Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование __Российской    Федерации_

4.L МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) в зеленом луке и луке-репке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2269—07

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4Л. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) в зеленом луке и луке-репке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4Л.2269-07

МУК 4.1.2269-07

Стаканы стеклянные объемом 100-500 см³, ГОСТ 25366-80Е. Установка доя перегонки растворителей, ГОСТ 9737-70. Фильтры бумажные, “красная лента”, ТУ-6-09-1678-86. Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с размером пор 20 мкм, фирма Уотерс

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с элекртроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф,

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по гост 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

МУК 4.1.2269-07

6. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

-выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ОПРЕДЕЛЕНИЙ

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин и Диапак С 8 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, построение калибровочной кривой.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия

( А.Гордон, Р.Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с.438-439)

7.1.2. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил перегоняют.

7.1.3. Очистка гексана

Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают

11

МУК 4.1.2269-07

водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А.Гордон, Р.Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с.441).

7.7.4. Очистка бидистиллированной воды

Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/дм³, и затем перегоняют.

7.7.5. Очистка этилового эфира уксусной кислоты

Этиловый эфир уксусной кислоты промывают равным объемом 5% раствора соды, сушат над безводным хлористым кальцием (Беккер Г.и др. Органикум, Москва 1979 г., с.372), кипятят в течение 1 часа с прокаленным сульфатом магния и затем перегоняют.

7.2.Приготовление растворов для проведения анализа 7.2.7. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

Для приготовления подвижной фазы используют свежепере-гнанные ацетонитрил и очищенную воду.

В плоскодонную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ ацетонитрила и 500 см³ очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см³/мин в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.7.Стандартныйраствор с концентрацией Азоксистробина (ICIA 5504) 1,0 мг/см³

Взвешивают 50 мг Азоксистробина в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный раствор № 1, концентрация Азоксистробина - 1 мг/см³). Стандартный раствор № 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

МУК 4.1.2269-07

7.2.2.2.    Стандартный раствор с концентрацией геометрического

изомера (R 230310) 1,0 мг/см³

Взвешивают 50 мг геометрического изомера Азоксистробина R 230310 в мерной колбе объемом 50 см³, растворяют в ацетонитриле, доводят до метки ацетонитрилом (стандартный раствор № 2, концентрация геометрического изомера Азоксистробина R 230310 - 1 мг/см³). Стандартный раствор № 2 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.3.    Стандартный раствор с концентрацией Азоксистробина (1С1А 5504) и геометрического изомера (R 230310) 10,0 мкг/см³

(каждого)

В мерную колбу объемом 100 см³ помещают по 1 см³ стандартных растворов №1 и 2, доводят до метки ацетонитрилом, в результате чего получают объединенный стандартный раствор № 3 с концентрацией Азоксистробина и геометрического изомера Азоксистробина R 230310 - 10 мкг/см³ (каждого).

7.2.2.4. Стандартные растворы Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ для построения калибровочной кривой и внесения в растительные образцы

Из объединенного стандартного раствора № 3 методом последовательного разведения готовят объединенные стандартные растворы Азоксистробина и геометрического изомера Азоксистробина R 230310 в ацетонитриле с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2; 0,1; 0,05 мкг/см³ и используют эти растворы для хроматографического исследования, построения калибровочной кривой и внесения в контрольные образцы.

13

МУК 4.1.2269-07

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Азоксистробина и его геометрического изомера (R 230310) в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ каждого вещества (п. 7.2.2A)

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят графики зависимости площади пика от концентрации Азоксистробина и его геометрического изомера (R 230310). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений (рисунок 1 и 2).

7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин и Диапак С8 для очистки экстрактов

7АЛ. Подготовка концентрирующего патрона Диапак Амин для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин.

Патрон Диапак Амин устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 см³ смеси гексан- этилацетат в соотношении 9:1. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

14

МУК 4.1.2269-07

7.4,1.1. Проверка хроматографического поведения Азоксистробина (1CJA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) на концентрирующем патроне Диапак Амин

Из стандартного раствора Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см³, (по п. 7.2.2.4.) отбирают 1 см³, переносят в круглодон-иую колбу объемом 100 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30° С. Сухой остаток растворяют в 5 см³ смеси гексан - этилацетат в соотношении 9:1, помещают на 10 секунд в ультразвуковую ванну, тщательно обмывая стенки концентратора, и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

Исходный концентратор обмывают последовательно тремя порциями по 5 см³ смеси гексан - этилацетат 1:3 и смесь вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции собирают в отдельные концентраторы, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Азоксистробин (ICIA 5504) и его геометрический изомер (R 230310), объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания веществ из патрона.

