. Выполнение определенна

9.1. Виноградный сон

9.1.1.    Экстракция фавпета у» анализируемой пробы и предварительная очистка. Навеску сом Юг разводят 10мл насыщенного раствора хлористого кдтрих и переносят в делительную воронку. Добавляют в воронку 50 мл ацетонитрила и встряхивают содержимое вором» в течение 1—2 инн После раз деление слоев нижний водный свой переливают в стаканчик, а слой ацетонитрила - в концентратор емкостью 250 мл. Водную фракцию из стаканчика переносят в делительную воронку, добавляют а воронку 30 мл ацетонитрила я экстрагируют фолпет, как указано выше. Экстракцию повторяют еще раз с тем же объемом ацетонитрила.

Объединенный экстракт ацетонитрила упаривают н* ротационном вакуумном испарителе при температуре 35 °С до объема 1—2 мл. Остаток в концентраторе разводят 100 мл 2-% раствора Na₂S0₄ и переносят в делительную воронку емкостью 250 мл.

Добавляют в воронку 30 мл хлористого метилена к встряхивают воронку в течение 1—2 мяк. После разделения слоев ннжинй слой хлористого метилена свивают в концентратор, пропуская через безводный сернокислый натрий. Повторяют экстракцию еще два раза, вегюоьзуя каждый раз по 30 ьш хлористого метилене. Хлористый метилен выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе.

9.1.2.    Очистка экстракта на колонке с флоризмом Сухой остаток в концентраторе разводят в 1 мл ацетона, добавляют 9 мд гексане, обмывают смесью стенки концентратора я переносят его содержимое на колонку с флор из ил ом. Колонку промывают последовательно 10 мл гексана и 5 мл смеси гексан- ацетон -4:1, смывы отбрасывают. Фолпет элюируют с колонки 15 мл смеси гексан-ацетон. Эжоат собирают в концентратор емкостью 100 мя и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не »ыж 35 °С. Сукой остаток в концентраторе разводят в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

9.2. Условия хроматографирования

Хроматограф «Кристалл 2000 М» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану 4 х 10г^м г/см* и приспособлениями для капиллярной колонки или другой с аналогичными характеристиками.

МУК 4.1.2454—09

Капиллярная кварцевая колош HP-5 (S % дифенил и 95 % диметл полис илохсяи), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мки.

Теяперлура термостат* колонки программированям: начальна* температура- 160’С, нагрев колонки по 10*С в минуту до 21042 Ншреа колонка после анализа по 25 ‘С * минуту до 260 "С, выдержка 3 мин Время анализа -И ман.

Темперитура испарителя-230 «С, детектор*-320 'С

Регулятор расхода шшя - РРГ-11; режим Split le*s.

Газ 1 - гелий (гвэ-иоситоль), расход гелия -1 см’/мни, оброс 1:50,нача-ло сфоса - 20 с, длительность сброса - 2 мин.

Газ 2 - гелий, линейна* скорость - 28 см/с, даалеше на «ходе -3*21 кПщ

Газ 3 - азот (поддув в детежгор), расход во врем* анализа - 45 яЛмин. Расход азста при гродуваждетеиора после анализа-65 см'/мин.

Абсолютное врем* у Державин* фолаета - 6 мил 37 с—6 мин 40 с.

Объем вводимой пробы - 1 им’.

Минимально детектируемое количество фолпета в анализируемом объеме-0,01 нг

Линейность детектнроаания сохраняется в пределах 0,01—0,1 нг.

Каждую амшвируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза я вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие гшкн больше, чем стандартный раствор с концентрацией фолпета 0,1 мкг/cu’ соответственно, разбавляют

10. Об работ к* результатов анализа

Для определения содержания фолпета в пробах методом ГЖХ используют следующую формулу:

X= £ar*Ji?^y *р.где 100 xS_cr хт

X- содержание фолпета. в пробе, мг/кг;

Scr- площадь пип стандарта, мВ;

Snr - площадь пика образца, мВ;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см’;

Y - объем экстракта, подготоаленного для хроматографирования, см’;

т - масса анализируемого образов, г;

Я - содержание фолпета в аналитическом стандарте, %.

15

МУК 4.1.2454—09

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2>|ЛГ,-ЛГ,|»100 ,_{где    (1)}

(*,+*.)

X_hX₂-результаты параллельных определений, мг/кг;

/•-значение предела повторяемости (табл. 1), при этом г - 2,8 а_г.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предел повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ±Л) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

X • среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Л - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Д = <5х — ,где 100

б - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концен граций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг»*

* - 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

МУК 4.1.2454—09

13.2. Плановый внутрилабораторныЙ оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

±Д_ж?(±Д_я?7) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Д_я = ±0,84Д, где

Д - г раница абсолютной погрешности, мг/кг;

X

A^Sx—, где 100

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к =Х-У~С_д,гдс

X', Ху Q- среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. И), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

OQ с (2)

13

МУК 4.1.2454—09

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (Л)

2х1ЛГ₁-Л'₂|хЮ0 _{гп<к    m}

—£3--Ч-^Л.^гД^е    (3)

X_J}X₃ ~ результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R ~ предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

14. Разработчики

Калинин В. А., Калинина Т. С. Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К. А. Тимирязева.

14

МУК 4.1.2454—09

Приложение

Доверительный интервал и полнота определения фолпета о виноградной соке

Анализируемый

объект

Добавлено фолпета, мг/кг

Обнаружено фолпета, мг/кг

Доверительный интервал, ±

Полнота определения, %

Сок винограда

0,02

0,021

0,002

106,2

0,05

0,041

0,003

82,9

0,1

0,079

0,005

79,4

Определение остаточных количеств фолпста в виноградном соке методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2454—09

Технический редактор А. В. Терентьева

Подписано в печать 31.07.09 Формат 60x88/16    Печ.    л

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д 18/20

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федеральною центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел./факс 952-50-89