Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флудиоксонила в семенах и масле рапса, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2332—08

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флудиоксонила в семенах и масле рапса, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2332-08

МУК 4.1.2332-08

7.6. Приготовление градуировочных растворов

7.6.1.    Исходный раствор флудиоксонила для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,010 г флудиоксонила, растворяют в 40-50 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение 3-х месяцев.

7.6.2.    Раствор флудиоксонила Mel для градуировки (концентрация 10 мкг/см³).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора флудиоксонила с концентрацией 100 мкг/см³ (п.7.6.1.), разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов №№ 2-5.

Для приготовления проб семян, масла, ягод и сока с внесением при оценке полноты извлечения флудиоксонила из исследуемых образцов используют ацетоновый раствор флудиоксонила с концентрацией 10 мкг/см³.

Градуировочный раствор № 1 и ацетоновый раствор флудиоксонила хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°с в течение месяца.

7.6.3.    Рабочие растворы МеМе 2-5 флудиоксонила для градуировки (концентрация 0,05-0,5 мкг/см³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0.5, 1.0, 2.5 и 5.0 см³ градуировочного раствора № 1 флудиоксонила с концентрацией 10 мкг/см³ (п.7.6.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4., тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2-5 с концентрацией флудиоксонила 0.05, 0.1, 0.25 и 0.5 мкг/см³, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.7. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость высоты пика (мм) от концентрации флудиоксонила в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 7.6.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

11

МУК 4.1.2332-08

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79 г.) и правилами, определенными ГОСТом 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТом 8988-77 «Масло рапсовое. ТУ», ГОСТом 25896-83 «Виноград свежий столовый».

Пробы семян рапса высушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов в течение 1 года.

Пробы масла хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4°С не более 30 дней. В некоторых случаях масло получают из семян рапса экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

Пробы ягод анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше -18°С.

Сок получают из ягод непосредственно перед проведением анализа. Перед анализом семена и ягоды измельчают с помощью кофемолки и гомогенизатора.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция флудиоксоиила

9.1.1. Семена. Образец размолотых семян рапса массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 25 см³ ацетонитрила. Экстракт и промывную жидкость, объединенные в мерном цилиндре, перемешивают, измеряют объем раствора и ¹/г его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³. К пробе приливают 20 см³ гексана и смесь интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и затем упаривают досуха на ротационном вакуумном

МУК 4.1.2332-08

испарителе при температуре 40°С. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.2.    Масло. Образец масла массой 5 г вносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, добавляют 50 см³ метанола и воронку интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. Эмульсию переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 минут при 4000 об/мин. Метанольный слой декантируют в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Операцию экстракции масляной фазы повторяют, используя 30 см³ метанола. Объединенный метанольный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30°С. Дальнейшую очистку проводят по п. 9.2.

9.1.3.    Ягоды. Навеску измельченного растительного материала массой 25 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, приливают 100 см³ ацетона и гомогенизируют 3 минуты при 10000 об/мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 см³. Остаток на фильтре промывают 50 см³ ацетона. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/5 объема раствора (эквивалентную 5 г образца), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (1-2 см³) при температуре 40°С. Дальнейшую очистку проводят по п. 9.2.

9.1.4.    Сок. Навеску (20 г) свежевыжатого сока помещают в химический стакан, приливают 60 см³ деионизованной воды, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/4 объема раствора (эквивалентную 5 г образца), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (2-3 см³) при температуре 40°С. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмвшивающихся растворителей

Остатки экстрактов, полученных по пп. 9.1.1., 9.1.2., 9.1.3. и 9.1.4., растворяют в 30 см³ смеси ацетонитрил-вода (3:7, по объему) и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. Прибавляют 30 см³ смеси гексан-диэтиловый эфир (4:1, по объему) и воронку интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажный фильтр в конусной воронке, в круг-

13

МУК 4.1.2332-08

лодонную колбу вместимостью 100 см³. Операцию экстракции водноацетонитрильной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 см³ смеси гексан-диэтиловыЙ эфир (4:1, по объему). Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С.

9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п.9.2., растворяют в 0,6 см³ этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,4 см³ гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают 3 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 100 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек., отбрасывают первые 45 см³ элюата и собирают последующие 60 см³ в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С и остаток подвергают дополнительной очистке на концентрирующем патроне Диапак С8 по п. 9.4.

