Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской Федерации_
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств флуопиколида в воде, почве, клубнях картофеля методом капиллярной газожидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.2395—08
Издание официальное
Москва • 2009
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
4.1. Методы контроля. Химические факторы
Определение остаточных количеств флуопиколида в воде, почве, клубнях картофеля методом капиллярной газожидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.2395-08
МУК 4.1.2395-08
По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации Флуо-пиколида в растворе в мкг/см3. (рисунок 1).
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79 г., а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 1743.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 26950-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 7176-85 «Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ», ГОСТ 26832-86 «Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ».
Пробы воды хранят в герметично закрытой стеклянной таре в холодильнике при температуре 0-4 °С.
Пробы почвы просушивают в затененном месте, хранят в сухом шкафу при комнатной температуре.
Пробы клубней картофеля хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0-4 °С в течение до 3-х суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С до 2-х лет.
Перед анализом почву растирают, просеивают через сито с ячейками диаметром 0,1 мм. Клубни картофеля размораживают и измельчают на терке.
9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
9.1. Вода
Пробу воды объемом 100 см3 переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Добавляют 5 г хлорида натрия, растворяют. Добавляют 30 см3 гексана и встряхивают делительную воронку в течение двух минут. После полного разделения слоев, нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу, а верхний гексановый слой переносят в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фазу возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 см3 гексана. Объединенную гексановую фракцию выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарители при температуре бани не выше 30°С.
МУК 4.1.2395-08
Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетона и 1 мм3 вводят в хроматограф.
9.2. Почва
9.2.1. Экстракция Навеску 10 г почвы помещают в центрифужную полипропиленовую банку и смачивают ей 10 см3 дистиллированной воды. К навеске прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 10 минут. Далее встряхивают смесь на встряхивателе в течение 10 минут. Затем пробу центрифугируют 10 минут при 4000 об/мин и фильтруют полученный экстракт методом декантации через фильтр «красная лента» в концентратор. Повторяют экстракцию еще два раза, используя по 50 см3 ацетонитрила. Экстракты объединяют в концентраторе.
Из объединенного экстракта отбирают аликвоту 75 см3 (1/2 часть) и выпаривают ацетонитрил на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30°С досуха.
9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей К сухому остатку в концентратор добавляют 5 см3 ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора, туда же приливают 50 см3 дистиллированной воды, перемешивают и переносят водную фазу в делительную воронку на 250 см3. В концентратор добавляют еще раз 50 см3 дистиллированной воды, тщательно обмывают стенки и переносят водную фазу в ту же делительную воронку. Добавляют 5 г хлорида натрия и встряхивают воронку до полного растворения осадка.
Добавляют к водной фазе 30 см3 гексана и интенсивно встряхивают смесь в течение 1-2 мин. После разделения слоёв нижний водный слой собирают в тот же концентратор, а верхний (гексановый) собирают в чистый концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и экстрагируют Флуопиколид ещё дважды, используя для этого каждый раз 30 см3 гексана. Объединённый гексановый экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 25-30°С.
11
МУК 4.1.2395-08
9.2.3. Очистка экстракта на колонке с Флоризилом Сухой остаток в концентраторе, полученный по пункту 9.2.2., растворяют в 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, обмывают стенки концентратора и полученный раствор наносят на подготовленную колонку согласно пункту 7.1. В концентратор добавляют 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, ополаскивают стенки и наносят на колонку. Затем наносят на колонку 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, элюат отбрасывают. Флуопиколид элюируют с колонки 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 7:3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 25-30°С.
Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
9.3. Клубни картофеля
9.3.1. Экстракция
Навеску 10 г клубней картофеля помещают в полипропиленовую банку. К навеске прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 10 минут. Далее встряхивают смесь на встряхива-теле в течение 10 минут и фильтруют полученный экстракт методом декантации через фильтр «красная лента» в концентратор. Повторяют экстракцию еще два раза, используя по 50 см3 ацетонитрила. Экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают ацетонитрил на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30°С досуха.
Далее проводят анализ, как указано в пунктах 9.2.2 и 9.2.3.
9.4. Условия хроматографирования
Высокоэффективный газовый хроматограф «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану 4х 10'14 г/см3 и приспособлениями для капиллярной колонки.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, (5% фенил-95 % метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура детектора - 320°С, испарителя - 250°С, программированный нагрев колонки со 160°С (выдержка 1 минута) по 10 град/мин до 220°С, с 220°С по 15 град/мин до 250°С.
МУК 4.1.2395-08
Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ П, режим нормальный, скорость 20 см/с, давление 89,45 кПа.
Газ 2 (гелий) - сброс 1:10, расход 0,5 см3/мин,.
Газ 3 (азот, поддув детектора) - 45 см3/мин.
Продувка: температура колонки 270°С, Газ 2 - 60 см3/мин, Газ 3-60 см3/мин, время 5 минут.
Абсолютное время удерживания Пропаргита -12 мин 53 сек. + 2%.
Линейность детектирования сохраняется в пределах - 0,5-5,0 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией Пропаргита 5,0 мкг/см3, соответственно разбавляют.