7.4.L2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин

Сухой остаток растворяют в 5 см³ смеси гексан - этилацетат в соотношении 9:1, помещают на 10 секунд в ультразвуковую ванну, тщательно обмывая стенки концентратора, и полученный раствор вносят на патрон,

7,4*2. Подготовка концентрирующего патрона Диапак С8 для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать

15

МУК 4.1.2269-07

5 см³/мин. При работе на патронах Диапак С8 используют очищенную воду.

Патрон Диапак С8 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 и 10 см³ воды. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!

7.4.2.1. Проверка хроматографического поведения Лзоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) на концентрирующем патроне Диапак С8

Из стандартного раствора Азоксистробина (IC1A 5504) и его геометрического изомера (R 230310) в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/ см³, (по п. 7.2.2A) отбирают 1 см³, помещают в круглодонную колбу объемом 100 см³ и добавляют туда 9 см³ воды. Смесь перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

Исходный концентратор обмывают 10 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:5 и смесь вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют. Концентратор еще раз обмывают последовательно тремя порциями по 5 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 и каждую порцию отдельно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Азоксистробин (ICIA 5504) и его геометрический изомер (R 230310), объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания вещества из патрона.

МУК 4Л .2269-07

7.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP8 с предко-лонкой Symmetry С18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25°С и скорости потока подвижной фазы 1 см³/мин 3-4 часа.

8. ОТБОР ПРОБ И ХРАНЕНИЕ

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (№ 2051-79 от 21.08.79), в также с ГОСТ 27166-86 «Лук репчатый свежий реализуемый. ТУ» и ГОСТ 1723-86 «Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговле. ТУ».

Зеленый лук и не созревшие луковицы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С до 2-х лет. Пробы созревшего лука-репки подсушивают и хранят при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света не более 6 месяцев. Для длительного хранения созревшие луковицы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С до 2-х лет.

9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЙ 9Л. Зеленый лук и лук-репка

9.1. ЬЭкстракци

Образец измельченной пробы лука массой 10 г переносят в коническую колбу объемом 250 см³, приливают 50 см³ смеси аце-тонитрил-вода в соотношении 7:3 и помещают на 10 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 10 минут на механический встряхива-тель. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ с 5 г су-

17

МУК 4.1.2269-07

хого хлорида натрия. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 50 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 7:3. Экстракты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 минут. Затем содержимое колбы (без не растворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 см³ и выдерживают 5 минут Выделившуюся нижнюю водную фазу сливают в стакан и отбрасывают, а верхнюю ацетонитрильную возвращают в делительную воронку.

9.7,2, Очистка экстракта перераспределением в системе несмвшивающихся растворителей

К ацетонитрильному экстракту в делительной вороне прибавляют 50 см³ гексана и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения слоев в делительной воронке выделившуюся воду (нижний слой объемом ~ 2 см³) сливают в стакан и отбрасывают Ацетонитрильный экстракт собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см³ и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не более 30° С Верхний Гексановый слой также отбрасывают.

К сухому остатку в концентраторе прибавляют 3 см³ этилаце-тата и обмывают стенки концентратора. Туда же прибавляют 50 см³ гексана и переносят содержимое колбы в сухую делительную воронку объемом 250 см³. Приливают в делительную воронку 20 см³ ацетонитрила и встряхивают воронку 2 минуты. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой сливают в коническую колбу объемом 250 см³. Повторяют операцию еще 2 раза, используя каждый раз по 20 см³ ацетонитрила и объединяя экстракт в колбе. Гексановую фракцию отбрасывают.

Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку, прибавляют туда 50 см³ гексана и встряхивают 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³ и

МУК 4.1.2269-07

выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не более 30° С Гексан отбрасывают.

9.13. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С8 и Диапак Амин

Сухой остаток, полученный по п.9.1.2. растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 9 см³ воды, тщательно обмывая стенки концентратора. Полученный раствор вносят на патрон Диапак С8. Элюат отбрасывают, (В том случае, если пробы интенсивно окрашены, используют 2 соединенных последовательно патрона Диапак С8).