9.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак С8

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.3., растворяют в 0,9 см³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на

1    мин., добавляют 2,1 см³ бидистиллированной воды, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон Диапак С8, подготовленный по и. 7.2., со скоростью 1-2 капли в сек. После нанесения пробы патрон промывают 4 см³ смеси ацетонитрил-вода (3:7, по объему), элюат отбрасывают. Флудиоксонил элюируют с патрона 4 см³ смеси ацетонитрил-вода (6:4, по объему) в круглодонную колбу вместимостью 50 см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С. Остаток в колбе растворяют в

2    см³ подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по п. 7.4., помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. и анализируют на содержание флудиоксонила по п. 9.5.

МУК 4.1.2332-08

9.5. Условия хроматографирования

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирмы Knauer, Германия)

Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасфер 110-С 18 (5 мкм)

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (50:50, по объему)

Скорость потока элюента: 0,8 см³/мин Рабочая длина волны: 268 нм Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы: 20 мм³

Ориентировочное время выхода флудиоксонила: 9,6 - 10,2 мин. Линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4.

Альтернативная подвижная фаза: Диасорб 130-С 16 Ориентировочное время выхода флудиоксонила: 8,8 - 9,3 мин.

10. Обработка результатов анализа

Содержание флудиоксонила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Hi х А х V

X =------------,    где

Н₀ х ш

X - содержание флудиоксонила в пробе, мг/кг;

Hi - высота пика образца, мм;

Н₀ - высота пика стандарта, мм;

А - концентрация стандартного раствора флудиоксонила, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,

см³;

ш - масса анализируемой части образца (г) / для семян, масла, ягод и сока - 5 г/.

15

МУК 4.1.2332-08

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

( X , * X , } где Х|, Х₂- результаты параллельных определений, мг/кг;

г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г = 2.8а_г. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± Л) мг/кг при вероятности Р= 0.95,

где X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Л- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Л =6*Х/100,

б - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения»

< 0,02 мг/кг для семян и масла рапса, ягод и сока винограда*.

* -0,02 мг/кг - предел обнаружения для рапса и винограда.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

МУК 4.1.2332-08

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный Государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

15 февраля 2008 г.

Дата введения: 10 апреля 2008 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флудиоксонила семенах и масле рапса, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2332-08

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации флудиоксонила в семенах и масле рапса, ягодах и соке винограда в диапазоне 0,02-0,2 мг/кг.

Название вещества по ИСО: Флудиоксонил

Название вещества по ИЮПАК: 4-(2,2-дифтор-1,3-бензодиоксол-4-ил)-пиррол-3-карбон итри л

c,₂h₆f₂n₂o₂

Мол. масса: 248,2 ¹

МУК 4.1.2332-08

Бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления: 199,8°С. Давление паров при 25°С: 3,9 х 10*² мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow log Р = 4,12. Растворимость (г/дм¹) при 25°С: ацетон - 190, этанол - 44, н-октанол - 20, толуол - 2,7, гексан - 0,008, вода - 0,0018.

В биологически активных почвах в аэробных условиях флудиоксо-нил быстро разлагается или переходит в прочносвязанное состояние: DTso = 10-25 дней.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс и мышей -

>    5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LDso) для крыс -

>    2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс -

>    2600 мг/м¹ воздуха. Флудиоксонил не оказывает раздражающего действия на слизистые оболочки глаз и кожу кроликов и не обладает тератогенным, мутагенным и онкогенным эффектами. Фунгицид практически нетоксичен для птиц, рыб, пчел, диких животных, дождевых червей, дафний и водорослей.

Рекомендуемый норматив для флудиоксонила в рапсе (семена и масло) и винограде (ягоды, сок) - 0,05 мг/кг.

Область применения

Флудиоксонил - контактный фунгицид широкого спектра действия с продолжительной активностью. Высокоэффективен против снежной плесени, твердой головни, гельминтоспориозной и фузариозной корневых гнилей на зерновых злаках, а также ризоктониоза, склеротиниоза, серой гнили и альтернариоза на винограде, косточковых плодовых, овощных и декоративных культурах.

Применяется в России в качестве фунгицида для предпосевного протравливания семян зерновых культур, гороха, подсолнечника и сахарной свеклы, а также для обработки клубней картофеля перед закладкой на хранение с нормой расхода от 5 до 125 г д.вУт.

1. Метрологические характеристики метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р=0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

МУК 4.1.2332-08

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п=20) приведены в таблице 2.

