Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.2138-4.1.2151—06

Издание официальное

Москва. 2009

ББК 51.21 037

037 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.—146с.

1.    Сборник подготовлен Федеральным научным центром гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В. Н. Ракитский, проф. Т. В. Юдина); при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Разработчики методов указаны в каждом из них.

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г. Г. Онищенко.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

Формат 60x88/16    Печ. л.    9,25

Тираж 100 экз.

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш„ 19а Отделение реализации, те л./факс 952-50-89

9. Выполнение определения ЯЛ Концентрирование и очистка пробы Образец отфильтрованной воды объемом 200 см³, помещенный в химический стакан вместимостью 250-300 см³, вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон Sep Рак С18, подготовленный по п. 7.2. со скоростью пропускания раствора Ь2 капли в сек. После завершения концентрирования пробы патрон промывают последовательно тремя порциями по 5 см³ смеси вода-метанол в следующем объемном соотношении - 9:1, затем 7:3 и 1:1, далее 5 см³ смеси метанол-0,02 М орто-фосфорная кислота (1:1, по объему), элюаты отбрасывают. Вещество элюируют с патрона 4 см³ подвижной фазы, приготовленной по п. 7.3, собирая элюат в градуированную пробирку с пришлифованной пробкой, перемешивают и анализируют на содержание бромадлиолока по п. 9.2.

9.2. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф «Breeze» с ультрафиолетовым детектором (фирма Waters, США)

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry® Cl 8, зернением 5 мкм Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: метанол-вода-орто-фосфорная кислота (83:17:0,1, по объему)

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин

Рабочая длина волны: 280 нм

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 мм³

Ориентировочное время выхода бромадиолона (2 диастереоизомера):

7,2 мин.

7,56 мин (основной пик)

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор бромадиолона с концентрацией 0.5 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.3.).

10, Обработка результатов анализа

Содержание бромадиолона в пробе воды (X, мг/дм³) рассчитывают по формуле:

A * V =........... _# где

W

A - концентрация бромадиолона, найденная по градуировочному графику в соответствии с суммой площадей пиков диастереоизомеров, мкг/см³;

V - объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см³;

W - объем анализируемого образца воды, см³.

1L Проверни приемлемости результатов параллельных определений За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух

параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела

повторяемости (1):

где Х|, Хг- результаты параллельных определений, мг/дм³;

г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г = 2.8ст_г.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(* ± Д) мг/дм³ при вероятности Р= 0.95,

где * - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дм³;

Д- граница абсолютной погрешности, мг/дм³;

Д “6*Х/100,

5- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней 1раницы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0.0005 мг/дм³»*

* ~0.0005 мг/дм³ - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецинзионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

Сл в Д — + Д — .

<>    “    л_%Х    “    л,х ' *

где ± Д_л-(± Д_д^) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность)

результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/дм³, при этом:

Д_л = ± 0,84 Д,

где Д- граница абсолютной погрешности, мг/дм³;

Д -6*Х/100,

6- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %,

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

к.- X⁹-X - С_д ,

где Х\ X_уС_д среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п.11) содержания компонента в образце с добавкой,

испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/дм³; Норматив контроля К рассчитывают по формуле

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

IK.ISK, (2)

М,

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)

2-\Х_х -A’jl-lOO

где Х|, Хг - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/дм³;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1),%.

12. Разработчики,

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана).

а

Содержание

МУК 4.1.2138-06.............................................................................................4

2.    Методические указания индоксакарба в воздухе рабочей зоны методом

капиллярной газожидкостной хроматографии МУК 4.1.2139-06..........................................14

3.    Методические указания по определению остаточных количеств бромадиолона в

воде методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2140-06...........23

4.    Методические указания по измерению концентраций манкоцеба в атмосферном

методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2142-06....................45

6.    Методические указания по измерению концентраций МЦПА в атмосферном

воздухе населенных мест методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2143-06........................................................................................ 56

7.    Газохроматогрофическое определение I-метоксипропан-2-ол ацетата в атмосферном

воздухе. МУК 4.1. 2144-06........... 65

8.    Фотометрическое определение натрия перкарбоната в атмосферном воздухе.

МУК 4,1.2145-06...........................................................................................77

9.    Методические указания по газохроматографическому определению концентраций

1,1 димегилгидразина в почве, МУК 4.1.2146-06...,...............................................85

10.    Методические указания по измерению концентраций хлорсульфурона

в атмосферном воздухе населенных мест методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2147-06...........................................................................................94

11.    Методические указания по измерению концентраций проквиназида

в воздухе рабочей зоны методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1. 2148-06..........................................................................................106

12.    Методические указания по определению остаточных количеств пропаргита в воде

методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2149-06...................................114

13.    Методические указания по измерению концентраций цимоксанила в воздухе рабочей зоны, смывах с кожных покровов операторов и в атмосферном воздухе населенных мест методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

МУК4Л. 2150-06...........................................................................................126

14.    Методические указания по измерению концентраций метомила в воздухе рабочей

зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4Л .2151-06.......138

Методические указания по определению остаточных количеств бромадиолока в воде методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации бромадиолона в воде в диапазоне 0,0005 -0,01 мг/дм³,

Бромадиолона - действующее вещество препарата БРОМ-БД, концентрат (2,5 г/кг);

фирма ООО “Валбрента Кемикалс”

3*[3-(4'-Бромбифенил-4-ил)-3-гидрокси-1-фенилпропнл]-4-гидроксикумарин

(1UPAC)

С30Н23ВГО4 Мол. масса 524,4

Смесь двух диастереоизомеров.

