МУК 4.1.2277-07
Определение остаточных количеств Хлороталонила в виноградном и яблочном соках методом газожидкостной хроматографии

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Хлороталонила в виноградном и яблочном соках методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2277—07

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Хлороталонила в виноградном и яблочном соках методом газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2277-07

МУК 4.1. 2277-01

Ацетон выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С. Хлороталонил в концентраторе растворяют в 5 мл гексана, тщательно обмывают концентратор, наносят раствор на патрон и пропускают через него со скоростью, указанной в разделе 7.1.1. Смыв отбрасывают.

Промывают патрон 10 мл гексана, смыв отбрасывают. После этого последовательно пропускают через патрон 3 порции смеси гексан :ацетон (10:1) по 5 мл каждая, собирая каждую порцию в отдельный концентратор. Собранные фракции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Фракции, содержащие Хлороталонил, объединяют, выпаривают досуха при температуре не выше 30°С. Сухой остаток вновь растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смыва с колонки и необходимый для очистки объем элюа-та.

7.2. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии

Капиллярную колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия при температуре на 20°С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8-10 часов.

7.3. Приготовление рабочих растворов

7.3.1. Приготовление насыщенного водного раствора хлористого натрия

В коническую колбу объемом 250 см³ наливают 150 мл дистиллированной воды и насыпают в нее хлористый натрий при постоянном помешивании до тех пор, пока не образуется стойкий осадок. Колбу выдерживают в течение 30 мин., периодически помешивая раствор. Если осадок растворился, добавляют еще хлористого натрия до образования стойкого осадка.

МУК 4.1.2277-07

7.3.2. Приготовление стандартных растворов

Навеску 50 мг Хлороталонила (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 50 см³, растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор №1, концентрация 1 мг/см³). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток. Методом последовательного разбавления готовят стандартный раствор в ацетоне №2 с концентрацией 0,5 мкг/мл, который можно хранить в холодильнике в течение 30 дней.

Методом последовательного разбавления ацетоном исходного раствора № 2 готовят рабочие растворы Хлороталонила с концентрацией 0,005; 0,01; 0,05; 0,1 мкг/см³ для построения калибровочного графика и для внесения в образцы, которые могут храниться в холодильнике не более 30 суток.

7.4. Построение градуировочного графика

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Хлороталонила в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,005; 0,01; 0,05; 0,1 мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования (п. 9.2). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации Хлороталонила в растворе в мкг/см³ (рисунок 1).

8. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,

МУК 4.1.2277-01

пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79 г., а также с ГОСТ 25892-83 - «Сок виноградный натуральный, ТУ» и ГОСТ 656-79 «Соки плодовые и ягодные натуральные. ТУ».

Пробы соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4°С не более 10 суток.

9. ВЫПОЛНЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

9.1. Виноградный и яблочный соки.

9.1.1. Экстракция Хлороталонила из анализируемой пробы

Пробу сока 10 г помещают в полипропиленовую банку с крышкой на 250 см³, добавляют 10 см³ насыщенного раствора хлористого натрия, 2 г кристаллического хлористого натрия и приливают 30 см³ ацетонитрила. Банку с содержимым встряхивают на встряхивателе в течение 15 мин. После встряхивания все содержимое банки переносят в делительную воронку емкостью 250 см³. После разделения фаз нижний слой сливают в стакан емкостью 100 см³, а ацетонитрил - в чистую колбу емкостью 250 см³.

Водно-солевую фазу из стакана возвращают в делительную воронку и повторяют переэкстракцию Хлороталонила в ацетонитрил еще 2 раза, используя каждый раз по 20 см³ ацетонитрила и встряхивая смесь в течение двух минут. Водную фракцию отбрасывают. Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в делительную воронку, оставляют стоять 15 мин. Отделившийся водный слой отбрасывают.

Экстракт в воронке промывают двумя порциями гексана по 15 см³ каждая, гексан отбрасывают. Оставшийся ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор и выпаривают его на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре 40°С.

К водному остатку в концентраторе прибавляют 25 см³ воды, перемешивают содержимое концентратора и переносят в делительную воронку емкостью 250 см³. Обмывают концентратор еще

МУК 4.1.2277-07

двумя порциями воды по 25 см³ каждая и сливают в ту же делительную воронку. Приливают в делительную воронку 40 см³ гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 1-2 минут. После расслоения фаз нижний водный слой сливают в стакан объемом 150 см³, а гексан - через воронку с безводным сульфатом натрия в концентратор емкостью 250 см³. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 40 см³ гексана. Объединенный гексановый экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С.

Далее проводят очистку пробы на колонке с Флоризилом.

9.1.2.0чистка экстракта на патроне Диапак С

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 10 см³ гексана, отбирают пипеткой аликвоту объемом 5 см³ и наносят на патрон, подготовленный как указано в п. 7.1.1.

