Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пропамокарба гидрохлорида в клубнях картофеля методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2390—08

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей н благополучия человека

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Определение остаточных количеств пропамокарба гидрохлорида в клубнях картофеля методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2390-08

МУК 4.1.2390-08

тем же объемом диэтилового эфира. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С досуха.

9.1.2. Очистка экстракта на патроне Диапак С16

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 1 см* ацетонитрила, добавляют 10 см³ деионизированной дистиллированной воды, тщательно обмывают концентратор, наносят содержимое концентратора на кондиционированный патрон и пропускают через него со скоростью, указанной в разделе 7.1 Л. Смыв отбрасывают. Промывают патрон 10 см³ смеси ацетонитрил:вода - 1:1, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 25 см³ смеси ацетонитрил с 0,1 н раствором соляной кислоты в соотношении 1:1, пропускают через патрон и собирают весь объем в концентратор емкостью 100 см³. Элюат выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 45-50°С досуха.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 4 см³ ацетона и вводят в хроматограф 1 мм³ пробы.

9.2. Условия хроматографирования

Хроматограф "Кристалл 5000.1" с термоионным детектором с пределом детектирования по фосфору в паратионметиле 3x10 ^м г/см³ и приспособлениями для капиллярной колонки или другой с аналогичными характеристиками.

Капиллярная кварцевая колонка НР-5, длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,7 мкм.

Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 100°С, выдержка 1 минута, нагрев колонки по 20°С в минуту до 210°С, выдержка 5 мин.

Продувка детектора после анализа азотом - 40 см³/мин в течение 3 минут. Нагрев колонки до 260°С.

Температура испарителя - 200°С, детектора - 300°С.

Газ 1 - гелий (газ-носитель), давление на входе - 7 кПа, давление на выходе - 101,3 кПа, линейная скорость - 26,812 см/сек, поток -2,935 см³/мин. Мертвое время - 0,62 мин. Регулятор расхода Г1 - РРГ-10.

Газ 2 - гелий (сброс пробы), режим Splitless, расход во время анализа -10 см³/мин; деление потока - 1:30, начало сброса - 30 сек, длительность сброса - 2 мин. Регулятор расхода Г2 - РРГ-11.

Газ 4 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 35 см³/мин.

Газ 5 - водород, расход во время анализа - 11,5 см³/мин.

Газ 6 - воздух, расход - 200 см³/мин.

11

МУК 4.1.2390-08

Абсолютное время удерживания Пропамокарба гидрохлорида -6 мин 35 сек.- 6 мин 42 сек.

Минимально детектируемое количество Пропамокарба гидрохлорида в анализируемом объеме - 0,25 нг

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,25 - 2,0 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией Пропамокарба гидрохлорида 2,0 мкг/см³ соответственно, разбавляют.

10. Обработка результатов анализа

Для определения содержания Пропамокарба гидрохлорида в пробах методом ГЖХ используют следующую формулу:

Snp-A-V

Х=-х Р

100-Scrm

где X - содержание Пропамокарба гидрохлорида в пробе, мг/кг;

Sct - площадь пика стандарта, мВ;

Snp - площадь пика образца, мВ;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,

см³;

ш - масса анализируемого образца, г;

Р - содержание Пропамокарба гидрохлорида в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2-pfr-Xal-lOO    <r    (1)

(X, + Х₂)

где X_t, Х₂- результаты параллельных определений, мг/кг;

г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г = 2.8 о_г.

