Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флутриафола в семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2402—08

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флутриафола в семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2402-08

МУК 4.1.2402-08

колбочку ополаскивают еще 1-2 см³ той же смеси и вносят в колонку, после чего открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. Затем в колонку вносят 10 см³ смеси гексан - ацетон в соотношении 60:40, элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 15 см³ смеси гексан: ацетон в соотношении 15 : 85, элюат собирают и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона и хроматографируют.

2.6.3. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвет-550М» с ТИД или аналогичный. Колонка стеклянная 1 м х 3 мм, заполненная хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SE-30.

Температура колонки 220°С, испарителя 240°С, детектора 380°С.

Скорость газа-носителя (азот) через колонку 35 см ³/мин.

Расход водорода 17 см³/мин.

Расход воздуха 200 см³/мин.

Объем вводимой пробы 2 мм³. Время удерживания флутриафола 2.40 мин ±0.05 мин.

2.6.4. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

H₂OV

X = -,

Н,*Р

где Н|- высота (площадь) пика флутриафола в стандартном растворе, мм;

Н₂ - высота (площадь) пика флутриафола в анализируемой пробе, мм;

V - объём экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

Р - навеска анализируемого образца, г;

С - концентрация флутриафола в стандартном растворе, мкг/см³. Содержание остаточных количеств флутриафола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флутриафола 100 мкг/см³, разбавляют.

МУК 4.1.2402-08

3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости( 1):

2- |Х,-Х₂| *100

_ <Г    (1)

(Х, + Х₂)

где Хь Х₂ — результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (г = 2.8а_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

4. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± А) мг/кг при вероятности Р=0.95,

где X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

А = 6*Х /100,

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0.025 мг/кг*, где *-0.025 мг/кг - предел обнаружения в семенах и масле рапса).

5. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

11

МУК 4.1.2402-08

5.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

5.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С* должна удовлетворять условию:

Са ⁺ Ад.х I

где ± А „х (± Д„,х ) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

Д_л =± 0.84 Д, где Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

Д = 5*Х /100,

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к = Х'-Х-С_а,

где X', X, С* - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п.4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

К - V Д²л.х + Д²*,х

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|К_к|<К,    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

12

МУК 4.1.2402-08

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

5.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

2* | X, -Х₂| • 100

--------------<R,    (3)

(Xi + X₂)

где Xi, Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

6. Требования техники безопасности

При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1005-88).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

7. Требования к квалификации оператора

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п.5.

13

МУК 4.1.2402-08

8. Разработчики

Долженко В.И., Цибульская И.А., Карпова Л.М.

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.

14

ББК 51.21 0 60

О 60 Определение остаточных количеств флутриафола в семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии. Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Рос потребнадзора, 2009. - 14 с.

1.    Разработаны сотрудниками Всероссийского НИИ защиты растений (В.И. Должекко, И.А. Цибульская, Л.М. Карпова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 июля 2008 г. № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 17 июля 2008 г.

4.    Введены в действие с 1 сентября 2008 г.

5.    Введены впервые.

ББК S1.21

Формат 60x88/16    Печ.    л.    1,0

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защигы прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер.,д. 18/20

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел./факс 952-50-89

С Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены н

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

МУК 4.1.2402-08

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав

потребителей и благополучия человека.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

17 июля 2008 г.

Дата введения: I сентября 2008 г.

Определение остаточных количеств флутриафола в семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии

Методические указания

МУК 4.1.2402-08

1. Вводная часть

Настоящие методические указания устанавливают метод газожид костной хроматографии для определения в семенах и масле рапса массовой концентрации флутриафола в диапазоне концентраций 0.025 ■ 0.25 мг/кг.

