Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств римсульфурона в кукурузном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2267—07

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств римсульфурона в кукурузном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2267-07

7. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ОПРЕДЕЛЕНИЙ

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диалак Амин для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, построение калибровочной кривой.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия (А.Гордон, Р.Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с.438-439)

7.1.2. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил перегоняют.

7.1.3. Очистка гексана

Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А.Гордон, Р.Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с.441).

7.1.4. Очистка бидистиллированной воды

Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.

МУК 4.1.2267-07

7. Л 5. Очистка этилового эфира уксусной кислоты

Этиловый эфир уксусной кислоты промывают равным объемом 5% раствора соды, сушат над безводным хлористым кальцием (Беккер г.и др. Органикум, Москва 1979 г., с.372), кипятят в течение 1 часа с прокаленным сульфатом магния и затем перегоняют.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2,1. Приготовление 0,1% раствора орто-фосфорной кислоты

В мерную колбу объемом I дм³ прибавляют 100 см³ очищенной воды, 1 см³ концентрированной орто-фосфорной кислоты, перемешивают, после чего доводят объем до метки очищенной водой.

7.2.2. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

В плоскодонную колбу объемом 1 дм³ помещают 400 см³ ацетонитрила и 600 см³ 0,1% раствора орто-фосфорной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см³/мин в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.

7.2.3.    Приготовление 0,1% раствора уксусной кислоты

в этила не та те

В мерную колбу объемом 100 см³ прибавляют 10 см³ этилаце-тата, 0,1 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают, после чего доводят объем до метки этилацетатом.

7.2.4.    Приготовление 2% раствора уксусной кислоты

в этилацетате

В мерную колбу объемом 100 см³ прибавляют 10 см³ этилаце-тата, 2,0 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают, после чего доводят объем до метки этилацетатом.

11

7.2.5. Приготовление градуированы их растворов

7.2.5.1. Стандартный раствор с концентрацией Римсульфурона

1,0 мг/см³

Взвешивают 50 мг Римсульфурона в мерной колбе объемом 50 см⁵. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.2.5.2. Стандартный раствор с концентрацией Римсульфурона

10,0 мкг/см³

Из стандартного раствора Римсульфурона с концентрацией

1,0 мг/см⁵ отбирают пипеткой 1 см⁵, помещают в мерную колбу объемом 100 см⁵ и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.

7.2.5.3. Стандартные растворы Римсульфурона с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ для построения калибровочной кривой

Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см⁵ и используют эти растворы для хроматографического исследования.

7.2.5.4. Стандартные растворы Римсульфурона с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ для внесения в образцы масла

Из стандартного растворов в ацетонитриле с концентрацией

1,0 мг/см⁵ Римсульфурона методом последовательного разведения ацетоном готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/см⁵, и используют эти растворы для внесения в образцы масла.

73. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Римсульфурона в раство-

МУК 4.1.2267-07

ре (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации Римсульфурона. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений (рисунок 1).

7.4. Подготовка концентрирующего патрона Днапак Амин для очистки экстрактов

7.4.1. Подготовка концентрирующего патрона Диапак Амин для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин.

Патрон Диапак Амин устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см³ этилацетата. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.4.1.1. Проверка хроматографического поведения Римсульфурона на концентрирующем патроне Диапак Амин

Из стандартного раствора Римсульфурона в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/ см³ отбирают 1 см³, помещают в круглодонную колбу объемом 100 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 5 см³ этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, и смыв вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

13

Затем в исходный концентратор добавляют 10 см³ 0,1% уксусной кислоты в этилацетате, обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

Исходный концентратор обмывают тремя порциями по 5 см³ 2% уксусной кислоты в этилацетате и последовательно вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции собирают в отдельные концентраторы, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Римсульфурон, объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания вещества из патрона.

7.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с пред-колонкой Symmetry Cl8 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25°С и скорости потока подвижной фазы 1 см³/мин 3-4 часа.