12

МУК 4.1.2390-08 При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела

повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(Х± А) мг/кг при вероятности Р= 0.95,

где X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Д = 6*Х/100,

б - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица I), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,05мг/кг» *

* - 0.05 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

С_д~ А _я,х + А*.*',

где, ± Д „у (±Д _ЛУ) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Д,= ±0,84 А,

где А -^граница абсолютной погрешности, мг/кг;

А = 6*Х/100,

б - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %. Результат контроля процедуры К* рассчитывают по формуле:

13

МУК 4.1.2390-08

К_к=^₌ Х-С_д,

где )С, X, С_д среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

К = у1а\х + Ь\х

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

IKJ < К,    (2)

процедуру анализа признают удовлетворителной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)

21Х,-Х₂[100 <R    (3)

(Х,+Х₂)

где Xi, Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости ( в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

14. Разработчики

Калинин В.А., профессор, канд. с-х наук, Калинина Т.С., ст. науч. сотр., канд. с-х наук.

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».

Адрес: 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1.

Тел. (495) 976-37-68, факс (495) 976-43-26.

МУК 4.1.2390-08 УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный Государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

2 июля 2008 г.

Дата введения: 5 сентября 2008 г.

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Определение остаточных количеств пропамокарба гидрохлорида в клубнях картофеля методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2390-08

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в клубнях картофеля массовой концентрации Пропамокарба гидрохлорида в диапазоне 0,05 - 0,4 мг/кг.

Название действующего вещества по ИСО: Пропамокарб гидрохлорид.

Название действующего вещества по ИЮПАК:    Пропил-

[З-(димстиламино) пропил]карбамат гидрохлорид

Структурная формула:

СН₃

_/N(CH₂)₃NHC0₂(CH₂)₂CH₃ .НО СН₃

Эмпирическая формула: C9H21CIN2O2.

Молекулярная масса: 224,7.

Химически чистый Пропамокарб гидрохлорид представляет собой бесцветное кристаллическое, чрезвычайно гигроскопическое вещество без запаха.

Давление паров при 20°С: 3,85* 10'² мПа.

Температура плавления 45-55°С.

3

МУК 4.1.2390-08

Коэффициент распределения н-октанол - вода: Ко* log P_ow - -2,6. Растворимость (г/дм³) при 20°: вода - 1005; метанол - 656; дихлорметан - 626; ацетон - 560,0; этилацетат - 4,34; толуол - 0,14; гексан - менее 0,01.

Пропамокарб гидрохлорид стабилен при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в водном растворе при различных значениях pH и температуры.

Краткая токсикологическая характеристика:

Пропамокарб гидрохлорид относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД50 для крыс - 2000-2900 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс и мышей более 3000 мг/кг) и умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛК50 -5540 мг/м³ при 4 часовой экспозиции).

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ОДК в почве - 0,1 мг/кг;

ПДК в воде - 0,08 мг/дм³;

ВИДУ в огурцах - 0,05 мг/кг.

МДУ в клубнях картофеля - 0,1 мг/кг.

Область применения:

Пропамокарб гидрохлорид - системный фунгицид с продолжительным защитным действием, рекомендуемый для борьбы с возбудителями пероноспороза, фитофтороза, черной ножки, корневых гнилей овощных, декоративных культур и табака путем внесения в почву, опрыскивания вегетирующих растений и обработки семян, корней рассады, клубей и клубнелуковиц перед посадкой.

В России применяется как средство борьбы с возбудителями пероноспороза и корневых гнилей на огурцах, черной ножки рассады капусты, фитофтороза глоксинии и томатов защищенного грунта, корневых гнилей табака при норме расхода 1,0 - 3,5 кг д.в./га за обработку. Пропамокарб гидрохлорид всходит в состав смесевых препаратов, применяемых на картофеле.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в Таблице I для соответствующих диапазонов концентраций.

4

МУК 4.1.2390-08 Таблица 1 ^{1 2}

Метрологические параметры

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности) ±5, % Р=0,95 Стандартное отклонение повторяемо сти, о„% Предел повто ряемости, г,% Предел воспроизводимости, R, % Картофель, клубни 0,10-1,0 25 5,39 15 18 0,05-0,1 50 2,93 8 10

Полнота извлечения Пропамокарба гидрохлорида, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в Таблице 2.