Количественное определение Пропаргита проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов Пропаргита с концентрацией 0,5 -5,Омкг/см3.
10. Обработка результатов анализа
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Пропаргита рассчитывают по формуле:
Snp • А V
Х=-хР
100- Sct- m
где X - содержание Пропаргита в пробе, мг/кг;
Sct - высота (площадь) пика стандарта, мВ;
Snp - высота (площадь) пика образца, мВ;
А - концентрация стандартного раствора, мкг/см3;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
см3;
ш - масса анализируемого образца, г;
Р - содержание Флуопиколида в аналитическом стандарте, %.
13
МУК 4.1.2395-08
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (I):
2-|Х,~Хз|-100 <г (1)
(Х,+Х2)
где X,, Х2- результаты параллельных определений, мг/кг; г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г ** 2.8 аг При невыполнении условия П) выясняют причины превышения предела
повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
(Х± Д2 мг/кг при вероятности Р= 0.95,
где X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
Д = б*Х/100,
5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг»*
* - 0.01 мг/кг - предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
МУК 4.1.2395-08
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:
Сд “ А л.х ^ А лЗс*,
где, ± А яЗс (±А я;х) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:
А ,а ±0,84 А,
где А - ^граница абсолютной погрешности, мг/кг;
Д = 6*Х/100,
6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Результат контроля процедуры К* рассчитывают по формуле:
Кк = Х'- Х-Сд,
где X', X, Сд среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. И), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг;
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
К = VAV 5с + Д^а, X
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К*) с нормативом контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
|К.|<К, (2)
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
15
ББК 51.21 0-60
0-60 Определение остаточных количеств флуопиколида в воде, почве и клубнях картофеля методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания. -М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - 16 с.
1 .Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К. А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» (Калинин В.А., Калинина Т.С., Рыбакова О.И., Третьякова О А.).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по сашггарно -эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 апреля 2008 г. № 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 июля 2008 г.
4. Введены в действие с 5 сентября 2008 г.
5. Введены впервые.
ББК 51Л1
Формат 60x88/16 Печ. л. 1,0.
Тираж 200 экз.
Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковсхий пер., д. 18/20.
Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, телефакс 952-50-89.
С Роспотребнадзор, 2009 С Федеральный центр гигиены н эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009
МУК 4.1.2395-08
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный Государственный санитарный врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
2 июля 2008 г.
Дата введения.- 5 сентября 2008 г.
4.1. Методы контроля. Химические факторы
Методические указания по определению остаточных количеств флуопиколида в воде, почве и клубнях картофеля методом капиллярной газожидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.2395-08
Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Флуопиколида в воде в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/л и в почве в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг; а также уровня остаточных количеств в клубнях картофеля в диапазоне 0,0) - 0,1 мг/кг.
Название действующего вещества по ИСО: Флуопиколид.
Название по ИЮПАК: 2,6-дихлоро-Ы-[3-хлоро-5-(трифторметил>-2-пиредилметил]бензамид.
Эмпирическая формула: C|«HjCbF3N20. Молекулярная масса: 383,59. Агрегатное состояние: порошок. 1
МУК 4.1.2395-08
Цвет, запах: бежевый, фенольный.
Давление насыщенного пара: 8,03 мПа при 25°С.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 25°С: К** logP = 2,9.
Растворимость в воде при 20°С - 2,8 мг/л (pH 4-7).
Растворимость в органических растворителях г/л: этил ацетате -37,7; н-гексане - 0,2; ацетоне - 74,7.
Гидролиз Флуопиколида в водных растворах: DT50 - 365 дней при pH 5; 330 дней при pH 7; 365 дней при pH 9. Фотолиз: DT50 - 64,2 дня.
Краткая токсикологическая характеристика: Флуопиколид относится к малоопасным веществам по острой пероральной (ЯД*, (крысы) >5000 мг/кг), к умеренно опасным веществам по ингаляционной [ЛК50 (4 час) для крыс >5160 мг/м1 воздуха) и к малоопасным веществам по накожной (ЛД50 для крыс > 5000 мг/кг) токсичности. Раздражает слизистые оболочки глаз, но нс раздражает кожу.
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
ПДК в воде - 0,05 мг/дм1; ОДК в почве - 0,14 мг/кг;
ВМДУ в клубнях картофеля - 0,05 мг/кг
Флуопиколид - контактно-системный фунгицид, проявляющий активность против грибов класса Оомицеты. Нарушает прорастание зооспор и конидий, ингибирует спорообразование и развитие мицелия.