8. ОТБОР ПРОБ И ХРАНЕНИЕ

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 8808-91 «Масло кукурузное, ТУ»

Пробы масла кукурузы хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0- 4° С не более 30 дней.

Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб зерна методом экстракции горячим растворителем при температуре не выше 40° С.

МУК 4.1.2267-07

9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЙ

9.1. Кукурузное масло

Из пробы кукурузного масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную объемом 250 см³ тремя порциями гексана объемом по 30 см³. К масляно-гексановой смеси приливают порцию ацетонитрила, предварительно подогретого на водяной бане до 40°Q объемом по 30 см³, встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в концентраторе объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см. Повторяют экстракцию Римсульфурона еще два раза, используя каждый раз по 30 см³ ацетонитрила. Экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С Сухой остаток растворяют в 5 см³ этил ацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, и смыв вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Затем в исходный концентратор добавляют 10 см³ 0,1 % уксусной кислоты в этил ацетате, обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор еще раз обмывают 10 см³ 2% уксусной кислоты в этил ацетате и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

9.2. Условия хроматографирования

Хроматограф “Waters’* или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.

Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм.

Предколонка стальная Symmetry С18, 3,9 мм х 2 см, зернением 5 мкм

15

ББК 51.21 060

О 60 Определение остаточных количеств римсульфурона в кукурузном масле методом высокоэффектитвной жидкостной хроматографии. Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - 20 с.

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К. А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром “Агроэкология пестицидов и агрохимикатов” Минсельхоза России (ВЛ. Калинин -профессор, канд. с-х. наук., Е.В. Довгнлевич - ст.н.сотр., канд. биол. наук, А.В. Довгнлевич - ст.н.сотр., канд. хим. наук, Н.В. Устименко - ст.н.сотр., канд. биол. наук).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно - гигиеническому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 2 от 21 июня 2007 г.).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 сентября 2007 г.

4.    Вводятся в действие с ) 0 декабря 2007 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

Формат 60x88/16    Печ. л. 1,25.

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав погрсбителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадховсий пер., д. 18/20

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора N7105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, телефакс 952-50-89

О Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

МУК 4.1.2267-07

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

24 сентября 2007 г.

Дата введения: 10.12.2007 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств римсульфурона в кукурузном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2267-07

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Римсульфурона в диапазоне 0,01 -0,5 мг/кг в кукурузном масле.

Название действующего вещества по ИСО: Римсульфурон.

Название по ИЮПАК: 1-(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-3-(3-этилсульфонил-2-пиридилсульфонил)мочевина

Эмпирическая формула: C14H17N5O7S2.

Молекулярная масса: 431,4.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белого цвета, без запаха.

Давление насыщенного пара 1,5x10° П м³ моль'¹ (расчетное)

3

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 25° С: Ko_W logP = 0,288 (pH 5), -1,47 (pH 7) при 25°C.

Температура плавления: 88,1 °С.

Коэффициент распределения н-октанол-вода: 4,8 (pH 5); 4,65 (pH 7); 5,55 (pH 9).

рКа - 4,0 Растворимость в воде: 0,135 мг/дм³ (pH 5), 7,3 мг/дм³ (pH 7), 5,56 мг/дм³ (pH 9).

В воде гидролизуется: DT₅₀ 4,6 дня (pH 5), 7,2 дня (pH 7), 0,3 дня (pH 9).

Растворимость в органических растворителях (г/дм³ при 25°С): ацетон - 14,8, ацетонитрил - 17,2, этилацетат - 2,85, гексан < 0,01, метанол - 1,55, МДЧ-диметилформамид - 241, хлористый метилен - 35,5.

Римсульфурон быстро разлагается в почве. Подвергается главным образом химическому гидролизу и в очень малой мере микробиологической деградации. Скорость деградации зависит от pH, так как соединение стабильно в нейтральной среде и быстрее разлагается в щелочных и кислых почвах. DTjq в почве составляет 10-20 дней (в лабораторных условиях).

В растениях разлагается в течение нескольких часов: DT₅₀ в кукурузе - 6 часов.