Таблица 2 Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р “ 0,95, п * 20 Предел обнаруже ния, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S.% Доверительный интервал среднего результата, ±.% Картофель, клубни 0,05 0,05-0.4 84,7 4,80 1,86

МУК 4.1.2390-08

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности + 0,038 г V600, «ACCULAB».

Колбы мерные вместимостью 10, 50, 100 и 1000 см², ГОСТ 1770-74;

Микрошприц Гамильтон, вместимостью 10 мм²;

Пипетки мерные вместимостью 1,2, 5 и 10 см², ГОСТ 20292-74.

Стаканы мерные вместимостью 200 и 1000 см², ГОСТ 6236.

Хроматограф газовый «Кристалл 5000.1» с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по азоту в азобензоле 5х 10'¹³ г/см² и приспособлениями для капиллярной колонки.

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100 и 250 см², ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Аналитический стандарт Пропамокарба гидрохлорида с содержанием 76,6% д.в. (фирма Байер Кроп Сайенс);

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, х.ч.,ТУ 6-09-06-1092-83;

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72;

Гелий, очищенный марки “А”, ТУ-51-940-80.

Кислота хлороводородная, конц., х.ч., ГОСТ 3118-77.

Натрия гидроокись, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76.

Эфир диэтиловый (для наркоза, Фармакопея СССР).

Стандартный раствор Пропамокарба гидрохлорида в ацетоне -1 мг/см² (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания проб TYP LT1 фирмы «SKLO UNION». Банки с крышками для экстракции на 250 см², полипропилен, кат. №3120-0250, NALGENE.

Воронки химические для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75;

Воронки делительные на 250 см², ГОСТ 10054-75;

Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480;

6

МУК 4.1.2390-08

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 см³, НШ 29 КГУ - 100 (250) ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая НР-5 (5% дифенил и 95% диметилполисилоксан) длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,65 мкм, фирма J&W Scientific.

Насос вакуумный диафрагменный FT. 19 фирмы KNF Neu Laboport.

Патроны Диапак С16, ТУ 4215-002-05451931 -94.

Фильтры бумажные "красная лента”, ТУ 6-09-2678-77.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К подготовке проб допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%;

выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7

МУК 4.1.2390-08

7. Подготовка к выполнению измерений

7.1.1. Подготовка концентрирующего патрона Диапак С16 Патрон устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл, который используют как емкость для элюентов.

Патрон кондиционируют, пропуская через него последовательно 10 мл ацетонитрила и 10 мл деионизированной дистиллированной воды. Смывы отбрасывают. Растворы пропускают через патрон под вакуумом, скорость потока растворов должна быть не более 2 мл/мин (1 капля в 2 секунды). Нельзя допускать осушения поверхности патрона!

7.1.2. Проверка хроматографического поведения Пропамокарба гидрохлорида на патронах Диапак С16 При отработке методики или поступлении новой партии патронов проводят изучение поведения Пропамокарба гидрохлорида на патронах. В концентратор помещают 1 см³ стандартного раствора Пропамокарба гидрохлорида в ацетоне с концентрацией 1 мкг/см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 10 см³ деионизированной дистиллированной воды, перемешивают содержимое концентратора, наносят на патрон и пропускают через него со скоростью, указанной в разделе 7.1.1. Смыв отбрасывают.

Промывают патрон 10 см³ смеси ацетонитрил:вода - 1:1, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 25 см³ смеси ацетонитрил с 0,1 н раствором соляной кислоты в соотношении 1:1, отбирая последовательно по 5 мл элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 45-50°С досуха.

Сухой остаток в концентраторах растворяют в 1 см³ ацетона и вводят в хроматограф 1мм³. По результатам обнаружения Пропамокарба гидрохлорида в каждой фракции определяют объем смеси ацетонитрил с 0,1 н раствором соляной кислоты в соотношении 1:1, необходимый для полного вымывания Пропамокарба гидрохлорида.

