4.1, МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.2162—4.1.2176—07

Издание официальное

Концентрирующий патрон Диапшс С8 промывают последовательно с помощью медицинского шприца 7 см³ ацетонитрила и 7 см³ смеси ацетонитрил-вода (2:8) со

скоростью 5 см³/мин.

7,4, Проверка хроматографического поведения ипродиона на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ градуировочного раствора № 1 ипродиона с концентрацией 10 мкг/см³ в ацетонитриле (п. 7.6.2), раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 см³ смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п.7.3. Промывают колонку 50 см³ смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек., злюат отбрасывают. Затем колонку промывают 50 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему). Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1,0 см³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на I мин., вносят 1,5 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 7.5., перемешивают и анализируют на содержание ипродиона по п.9.5.

7.5. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³помещают 650 см³ ацетонитрила, 350 см³ 0,005 М раствора орто-фосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.6,    Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.5.) при скорости подачи растворителя 1 см³/мин не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.

7.7.    Приготовление градуировочных растворов

7.7. 1. Исходный раствор ипродиона для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,010 г ипродиона, растворяют в 40-50 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение 3-х месяцев.

7.7.2. Раствор ипродиона Ml для градуировки (концентрация 10 мкг/см³).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора ипродиона с концентрацией 100 мкг/см³ (п.7.7.1.), разбавляют до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов №Ка 2-5, а также для приготовления проб огурцов и томатов с внесением при оценке полноты извлечения ипродиона из исследуемых образцов.

Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение месяца.

7.7.3. Рабочие растворы №№ 2-5 ипродиона для градуировки (концентрация 0,05-0,5 мкг/см³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0.5, 1,0, 2.5 и 5.0 см³ градуировочного раствора Ка 1 ипродиона с концентрацией 10 мкг/см³ (п.7.7.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.5., тщательно перемешивают, получают рабочие растворы К°№ 2*5 с концентрацией ипродиона 0.05, 0.1,0.25 и 0.5 мкг/см³, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7,8, Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость высоты пика (мм) от концентрации ипродиона в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора (п.7,7.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений

8. Отбор и хранение проб Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (Кг 2051-79 от 21.08.79 г.) и правилами, определенными ГОСТами 1725-85 «Томаты свежие» и 1726-85 «Огурцы свежие. Технические условия».

Пробы огурцов и томатов хранят в стеклянной посуде в холодильнике при температуре 4°С не более 2-х дней; при длительном хранении пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С. Перед анализом плоды измельчают.

9. Выполнение определения

9.L Экстракция ипродиона

9.1.1. Плоды. Навеску (25 г) измельченного растительного материала помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см¹, приливают 100 см¹ 50%-ного водного ацетона и гомогенизируют 5 минут при 8000 об/мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 50 см³ 50%-ного водного ацетона. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/5 его часть (эквивалентна 5 г образца) переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 9.2.

9.2, Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся

растворителей

Экстракт плодов, полученный по п. 9.1. и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (10-12 см³) при температуре 40°С. К водному остатку приливают 15 см³ насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 30 см³ гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в крупюдонную колбу вместимостью 100 см³. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 см³ гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой безводного сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30°С и подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диалах С8 по пп. 9.3. и 9.4.

9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем Остаток в круглодонной колбе, полученный по пп. 9.2., растворяют в 3,0 см³ смеси гексан-зтилацетат (9:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.3. Колбу обмывают 5 см³ смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку промывают 45 см³ смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек., элюат отбрасывают. Ипродион элюируют с колонки 45 см³ смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), отбрасывая первые 20 см³ элюата и собирая последующие 25 см³ элюата непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С и остаток

П

подвергают дополнительной очистке на концентрирующем патроне Диапак С8 по п.

9.4.