Краткая токсикологическая характеристика: Римсульфурон относится к мало опасным соединениям по острой пероральной (ЛД50 для крыс составляет более 5000 мг/кг) и дермальной (ЛД 50 для кроликов более 2000 мг/кг) токсичности и умеренно опасным веществам по ингаляционной (ЛК50 для крыс (4 часа) более 5400 мг/м³) токсичности. Не вызывает покраснения кожи, слабо раздражает слизистую оболочку глаз.

ДСД - 0,02 мг/кг/сутки; МДУ в зерне кукурузы 0,01 мг/кг, в кукурузном масле не установлен.

Область применения препарата:

Римсульфурон - гербицид системного действия, проникающий через корни и листья растений и ингибирующий биосинтез изолейцина и валина. Рекомендуется как послсвсходовый гербицид

4

МУК 4.1.2267-07

для контроля однолетних и многолетних трав и некоторых широколистных сорняков на посевах кукурузы. Также используется на посадках картофеля и томатов. Хорошо подавляет развитие чувствительных к нему сорняков при норме расхода 15 г д.в./га.

Римсульфурон в России применяется в качестве гербицида в посевах кукурузы и картофеля с нормой расхода до 15 г д.в./га. Он также входит в состав смесевых препаратов и комбинации с другими гербицидами.

1. МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в Таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в Таблице 2

Метрологические параметры для Римсульфурона

Таблица 1.

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±5, % Р=Ю,95 Стандартное отклонение повторяемости, с„% Предел повторяемости, г, % Предел воспроизводимости, R, % Кукурузное масло 0,01-0,10 50 5,0 14,0 17,0 0,1-0,5 25 4,0 11,0 12,0

5

МУК 4.1.2267-07

Таблица 2. Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для Рымсульфурона

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р ■ 0,95, п - 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S, % Доверительный интервал среднего результата,*, % Кукурузное масло 0,01 0,01-0,5 80 2,5 2,42

2. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ

Метод основан на определении Римсульфурона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после очистки перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак Амин).

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ

3.1. Средства измерений

Весы аналитические «OHAUS», £ 11140.

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г «ACCULAB» V600.

Колбы мерные на 25, 50 и 100 см³, ГОСТ 1770-74. Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50-100 мм³. Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см³, ГОСТ 20292-74.

6

МУК 4.1.2267-07

Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа, номер госрегистрации 15311-02.

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 см³, ГОСТ 1770-74.

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Римсульфурон, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,6% (фирма Дюпон де Немур Интернешнл, С.А)

Ацетон, осч. ТУ 2633-00-4-11291058-94

Ацетонитрил осч., УФ-200 нм, ТУ 6-09-2167-84.

Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, х.ч. д/спектроскопни, ТУ 6-09-06-657-84

Калий марганцовокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75.

Кальций хлористый, х.ч. ГОСТ 4161-76.

Кислота орто-фосфорная , 85%, Fluka, каталожный номер 79621

Кислота уксусная, ледяная, ГОСТ 61-75

Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77.

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а.., ГОСТ 223000-76.

Концентрирующие патроны Диапак Амин (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

33. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диапак Амин

7

Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1».

Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат.№3120-0250, NALGENE.

Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4.

Воронки химические для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные на 250 см³, ГОСТ 10054-75.

Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi или ИР-1М,

ТУ 25-11-917-74 с водяной баней;

Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 см³, КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.

Колбы конические, плоскодонные объемом 250, 500 и 1000 см³, ГОСТ 9737-70

Концентраторы грушевидные и круглодонные, объемом 100 и 250 см³, ГОСТ 10394-75

Насос диафрагменный FT. 19 фирмы KNF Neu Laboport.

Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry С 18, длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма Уотерс

Стаканы стеклянные объемом 100-500 см³, ГОСТ 25366-80Е.

Установка для перегонки растворителей

Фильтры бумажные, “красная лента’*, ТУ-6-09-1678-86.

Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма Уотерс

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

4.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реакти-

8

МУК 4.1.2267-07

вами по ГОСТ 12.1.007, требования элеюробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9