Флутриафол

Структурная формула:

СА: (±) -а-(2-фторфенил)-а-(4-фторфенил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол Брутто формула: С|₆Н|зР₂ЫзО Мол. масса: 301.3 ¹

МУК 4.1.2402-08

Химически чистый препарат - твердое белое кристаллическое вещество Температура плавления: 130Х. Давление паров при 20°С 7.1 xlO"⁶ шРа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Ко* log Р=2.3 ( 20°С ) Растворимость (20°С): в воде 130 мг/дм¹, в ацетоне 190 г/дм¹, дихлор-метане 150 г/дм¹, метаноле 69 г/дм¹, гексане 0.3 г/дм¹.

В почве период полураспада DT₅₀ 65-125 дней.

Оральная токсичность (LD₅₀) для крыс 1480 мг/кг.

Гигиенические нормативы, МДУ (мг/кг): виноград - н.д., зерно хлебных злаков, свекла сахарная, яблоки, зерно кукурузы, просо, рис, горох, подсолнечник (семена и масло) - 0.05. Для семян и масла рапса гигиенические нормативы не установлены.

Область применения: фунгицид широкого спектра действия для борьбы с болезнями листа и колоса зерновых культур, также применяется для защиты плодовых, зернобобовых и других культур. Используется для борьбы с почвенными, семенными и аэрогенными инфекциями.

2. Методика определения флутриафола в семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод определения флутриафола в семенах и масле рапса основан на экстракции пестицида органическими растворителями и очистке перераспределением между двумя нссмешивающимися жидкими фазами, а также, при необходимости, на колонке с силикагелем. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД).

2.1.2. Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах

1 и 2.

4

МУК 4.1.2402-08

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±6,% Стандартное отклонение повторяемости, о„ % Предел повторяемости, г.% Предел воспроиз водимо сти, R,% семена 0.025-0.1 50 5.4 15.1 16.6 семена 0.1-0.25 25 5.0 14.0 15.4 масло 0.025 - 0.1 50 5.9 16.5 18.2 масло 0.1 -0.25 25 5.7 16.0 17.6

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, довери тельный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п=20) приведены в таблице 2.

Полнота извлечения флутриафола, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п = 20, Р = 0.95

Таблица 2

Анали зируе мый объект Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения % Стандартное отклонение, S.% Доверительный интервал среднего результата, ±, % семена 0.025 0.025-0.25 82.4 4.8 4.4 масло 0.025 0.025-0.25 81.5 5.2 4.7

2,2. Реактивы, материалы

Флутриафол, аналитический стандарт

Ацетон, о.с.ч.9-5, ТУ 2633-039-4493179-00 или ч.д.а.,

ГОСТ 2603-79

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-76

н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Стекловата.

Силикагель L 100/400 для хроматографии (0.040-0.063мм) (Хе-мапол, Венгрия)

Хлористый метилен, х.ч., ТУ-2631-020-11291058-96.

5

МУК 4.1.2402-08

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с ТИД и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1м, внутренним диаметром 3 мм.

Ванна ультразвуковая УЗВ/100 ТН, ТУ 3.836.008 или аналогичная.

Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 24104-2001.

Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-2001.

Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205 или аналогичный.

Микрошприц МШ-10,МШ- ЮМ, ТУ 2-833-106.

Воронка Бюхнера, ГОСТ 0147.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25 336-82.

Воронки делительные на 500 см³, ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные на 100 см³, 500см³ ГОСТ 1774-74.

Колбы мерные на 100 см³, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1,2, 5, 10 см³, ГОСТ 22292-74.

Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.

Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм.

2.4. Отбор проб

Отбор проб семян и масла рапса и сои - ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

Для длительного хранения семена рапса подсушивают при комнатной температуре в отсутствие света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы семян доводят до стандартной влажности и измельчают. Пробы масла рапса хранят в холодильнике при 0-4°С в закрытой стеклянной таре не более 2-х месяцев.

6

МУК 4.1.2402-08

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40Х до объема 1,0 см³ и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SE-30, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250°С в течение 8-10 часов.