Промывают патрон 10 см³ гексана, смыв отбрасывают. Пропускают через патрон 15 см³, собирают смыв в концентратор и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С досуха.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 см³ ацетона и вводят в хроматограф 1 мм³ пробы.

9.2. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану 4х Ю'^м г/см³ и приспособлениями для капиллярной колонки.

Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая НР-5 длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма J&W Scientific.

Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 120° С, выдержка 4 минуты, нагрев колонки по 10° С в минуту до 170° С, затем по 25° С в минуту до 210° С; время анализа -11 мин.

Температура испарителя - 250° С, детектора - 340° С.

13

МУК 4.1.2277-01

Газ 1 - гелий (газ-носитель), давление на входе - 6 кПа, линейная скорость - 22,984 см/сек, давление на выходе - 101,3 кПа; поток через колонку - 2,504 см³/мин; мертвое время - 0,73 мин.

Газ 2 - гелий, режим - Splitless, деление потока - 1:40 (сброс пробы), начало сброса - 30 секунд, длительность сброса - 2 минуты, расход во время анализа - 10 см³/мин;

Регулятор давления гелия - РРГ-10;

Регулятор расхода гелия - РРГ-11;

Газ 3 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа -45 см³/мин.

Продувка детектора и испарителя азотом после анализа - по 50 см³/мин в течение 3 минут при температуре колонки 250° С. Расход газов: Г1 -50; Г2 -40; Г4-40 см³/мин.

Абсолютное время удерживания Хлоротапонила - 10 мин 05 сек.

Минимально детектируемое количество Хлороталонила в анализируемом объеме - 0,005 нг

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,005 -0,1 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией Хлороталонила 0,1 мкг/см³ соответственно, разбавляют.

10. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

Для определения содержания Хлороталонила в пробах методом ГЖХ используют следующую формулу:

Snp-A-V

X--х    Р

100-Serin

где X - содержание Хлороталонила в пробе, мг/кг;

Sct - площадь пика стандарта, мВ;

Snp - площадь пика образца, мВ;

МУК 4.1.2277-07

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

D - коэффициент пересчета на аликвоту, равный 2-м;

ш - масса анализируемого образца, г;

Р - содержание Хлороталонила в аналитическом стандарте, %.

11. ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПАРАЛЛЕЛЬНЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2'|Xi -XjIlOO

<х,+х₂)    <<■    ₍₁₎

где Х|, Х₂- результаты параллельных определений, мг/кг; г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г = 2.8 <у_г.

При невыполнении условия (I) выясняют причины превышения предел повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

11 ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

результат анализа представляют в виде:

(Х± Д) мг/кг при вероятности Р= 0.95,

где X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Д = б*Х/100,

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1),%.

15

ББК 51.21 0-60

0-60 Определение остаточных количеств Хлороталонила в виноградном и яблочном соках методом газожидкостной хроматографии. Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.- 18 с.

1.    Разработаны: Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К. А. Тимирязева. Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В. А. Калинин - профессор; Т. С. Калинина - ст. науч. сотрудник; А. В. Калинин - мл. науч. сотрудник).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по защите прав потребителей и благополучия человека (протокол № 2 от 2! июня 2007 г.).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 сентября 2007 г.

4.    Введены в действие с 10 декабря 2007 г.

5.    Введены впервые в качестве дополнения.

ББК 51.21

Формат 60x88/16    Печ.    л.    1,25.

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18/20.

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а.

Отделение реализации, тел./факс 952-50-89

С Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

МУК 4.1.2277-07

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

24 сентября 2007 г.

Дата введения: 10 декабря 2007 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХЛОРОТАЛОНИЛА В ВИНОГРАДНОМ И ЯБЛОЧНОМ СОКАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Методические указания МУК 4.1. 2277-07

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в виноградном и яблочном соках массовой концентрации Хлороталонила в диапазоне 0,005 - 0,1 мг/кг.

Название действующего вещества по ИСО: Хлороталонил

Название действующего вещества по ИЮПАК: Тетрахлори-зофта-лонитрил.

Структурная формула:

3

МУК 4.1.2277-01

Эмпирическая формула: CgCUty.

Молекулярная масса: 265,9.

Химически чистый Хлороталонил представляет собой белый кристаллический порошок без запаха.

Давление паров: 0,076 мПа при 25° С.

Температура плавления: 252,1°С.

Коэффициент перераспределения н-октанол/ вода: Ko_W IogP =

2,89.

Растворимость: ксилол - 80; циклогексан, диметил формам ид - 30; ацетон - 20; керосин <10 г/кг; вода - 0,81 мг/л (при 25°С).

Хлороталонил является термически и химически стойким соединением, стабилен в кислых и слабо щелочных растворах; слабо гидролизуется при pH > 9. При попадании в почву он сорбируется органическим веществом и слабо передвигается по профилю. Под влиянием микроорганизмов Хлороталонил относительно быстро разрушается с ДТ₅₀ - 5 - 36 дней.