Концентратор обмывают двумя порциями по 5 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:5 и смесь вносят на патрон. Элюат отбрасывают.

Тот же концентратор обмывают 10 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 и раствор вносят на патрон. Элюат собирают в чистый концентратор и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 см³ гексан - этилацетат в соотношении 9:1 и наносят на патрон Диапак Амин. Элюат отбрасывают.

Концентратор обмывают 10 см³ смеси гексан - этилацетат 1:3 и смесь вносят на патрон. Элюат собирают в чистый концентратор, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30° С. Сухой остаток растворяют в 5 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

9.2. Условия хроматографирования

Хроматограф “Waters” или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.

Колонка стальная Symmetry Shield RP8, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм.

Предколонка стальная Symmetry Cl8, 3,9 мм х 2 см, зернением 5 мкм

19

ББК 51.21 060

О 60 Определение остаточных количеств азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) в зелёном луке и луке-репке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания. -М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - 23 с,

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом -МСХА им. К. А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В,А. Калинин -профессор, канд. с-х. наук, Е.В. Довгилевич - ст.н.сотр., канд. биол. наук, А.В. Довгилевич - ст.н.сотр., канд. хим. наук, Н.В. Устименко - ст.н.сотр., канд. биол. наук).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитар но - гигиеническому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 2 от 21.06. 2007 г.).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 сентября 2007 г.

4.    Вводятся в действие с 10 декабря 2007 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

Формат 60x88/16    Печ.    л.    1,5.

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковсий пер., д. 18/20

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш„ 19а Отделение реализации, тел./факс 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

Температура колонки: 25°С

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода в соотношении 50:50 Длина волны 255 нм

Время удерживания Азоксистробина (ICIA 5504) - 12,98-13,65 мин; его геометрического изомера (R 230310) 10,27-10,69 мин. Чувствительность 0,003 ед. оптической плотности на шкалу. Объем вводимой пробы 20 мм³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2-20 нг

10. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3,05.01.

Альтернативная обработка результатов:

Содержание Азоксистробина (IOIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) рассчитывают по формуле:

Snp* А* V

Х=-хР

100* Sct* m

где X - содержание Азоксистробина (ICIA 5504) или его геометрического изомера (R 230310) в пробе, мг/кг или мг/дм³;

Sct - высота (площадь) пика стандарта, мм;

Snp - высота (площадь) пика образца, мм;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г;

Р - содержание Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) в аналитическом стандарте, %.

МУК 4.1.2269-07

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

24 сентября 2007 г.

Дата введения: 10. 12. 2007 г.

4.1. Определение остаточных количеств азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) в зеленом луке и луке-репке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R 230310) в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг в зеленом луке и луке-репке.

Название вещества по ИСО: Азоксистробин.

Название вещества по ИЮПАК: метил (Е)-2-{2-[6-(2-циано-фенокси)пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат.

Структурная формула:

<^/ОСНз

Эмпирическая формула: C22H17N33O5. Молекулярная масса: 403,4. Агрегатное состояние: порошок.

3

Цвет, запах: белого цвета, без запаха.

Температура плавления 166 °С.

Коэффициент распределения н-октанол - вода: Kow logP = 2,5 (20 °С)

Растворимость в воде (25°С): 6,2 (pH 5,2), 6,7 (pH 7,0), 5,9 (pH 9,2) мг/дм³

Растворимость в органических растворителях (г/дм³ при 20°С): ацетон - 86, ацетонитрил - 340, гексан - 0.057, дихлорметан - 400, метанол - 20, толуол - 55, этилацетат - 130, н-октанол - 1,40.

Азоксистробин стабилен в водных растворах при pH 3-10 при комнатной температуре. Период полураспада в почве в полевых условиях от 3-х до 39 дней. Основным путем превращения вещества на поверхности растений и почвы является фотолитическая изомеризация с образованием геометрического Z-изомера.

Краткая гигиеническая характеристика: Азоксистробин относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД₅₀ для крыс свыше 5000 мг/кг) и дермальной (ЛД50 свыше 2000 мг/кг) токсичности и умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс - 698-962 мг/м³). Не обладает побочными токсикологическими эффектами, может вызвать слабое раздражение при попадании на кожу и слизистую оболочку глаз.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0,03 мг/кг/сут;

МДУ (мг/кг) в винограде, огурцах и томатах - 0,2,

Область применения: Азоксистробин - фунгицид из группы стробилуринов системного и контактного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и настоящей мучнистой росы, в том числе против рас возбудителя, устойчивых к Металаксилу и производным триазола. Применяется в России в качестве фунгицида на плантациях лука-репки, томатах и огурцах открытого и защищенного грунта с нормой расхода 0,1-0,15 кг д.в./га, на зерновых культурах - 0,125 -0,250 кг д.в./га, а также на виноградниках - 0,15-0,20 кг д.в./га при 2-х кратной обработке.