9.4. Очистка на концентрирующем патроне Диапак С8 Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п.9.3., растворяют в 0,6 см³ ацетонитрила, помещал в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,4 см³ деионизованной воды, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон Диапак С8, подготовленный по п.7.3., со скоростью 1.2 капли в секунду. Колбу обмывают 2 см³ ацетонитрил-вода (2:8, по объему), которые также вносят на патрон. После нанесения пробы патрон промывают 2 см³ смеси ацетонитрил-вода (5:5, по объему), элюат отбрасывают. Ипродион элюируют с патрона 4 см³ смеси ацетонитрил-0,005 М орто-фосфорная кислота (65:35, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 50 см³, Раствор упаривают досуха при температуре 40°С. Остаток в колбе растворяют в ! см³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, вносят 1 см³ подвижной фазы, подготовленной по п.7.5,, перемешивают и анализируют на содержание ипродиона по п. 9.5.

9.5. Условия хроматографирования Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирма Кпаиег, Германия)

Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая в качестве неподвижной фазы Диасфер 110-С18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил-0,005 М орто-фосфорная кислота (65:35, по объему)

Скорость потока злюента; 0,8 см³/мин

Рабочая длина волны: 225 нм

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 мм³

Время удерживания ипродиона: около 6 минут

Линейный диапазон детектирования 1 - Юнг

Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С8 Т (6 мкм)

Время удерживания ипродиона: около 5 мин 40 сек.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

10. Обработка результатов анализа

Содержание ипродиона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Hi хАхV

X =-------------,    где

Но хш

X - содержание ипродиона в пробе, мг/кг;

Hi - высота пика образца, мм;

Но - высота пика стандарта, мм;

А - концентрация стандартного раствора ипродиона, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; ш - масса анализируемой части образца, г (для плодов - 5 г).

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух

параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2-|ЛГ,-ЛГ_а|-100

(*,+*,)

где Хь Xj- результаты параллельных определений, мг/кг;

г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г - 2.8ст_г.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(✓ST±A) мг/кг при вероятности Р== 0.95,

где X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

А- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

А =5 *Х/ 100,

5- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица I), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» менее 0.02 мг/кг* для плодов огурца и томата * 0.02 мг/кг - предел обнаружения для плодов огурца и томата

11. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 « Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13 Л.Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

С * = А ,    +    A    j.7⁷ »

где ± А_л-\±&_яу,) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность)

результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Д_л = ± 0,84 А, где А- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Л = 5+Х/100,

5- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Результат контроля процедуры К* рассчитьхвают по формуле:

К*=Л^г'-А^г-С_д,

где Х\ X, С_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п.11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле

К-у1ь\.Т1+ ^Д , -

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

i К_к U К. (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)

2.|ЛГ,-^,|-100 (*, +Х_г)

где Хь Хг - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

14. Разработчики

Талалакина Т.Н., науч. сотр; Макеев А.М., зав. лаб,, канд. биол.наук.

ВНИИ фитопатологии, 143050 Московская обл._>в/б]5ольшие Вяземы, тел. 592-92-20

Подпись руки Талалакиной Т.Н., М

Содержание

1.    Определение остаточных количеств 2,4-Д в масле кукурузы методом капиллярной

газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2162-07..................................................4

2.    Определение остаточных количеств галоксифопа-р-метила и галоксифопа-р в воде,

галоксифопа-р в почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, корнеплодах сахарной, кормовой и столовой свеклы, семенах и масле льна, рапса, сои, подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2163-07.................17

3.    Определение остаточных количеств дифеноконазола в картофеле, моркови и томатах

методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2164-07....................42

4.    Определение остаточных количеств зета-циперметрина в семенах рапса, масле рапса (горчицы) методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2165-07............................................................................................56

5.    Определение остаточных количеств ипродиона в огурцах и томатах методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2166-07...........................69

6.    Определение остаточных количеств каптана и фолпета в воде, почве, каптана в

яблоках, фолпета в клубнях картофеля и винограде методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2167-07.......................................................................83

7.    Определение остаточных количеств клопиралида в капусте, семенах и масле

рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2168-07...... 99

8.    Определение остаточных количеств метамитрона в ботве и корнеплодах столовой

и кормовой свеклы методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2169-07...........113

9.    Определение остаточных количеств прометрина в семенах кориандра методом

газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2170-07....... 125

10.    Определение остаточных количеств римсульфурона в клубнях картофеля

методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2171-07..............138