Краткая токсикологическая характеристика: Хлороталонил относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД₅₀ для крыс составляет более 10000 мг/кг) и дермальной (ЛД50 для кроликов составляет более 10000 мг/кг) токсичности и опасным по ингаляционной токсичности (CKjo 4 час. для крыс 0,1 - 0,6 мг/л). При хроническом воздействии может вызывать опухоли почек и желудочно-кишечного тракта.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД (мг/кг/сут.) массы тела человека - 0,001.

МДУ (мг/кг) в яблоках, винограде - 0,01.

Область применения. Хлороталонил - контактный фунгицид защитного действия, препятствует прорастанию спор и конидий, не специфично связывая тиольные группы аминокислот, протеинов и пептидов, нарушая функции гликолитических и дыхательных ферментов клеток. Он высоко эффективен против септориоза и ржавчины на яровой и озимой пшенице; против пероноспороза на огурцах открытого грунта, семенниках лука, на хмеле; для борьбы с фитофторозом на картофеле и томатах, а также против различных видов грибковых заболеваний в посевах сахарной свеклы, на план-

4

МУК 4.1.2277-07

тациях цитрусовых культур, винограда и яблок при нормах расхода 1,0 - 2,5 кг д.в./га.

В России применяется в качестве фунгицида на озимой и яровой пшенице, картофеле, огурцах открытого грунта, семенниках лука, семенных посевах томатов и на плантациях хмеля.

Определение остаточных количеств Хлороталонила в виноградном и яблочном соках методом газожидкостной хроматографии.

1. Метрологическая характеристика метода.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в Таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1. Метрологические параметры

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности) ±5, % Р=0,95 Стандартное отклонение повторяемо сти, ог,% Предел повто ряемо сти, г,% Предел воспроизводимости, R, % Виноградный и яблочный соки 0,01-0,1 50 4.3 12 14 0,005 -0,01 100 6.2 17,5 22

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п « 20) приведены в Таблице 2.

5

МУК 4.1.2277-01

Таблица 2. Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата.

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р ■ 0,95, п - 20 Предел обнаруже ния, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение опреде ления, % Стандартное отклонение S, % Доверительный интервал среднего результата, . ±,% 1 2 3 4 5 6 Виноградный и яблочный СОКИ 0,005 0,005-0,1 86,4 2.6 1.1

2. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ

Метод основан на определении Хлороталонила методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов (ДПР, ДЭЗ) после его экстракции из соков органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением действующего вещества между несмешивающимися фазами и дополнительной очистки на патроне Диапак С.

Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и условий программирования.

3. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, И МАТЕРИАЛЫ.

3.1. Средства измерений.

Весы аналитические Ъ 11140, фирма «OHAUS».

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности + 0,038 г V600, «ACCULAB».

Колбы мерные вместимостью 10, 50 и 100 см³, ГОСТ 1770-74;

6

МУК 4.1.2277-07

Микрошприц Гамильтон, вместимостью 10 мм³;

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см³, ГОСТ 20292-

74.

Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Ливдану 4х Ю'¹⁴ г/см³ и приспособлениями для капиллярной колонки. Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100 и 250 см³, ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Аналитический стандарт Хлороталонила с содержанием д.в. 98,0% (фирма Сингента);

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-06-1092-83;

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72;

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78;

Гелий, очищенный марки “А”, ТУ-51-940-80.

Концентрирующие патроны Диапак С (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94, БиоХимМак.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76.

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Натрия хлорид, насыщенный водный раствор.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания проб ТУР LT1 фирмы «SKLO UNION».

Банки с крышками для экстракции на 250 см³, полипропилен, кат.№3120-0250, NALGENE.

7

МУК 4.1.2277-01

Воронки химические для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75;

Воронки делительные на 250 см³, ГОСТ 10054-75;

Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480;

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 см³, НШ 29 КГУ -100 (250) ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая НР-5 длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма J&W Scientific.

Насос вакуумный диафрагменный FT. 19 фирмы KNF Neu Laboport.

Фильтры бумажные "красная лента", ТУ 6-09-2678-77.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

8

МУК 4.1.2277-07

5. ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К подготовке проб допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

При выполнении измерений соблюдают следующие условия: процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%;

выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибо-РУ-

7. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ 7.1.Подготовка патронов для очистки экстрактов

7.1.1. Подготовка концентрирующего патрона С (ДИАПАК). Все растворы пропускают через патрон под вакуумом, скорость потока растворов не более 2 мл/мин (или 1 капля в 2 секунды). Патрон устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл, который используют как емкость для элюентов.

Патрон кондиционируют, пропуская через него последовательно 10 мл ацетона и 10 мл гексана. Смывы отбрасывают.

Нельзя допускать осушения поверхности патрона!

7.1.2. Проверка хроматографического поведения Хлороталонила на патроне Диапак С В концентратор объемом 100 мл помещают 1 мл стандартного раствора Хлороталонила в ацетоне с концентрацией 0,1 мкг/мл.

9