7.2. Приготовление рабочих растворов

7.2.1. Приготовление 1 н раствора хлороводородной (соляной) кислоты Раствор готовят из химически чистой концентрированной кислоты с плотностью 1,19 путем разведения 82 см³ концентрированной кислоты дистиллированной водой в мерной колбе на 1 дм³.

8

МУК 4.1.2390-08

7.2.2. Приготовление 0,1н раствора хлороводородной кислоты

Раствор готовят из химически чистой концентрированной кислоты с плотностью 1,19 путем разведения 8,2 см³ концентрированной кислоты дистиллированной водой в мерной колбе на 1 дм³.

7.2.3. Приготовление 10н раствора гидроокиси натрия

Навеску гидроокиси натрия 400 г растворяют в дистиллированной воде в стакане емкостью 1000 см³, переливают раствор в мерную колбу емкостью 1 дм³. Стакан ополаскивают 400 см³ дистиллированной воды, воду сливают в ту же колбу. После охлаждения раствора доводят его уровень до метки дистиллированной водой.

7.2.4.    Приготовление деионизированной воды

Деионизированную воду получают при кипячении бидистиллята в

течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/дм³, и затем перегоняют.

13. Приготовление стандартных растворов

50 мг Пропамокарба гидрохлорида (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 50 см³, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/см³). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.

Методом последовательного разбавления исходного раствора № 1 ацетоном готовят рабочие растворы Пропамокарба гидрохлорида с концентрацией 0,25; 0,5; 1,0; 2,0 мкг/см³ для построения калибровочного графика и внесения в образцы, которые могут храниться в холодильнике не более 30 суток.

7.4.    Построение градуировочного (рафика

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Пропамокарба гидрохлорида в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,25; 0,5; 1,0; 2,0 мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 9.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации Пропамокарба гидрохлорида в растворе в мкг/см³ (рисунок 1).

9

МУК 4.1.2390-08

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79 г., а также в соответствии с ГОСТ 7176-85 «Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ», ГОСТ 26832-86 «Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ».

Пробы клубней картофеля хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0-4 °С в течение до 3-х суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С до 2-х лет.

Перед анализом клубни картофеля размораживают и измельчают на терке.

9. Выполнение определения

9.1. Клубни картофеля

9.1.1. Экстракция Пропамокарба гидрохлорида из анализируемой пробы

Навеску 20 г измельченных клубней картофеля помещают в полипропиленовые банки объемом 250 см³, заливают 50 см³ смеси ацетонитрил с 1н раствором соляной кислоты в соотношении 8:2, перемешивают содержимое банки и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт оставляют на ночь.

На следующий день экстракт отфильтровывают в концентратор емкостью 250 см³ через стеклянную воронку с бумажным фильтром. Экстракцию повторяют еще 2 раза, заливая пробу той же смесью объемом 50 мл, и встряхивая пробу в течение 15 минут. Экстракты фильтруют в тот же концентратор. Содержимое концентратора выпаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре 40-45°С.

К водному остатку в концентраторе добавляют 7 см³ Юн раствора гидроокиси натрия, перемешивают содержимое концентратора и переносят в делительную воронку емкостью 250 см³. В делительную воронку добавляют 3 г хлористого натрия и встряхивают воронку до полного растворения соли.

Приливают в делительную воронку 50 см³ диэтилового эфира, содержимое воронки встряхивают в течение 1-2 минут. После разделения слоев нижний водный слой сливают в стакан емкостью 200 см³, а эфир собирают в концентратор емкостью 250 см³, пропуская его через воронку с безводным сульфатом натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза с

1

Метод измерений

Метод основан на определении Пропамокарба гидрохлорида методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ органическим растворителем, очистки методом перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и дополнительной очистки на патронах Диапак С16.

Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и условий программирования.

2

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Весы аналитические I 11140, фирма «OHAUS».

5