2.5.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Основной раствор флутриафола готовят, количественно перенося 10 мг аналитического стандарта флутриафола в мерную колбу на 100 см³, растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора флутриафола с концентрацией 100 мкг/см³ готовят рабочие растворы с концентрациями 0.5 мкг/см³, 1 мкг/см³, 2 мкг/см³, 4 мкг/см* последовательным разведением в ацетоне.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий раствор аналитического стандарта флутриафола в гексане.

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации флутриафола в растворе в хроматограф вводят по 2 мм³ градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты (площади) пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм (площади, мв/сек) пика от концентрации флутриафола в градуировочном растворе (мкг/см³).

7

МУК 4.1.2402-08

2.5.5.    Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

Силикагель прогревают в термостате при !20°С в течение 3-х часов и охлаждают до комнатной температуры. На дно стеклянной колонки помещают стекловату, слой 0.5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г силикагеля в 25 см³ гексана при открытом кране колонки, сверху наносят слой 1 см безводного сульфата натрия. Затем колонку промывают 10 см³ смеси гексан : ацетон в соотношении 90 : 10 и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе.

2.5.6.    Проверка хроматографического поведения флутриафола

на колонке с силикагелем

В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 см³ стандартного раствора флутриафола в гексане и дают впитаться. После этого в колонку вносят 10 см³ смеси гексан : ацетон 60:40), элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 40 см³ смеси гексан : ацетон (15:85 ), отбирая фракции по 5 см³, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 см³ ацетона и хроматографируют Фракции, содержащие флутриафол, объединяют, выпаривают досуха, остаток растворяют в 1 см³ ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяя его полноту извлечения из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: профиль вымывания флутриафола может изменяться при использовании силикагеля новой партии или другой марки.

2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

2,6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов

2.6.1.1. Семена рапса. Навеску раздавленных в фарфоровой ступке семян (20 г) помещают в коническую колбу объемом 250 см³, смачивают 50 см³ теплой дистиллированной воды и оставляют на 30 мин для набухания. Затем добавляют 100 см³ ацетона и экстрагируют флутриафол в ультразвуковой ванне в течение 15 мин. Экстракт фильтруют чс-

8

МУК 4.1.2402-08

рез фильтр "белая лента" на воронке Бюхнера. Экстракцию повторяют дважды. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку объемом 500 см³, добавляют 30 см³ гексана и встряхивают в течение 2-3 мин. После полного разделения фаз нижний водно-ацетоновый слой собирают, при этом эмульсию пограничного слоя разбивают непосредственно перед тем, как предстоит отбор эмульсионного слоя, внесением в него очень малого количества хлористого натрия. Оставшийся в делительной воронке гексановый слой промывают дважды 50 см³ водного ацетона (50:50), который собирают. Объединенный водноацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40°С до объема 150-180 см³ и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2-х минут. Нижний органический слой собирают, фильтруя через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетона и дальнейшую очистку проводят на колонке с силикагелем (п. 2.6.2).

2.6.1.2. Масло рапса. 20 г масла помещают в делительную воронку объемом 500 см³, добавляют 100 см³ смеси гексан : ацетон в соотношении 2 : 1 и осторожно круговыми движениями перемешивают в течение 2-3 минут. Затем добавляют 50 см³ дистиллированной воды и встряхивают воронку в течение двух минут, происходит разделение слоев и перераспределение флутриафола в водно-ацетоновый слой, который собирают. К гексановому слою в делительной воронке добавляют 50 см³ водного ацетона (50:50), интенсивно встряхивают и после полного разделения фаз собирают водно-ацетоновый слой. Промывку гексанового слоя повторяют. Собранный водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40^сС до объема 120-150 см³ и переносят в чистую делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен трижды порциями по 50 см³. Органический слой фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси гексан-ацстон (90:10) и дальнейшую очистку проводят на колонке с силикагелем (п.2.6.2).

2.6.2. Очистка экстрактов на колонке с силикагелем

Растворенный в 2 см³ смеси гексан-ацетон (90:10) сухой остаток пипеткой количественно переносят в хроматографическую колонку,

9

1