11.    Определение остаточных количеств тау-флувалината в зерне и соломе зерновых культур, в ягодах и соке винограда, зеленой массе пастбищных трав, семенах и масле рапса, сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2172-07...........................................................................................147

12.    Определение остаточных количеств тиаметоксама в луке, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2173-07...........................................................................................163

13.    Определение остаточных количеств фамоксадона в плодах томатов, ягодах

винограда, зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.    МУК 4.1.2174-07..........................178

14.    Определение остаточных количеств цимоксанила в томатах, винограде,

зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2175-07.....................................................................198

15.    Измерение концентраций 2,4 D этилгексилозого эфира в атмосферном воздухе

населенных мест методом газожидкостной хроматографии.    МУК 4.1.2176-07.............212

3

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств ипродиона в огурцах и томатах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания

МУК 4.1.2ЛМ17

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации ипродиона в огурцах и томатах в диапазоне 0,02-0,2 мг/кг.

Ипроднон -действующее вещество фунгицида Ровраль, СП (500 г/кг), фирма производитель Байер Кроп Сайенс (Германия).

3-(3,5-дихлорфенил)-Н-изопропил-2,4-диоксоимидазолидин-1-карбоксамид (ИЮПАК) 3-(3,5-дихлорфенил)-Н-(1-метилэтил)-2,4-диоксо-1-имидазолидинкарбоксамид (С.А.)

о

С,₃Н,₃СЫ4зОз

Мол. масса: 330,2

Белый кристаллический порошок без запаха. Температура плавления: 134,0°С. Давление паров при 25°С: 5,0 х ЮЛШа. Коэффициент распределения н-октаиол/вода: Kow log Р “ 3,0 (pH 3 и 5). Растворимость (г/л) при 20°С: ацетонитрил - 168, ацетон -342, дихлорметан - 450, этилацетат * 225, толуол -150, гексан - 0,59, вода-0,013.

0

Вещество относительно стабильно в кислой среде, но гидролизуется в водных растворах при pH 7 {DT50 “ I -7 дней) и значительно быстрее при pH 9 (DT50 < I часа).

В водных растворах ипродион разрушается под действием УФ-света, но относительно стабилен на солнечном свету.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс и мышей - >2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - >2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC$o) для крыс - >5,16 мг/дм³ воздуха. Ипродион не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика. LC50 для рыб -3,7 мг/л (96 час.).

Инсектицид нетоксичен для птиц, пчел, дафний, земляных червей, почвенных микроорганизмов.

Гигаенические нормативы для ипродиона в России: ОДК в почве - 0,15 мг/кг, ПДК в воде - 0,01 мг/дм³; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/м³; МДУ для винограда -0,4 мг/кг; для картофеля, огурцов, томатов, подсолнечника (семена и масло), моркови и земляники - не допускается в пределах чувствительности метода контроля.

Область применения препарата Ипродион является контактным фунгицидом с защитным и искореняющим действием. Ингибирует прорастание спор и рост грибного мицелия. Вещество проявляет высокую эффективность против возбудителей септориоза, церкоспороза, алътернариоза, фузариоза, фомоза, белой и серой гнилей всходов, мучнистой росы, фомопсиса на овощных, масличных и цветочных культурах, виноградниках.

Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Ровраль, СП (500 г/кг) в качестве средства борьбы с возбудителями фитофтороза, пероноспороза и алътернариоза на посадках огурцов и томатов защищенного грунта путем обработки вегетирующих растений.

1. Метрологические характеристики метода При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р-0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1 Метрологические параметры

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности ), ±5, % Стандартное отклонение повторяемо сти <?п % Предел повторяемости, г, % Предел воспроизводимости, R, % Огурцы от 0,02 до 0,1 вкп. 50 3,6 10,1 15,6 более 0,1 до 0,2 25 1.8 5,0 7,8 Томаты от 0,02 до 0,1 вкл. 50 3,6 10,1 15,6 более 0,1 до 0,2 25 2,8 7,8 12,1

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п=20) приведены в таблице 2.