Высоко эффективен в подавлении фитофтороз на картофеле и томатах при норме расхода 80 - 120 г д.в. на га в период вегетации культуры до четырех обработок за сезон с интервалом между обработками 7-10 дней в зависимости от погодных условий и развития болезни. Используется для производства заводских смесей фунгицидов.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в Таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
4
МУК 4.1.2395-08
Таблица 1
Метрологические параметры для Флуопнколида |
Анализи
руемый
объект |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг |
Показатель точности (граница относительной погрешности), ±5, % Р=0,95 |
Стандартное отклонение повторяемости, о„% |
Предел повторяемости, г» % |
Предел воспроизводимости, R, % |
Вода |
0,01-0,1 |
50 |
3 |
7 |
9 |
0,005-0,01 |
100 |
3 |
8 |
9 |
Почва |
0.1-1.0 |
25 |
2 |
7 |
8 |
0,01-0,1 |
50 |
3 |
8 |
9 |
Клубим
картофеля |
0,01-0,1 |
50 |
3 |
8 |
10 |
|
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в Таблице 2. |
Таблица 2
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для Флуопнколида |
Анализируемый объект |
Метрологические параметры, Р * 0.95. п - 20 |
Предел обнаружения, мг/кг |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг |
Среднее значение определения, V# |
Стандартное отклонение, S, % |
Доверительный интервал среднего результата. |
Вода |
0,005 |
0,005-0,05 |
94,3 |
2,8 |
±1,3 |
Почва |
0,02 |
0,02-0,2 |
75,8 |
__ 2,7 |
±1,0 |
Клубни
картофеля |
0,01 |
0,01-0,1 |
85,9 |
2,9 |
±1,2 |
|
2. Метод измерения
Метод основан на определении Флуопнколида методом капиллярной ГЖХ с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из матрицы органическим растворителем, перераспределения между двумя несмешивакицимися растворителями и последующей очистки на колонках с Флоризилом.
5
МУК 4.1.2395-08
Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», Z П 140.
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г «ACCULAB» V600.
Колбы мерные на 25, 50, 100 см3, ГОСТ 1770-74.
Микрошприц на 10 мм3, ТУ 2.833.106.
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см3, ГОСТ 20292-74.
Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Лицдану 4х 10‘14 г/см3 и приспособлениями для капиллярной колонки.
Цилиндры мерные на 10,25 и 50 см3, ГОСТ 1770-74.
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Аналитический стандарт Флуопиколид с содержанием 98,9 % д.в. (фирма Байер КропСайенс АГ).
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Ацетон х.ч., ТУ 6-09-3513-86.
Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
Гелий, очищенный марки “А”, ТУ 51-940-80.
Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60-80 меш, фирма «Агрос Органике», Бельгия, код 205450010.
Стандартный раствор Флуогшколида в ацетоне - 1 мг/см3 (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).
6
МУК 4.1.2395-08
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой классификации.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1».
Банки с крышками для экстракции на 250 см3, полипропилен, кат. № 3120-0250, NALGENE.
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4.
Виалы с тефлоновыми прокладками, Aldrich, cat. Кр. Z27,702-9.
Воронки химические для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные на 250 см3, ГОСТ 10054-75.
Испаритель ротационный Rotavapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма Буши;
Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 см3, КГ1Ш-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.
Концентраторы грушевидные (конические) 250 см3, ГОСТ 10394-72.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1, (100 % метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы Хьюлетт Паккард.
Насос диафрагменный FT. 19 фирмы KNF Neu Laboport.
Фильтры бумажные "Красная лента", ТУ 6-09-1678-86.
Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см .
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «предельно-допустимые
7
МУК 4.1.2395-08
концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°с и относительной влажности не более 80%.
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к определению
7J. Подготовка колонки, заполненной Флор из илом, для очистки экстракта
На дно пластиковой хроматографической колонки (высота 15 см, диаметр 1,5 см) помещают пробочку из стекловаты и заполняют колонку Флоризилом на высоту 10 см. На слой Флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. Перед нанесением пробы колонку промывают 10 см3 ацетона, высушивают, и 10 см3 гексана. Колонка готова к работе.
7.2. Проверка хроматографического поведения Флуопиколида на колонках с Флоризилом
При отработке методики или поступлении новой партии Флоризила проводят изучение поведения Флуопиколида на колонке. В концентратор вносят 1 см3 стандартного раствора Флуопиколида в ацетоне с концентрацией 0,1 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 25-30°С. Добавляют 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, растворяют содержимое концентратора и наносят на колонку, подготовлен-
8
МУК 4.1.2395-08
ную, как описано в пункте 7.1. В концентратор добавляют 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, ополаскивают стенки и наносят на колонку. Затем наносят на колонку 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, элюат отбрасывают. Флуопиколид элюируют с колонки последовательно 4-мя порциями объёмом 5 см3 каждая смеси гексана с ацетоном в соотношении 7:3. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают досуха при температуре водяной бани не выше 25-30°С.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый объём элюата.
7.3. Приготовление рабочих растворов
7.3.1. Приготовление стандартных растворов.
100 мг Флуопиколида (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/ см3). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.
Методом последовательного разбавления исходного раствора № 1 ацетоном готовят стандартный раствор К» 2 с концентрацией 10,0 мкг/см3, который может храниться в холодильнике не более 30 суток.
Методом последовательного разбавления исходного раствора № 2 ацетоном готовят рабочие растворы Флуопиколида с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05; 0,1; ОД; 0,5 мкг/см3 для построения калибровочного графика и для внесения в образцы, которые могут храниться в холодильнике не более 10 суток.
7.4. Построение градуировочного графика
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Флуопиколида в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 6-ти растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 мкг/см3.
В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
9
1