Таблица 1

Анализируемый объект Диапазон определяемых кон-цен-траций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности) ±6, % Стандартное отклонение повторяемости Or, % Предел повторяе мости г,% Предел воспроизводимости R, % Семена рапса более 0,1 до 0,2 25 2,1 5,9 9,1 от 0,02 до 0,1 вкл. 50 2,5 7,0 10,8 Масло рапса более 0,1 до 0,2 25 2,0 5,6 8,7 от 0,02 до 0,1 вкл. 50 2,9 8,1 12,6 Ягоды винограда более 0,1 до 0,2 25 2,4 6,7 10,4 от 0,02 до 0,1 вкл. 50 2,7 7,6 11,7 Сок винограда более 0,1 до 0,2 25 1,9 5,3 8,2 от 0,02 до 0,1 вкл. 50 2,4 6,7 10,4

Метрологические параметры

Анализи руемый объект Метрологические параметры, Р ■ 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S,e/o Относительное отклонение DS, % Довери тельный интервал среднего, % Семена рапса 0,02 0,02 - 0,2 83,1 3,1 1,4 ±2,9 Масло рапса 0,02 0,02 - 0,2 82,8 3,0 1,3 ±2,8 Ягоды винограда 0,02 0,02-0,2 85,5 3,3 1.5 ±3,0

5

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором. Контроль флудиоксонила в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из семян и масла ацетонитрилом, из ягод - ацетоном, из сока - смесью гексана и диэтилового эфира, очистки экстракта перераспределением в системе иесмешиваю-щихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак С8.

Идентификация проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается подбором колонки и состава подвижной фазы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Кпаиег, Германия)

Весы аналитические ВЛА-200

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,036 г

Колбы мерные вместимостью 2-100-2,2-1000-2 Меры массы

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 см³

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1000 см³

6

МУК 4.1.2332-08

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Флудиоксонил, аналитический стандарт с содержанием

д.в. 99,8% (Сингента, Швейцария) Ацетонитрил, хч Вода б иди стиллиро ванная н-Гексан, хч

Натрий сернокислый, безводный, хч Спирт метиловый (метанол), хч Этиловый эфир уксусной кислоты, ч Эфир диэтиловый

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Со. (США) Воронка Бюхнера    ГОСТ 0147

Воронки делительные вместимостью 100 см³    ГОСТ 25336

Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм    ГОСТ 25336

Гомогенизатор    МРТУ 42-1505

Дефлегматор елочный    ГОСТ 9737

Колба Бунзена    ГОСТ 5614

Колбы плоскодонные вместимостью 250 см³    ГОСТ 9737

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25    и    100 см⁵ ГОСТ 9737

Колонка хроматографическая стеклянная, длиной    25 см    ГОСТ 9737

Мельница электрическая лабораторная    ТУ 46-22-236

Силикагель 60 (0.063-0,2 мм) для колоночной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности Стаканы химические вместимостью 100 и 500 см³ Стекловата

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1 М или    ТУ 25-11 -917

7

МУК 4.1.2332-08

ротационный вахуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария)

Установка для перегонки растворителей

Хроматографическая колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасфер 110-018 (5 мкм)

Шприц для ввода образцов в жидкостной хроматограф вместимостью 50-100 мм³ (Hamilton, США)

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20+5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8

МУК 4.1.2332-08

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак С8.

7./. Очистка органических растворителей

7. У. У. Очистка н-гексана Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения ее окрашивания в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.2. Очистка этилацетата Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

7.1.3. Очистка диэтилового эфира Растворитель предварительно встряхивают со свежеприготовленным раствором железного купороса, а затем последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

7.2. Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак С8 для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля 1 степени активности в 20 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 см³ смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) и 20 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек., после чего она готова к работе.

9

МУК 4.1.2332-08

Концентрирующий патрон Диапак С8 промывают последовательно с помощью медицинского шприца 7 см³ ацетонитрила и 7 см³ смеси ацетонитрил-вода (3:7, по объему) со скоростью 5 см³/мин.

7.3.    Проверка хроматографического поведения флудиоксонила на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ градуировочного раствора № 1 флудиоксонила с концентрацией 10 мкг/см³ в ацетонитриле (п. 7.6.2) и отдувают растворитель током азота. Остаток растворяют в 0,6 см³ этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,4 см³ гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п.7.2. Промывают колонку 100 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек. Фрак-ционно (по 10 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 см³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 1 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 7.4., перемешивают и анализируют на содержание флудиоксонила по п. 9.5.

Фракции, содержащие флудиоксонил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 20 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 7.4) и вновь анализируют по п. 9.5. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

ПРИМЕЧАНИЕ: Профиль вымывания флудиоксонила с колонки может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

7.4.    Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³помещают 500 см³ ацетонитрила, 500 см³ бидистллированной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.5. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.4.) при скорости подачи растворителя 1 см³/мин не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.

1

2