Таблица 2 Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал _ среднего    результата    для    n-20,    Р    =    0,95_

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п - 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций мг/кг Среднее значение определе ния, % Стандартное отклонение, S, % Доверительный интервал среднего результата, ±% Огурцы 0,02 0,02-0,2 83,7 3,6 ±3,3 Томаты 0,02 0,02-0,2 85,0 3,57 ±3,3

2. Метод измерений Методика основана на определении ипродиона с помощью высокоэффективной

жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором. Контроль ипродиона в образцах плодов огурца и томата осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из растительного материала водным ацетоном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак С8.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

J.7. Средства измерений Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым    Номер Госреестра

детектором с переменной длиной волны (фирма Knauer,    № 16848-03

Германия)

Весы аналитические ВЛА-200    ГОСТ 2104

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим    ГОСТ 7328

пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г

Колбы мерные вместимостью 2-100-2,2-1000-2    ГОСТ 1770

Меры массы    ГОСТ 7328

Пипетки градуированные 2-го класса точности    ГОСТ 29227

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 см³

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой    ГОСТ 1770

вместимостью 5 см³

Цилиндры мерные 2-го класса точности    ГОСТ 1770

вместимостью 25,50, 100,500 и 1000 см³

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3,2, Реактивы

Ипродион, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,8% (Байер, Германия) Ацетон, чда

Ацетонитрил для хроматографии, хч

Вода бидистиллированная или деионизованная

н-Гексан, хч

Кислота орто-фосфорная, хч, 85%

Натрий сернокислый, безводный, хч Натрий хлористый, хч Этиловый эфир уксусной кислоты, ч

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией

33, Вспомогательные устройства, материалы

%

Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Со. (США)

Воронка Бюхнера    ГОСТ 0147

Воронки делительные вместимостью 100 см³    ГОСТ 25336

Воронки конусные диаметром 30-37 мм    ГОСТ 25336

Гомогенизатор    МРТУ 42-1505

Дефлегматор елочный    ГОСТ 9737

Колба Бунзена вместимостью 250 см³    ГОСТ 5614

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 50 и 100 см³    ГОСТ 9737

Колбы плоскодонные вместимостью 250 см³    ГОСТ 9737

Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см и внутренним диаметром 8-10 мм

Колонка хроматографическая, стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасфер 110-С18 (5 мкм)

(ЗАО «БиоХимМак СТ», Москва)    ТУ    4215-001-05451931-94

Насос водоструйный вакуумный    ГОСТ 10696

Патроны концентрирующие Диапак С8 (0,6 г),    ТУ    4215-002-05451931-94

(ЗАО «БиоХимМак СТ», Москва)

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или    ТУ 25-11-917-74

ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария)

Силикагель 60 (0,063-0,2 мм) для колоночной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности

Стаканы химические вместимостью 100 и 500 см³    ГОСТ 25336

Стекловата

Установка для перегонки растворителей

Фильтры бумажные «красная лента», обеззоленные    ТУ 6-09-2678-77

или фильтры из хроматографической бумаги Ватман ЗММ Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 100 мм³, модель Microliter # 1710 (Hamilton,США)

Шприц медицинский с разъемом Льюера вместимостью 10 см³ ГОСТ 22090 Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4. Требования безопасности

уз

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими веществами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12,1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства поэкаротушения по ГОСТ L2.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0,004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению лробоподготовкя допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

*    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20+5)°С и относительной влажности не более 80%.

*    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак С8.

7,1. Очистка органических растворителей

7,1,1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2.    Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания ее в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.3.    Очистка этилацетата

Этилацстат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

7.1.4.    Очистка силикагеля

Силикагель 60 (0,063-0,20 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130°С в течение 5 часов.

7,2. Приготовление 0,005 Мраствора орто-фосфорной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 0,34 см⁵ 85%-ной орто-фосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.5. Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак С8

для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля I степени активности в 20 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 см³ смеси гексан-эгил ацетат (1:9, по объему) и 30 см³ смеси гексан-этил ацетат (9:1, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек., после чего она готова к работе.