R-230310 - Z-геометрический изомер Азоксистробина.

МУК 4.1,2269-07

Название действующего вещества по ИСО: метил (Z)-2-{2-[6-(2-цианофенокси)-пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат. Структурная формула:

о OCHj

R 230310 представляет собой кристаллический порошок желтого цвета.

Физико-химические свойства близки к таковым Азоксистробина.

Главный метаболит в процессе фотолиза основного вещества. Данные по токсикологии вещества фирмой не представлены.

1. МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в Таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Метрологические параметры для Азоксистробина

5

Метрологические параметры для геометрического изомера Азоксистробина (R 230310)

Таблица 2

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций» мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±5, % Р-0,95 Стандартное отклонение повторяемости, Or, % Предел повторяемости, г, % Предел воспроиз водимости, К,% Зеленый лук 0,01-0»! 50 4 lU 13,3 0,1-0»5 25 3 8,4 10,0 Лук-репка 0,01-0,1 50 4 11,2 13,3 0,1 -0,5 25 3 8,4 10,0

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в Таблицах 3 и 4.

Таблица 3

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для Азоксистробина

(ICIA 5504)

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, п - 20
	Предел обнару жения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций» мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, ±,%
Зеленый лук	0,05	0,05-0,5	82,1	3,1	1,5
Лук-репка	0,05	0,05-0,5	81,9	2,4	1,2

6

МУК 4.1.2269-07

Таблица 4

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для геометрического изомера Азоксистробнна (R 230310)

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S, % Довери тельный интервал среднего результата, ±,% Зеленый лук 0,05 0,05 - 0,5 81,9 з,з 1,4 Лук-репка 0,05 0,05 - 0,5 77,4 3,2 1,4

2. МЕТОД ИЗМЕРЕНИИ

Методика основана на одновременном определении Азокси-стробина и его геометрического изомера (R 230310) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после их экстракции из образцов смесью органического растворителя с водой, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак Амин и Диапак С8).

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности. Условия хроматографирования позволяют с высокой достоверностью детектировать и идентифицировать Азоксистробин и его изомер при совместном присутствии.

7

МУК 4.1.2269-07

3. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ

ЗЛ. Средства измерений

Весы аналитические «OHAUS», Е 11140.

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности + 0,038 г «ACCULAB» V600.

Колбы мерные на 25, 50 и 100 см³, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50-100 мм³ фирмы Гамильтон.

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см³, ГОСТ 20292-74.

Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа, номер госрегистрации 15311-02.

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 см³, ГОСТ 1770-74.

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Азоксистробин ICIA 5504, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,7 %, фирма Зенека.

R 230310, аналитический стандарт с содержанием д.в. 96,0 %, фирма Зенека.

Ацетон, осч. ТУ 2633-00-4-11291058-94

Ацетонитрил, осч., УФ-205 нм, ТУ 6-09-2167-84.

Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, х.ч. для спектроскопии, ТУ 6-09-06-657-84

Калий марганцовокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75.

Кальций хлористый, х.ч. ГОСТ 4161-76.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77.

8

МУК 4.1.2269-07

Концентрирующие патроны Диапак Амин (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94

Концентрирующие патроны Диапак С8 (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94

Этиловый эфир уксусной кислоты, ГОСТ 223000-76 Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диапак Амин и Диапак С8.

Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP 1ЛТ».

Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат.№3120-0250, NALGENE.

Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4.

Воронки химические для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 10054-75.

Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi или ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 с водяной баней;

Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 мл, КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, внутренним

диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP 8, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.

Колбы конические, плоскодонные объемом 250, 500 и 1000 см³, ГОСТ 9737-70

Концентраторы грушевидные и круглодонные, объемом 100 и 250 см³, ГОСТ 10394-75

Насос диафрагменный FT. 19 фирмы KNF Neu Laboport.

Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry С 18 ,

длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма Уотерс

9