Бромадиолон - белое порошкообразное вещество без запаха (технический

продукт бледно    желтый),    Температура    плавления    200-210°С (смесь

диастереоизомеров). Давление паров при 20°С - 0,002 мПа. Растворимость в органических растворителях при 20°С (в г/дм³): диметилформамид * 730; этилацетат -25; этанол - 8,2. Растворим в ацетоне, слабо растворим в хлороформе, практически не растворим в диэтиловом эфире и гексане. Растворимость в воде (при 20°С) - 19

мг/дм³. Коэффициент распределения н-октанол/вода; K_ow log Р = 3,5. Термически стабилен до 200°С.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LDjo) для крыс - 1,125 мг/кг; мышей -1,75 мг/кг; кроликов - 1,00 мг/кг; кошек - > 25 мг/кг; собак - > 10,0 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для кроликов 1,71 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) - 0,43 мг/дм³.

Область применения препарата

Бромадиолон - родентицид антикоагулянтного типа класса кумаринов, предназначенный для приготовления отравленных пишевых приманок для борьбы с вредными полевыми и домашними грызунами внутри жилых и нежилых помещений. Является антикоагулянтом второго поколения с отсроченным сроком действия.

Выпускается в виде 0,25% концентрата.

Рекомендуемая ПДК в воде водоемов 0,001 мг/дм³.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и её составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р-0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Метрологические параметры Таблица 1

Анализиру емый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (дм3) Показатель точности (граница относительной погрешности), ±5, % Р-0,95 Стандартное отклонение повторяемости, ог, °/о Предел повторяемости, г,% Предел ЙОСПрОИЗВО' димости, Я, % Вода от 0,01 до 0,001 вкл. 100 3,7 10 13 менее 0,001 до 0,0005 150 4,2 12 15

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п - 20) приведены в таблице 2.

11олнота извлечения вещества» стандартное отклонение, доверительный интервал

Таблица 2 среднего результата

Анализируе-! мый объект Метрологические параметры, Р =* 0,95, п = 20 Предел обнару* жен ия, мг/дм3 Диапазон определяемых концентраций, мг/дм3 Среднее значение определения % Стандартное отклонение, S,% Доверительный интервал среднего результата, +, % Вода 0,0005 0,0005 - 0,01 83,1 3.7 2,0

1. Метод измерений Метод основан на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором. Для концентрирования и очистки проб воды использованы патроны для твердофазной жстракции Sep Рак С18.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3,1. Средства измерений Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым Номер в Государственном детектором с переменной длиной волны (фирмы Waters, реестре средств измерений

США)

Весы аналитические ВЛА-200

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г Колбы мерные вместимостью 2*100-2,2*1000*2 Меры массы

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³ Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 см³

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25,50,100,250 и 1000 см³

/Г

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Бромадиолон технический с содержанием основного вещества не менее    98 Л %    (фирмы ООО «Валбрента

Кемикалс»)

Вода деионизованная    ГОСТ 6702

Кислота орто-фосфорная, хч, 85%    ГОСТ 6552

Метиловый спирт (метанол), хч    ГОСТ б995

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3J. Вспомогательные устройства, материалы Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)

Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные или ТУ 6-09-2678-77 фильтры из хроматотрафической бумаги Ватман ЭММ Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм    ГОСТ    25336

Груша резиновая

Дефлегматор елочный    ГОСТ    9773

Колбы плоскодонные вместимостью 100,250,400-500 см³ ГОСТ 9737

Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Насос водоструйный вакуумный    ГОСТ    10696

Стаканы химические, вместимостью 100 и 250    см³    ГОСТ    25336

Стекловата

Стеклянные палочки

Патроны для твердофазной экстракции Sep Рак С18 Cartridges (фирмы Waters, США)

Установка для перегонки растворителей Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry®

С18, зернением 5 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 - 100 мм³

111 ирицы медицинские с разъемом Льюера вместимостью    ГОСТ 22090

^ и 20 см³

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими (схническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4,009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда • по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

б. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия;

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка метанола перегонкой с дефлегматором (при необходимости), приготовление раствора орто-фосфорной кислоты, градуировочных растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка концентрирующих патронов Sep Рак С18.

7.7. Приготовление 0,02 Мраствора орто-фосфорной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 1,36 см³ 85%-ной орто-фосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.2. Подготовка концентрирующего патрона Sep Рак С18

Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца 2 см³ метанола со скоростью прохождения растворителя через патрон 1-2 капли в сек., затем 5 см³ деионизованной воды. Патрон готовят непосредственно перед использованием для концентрирования образца.

7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помешают 170 см³ бидистиллированной или деионизированной воды, 1,0 см³ орто-фосфорной кислоты, 830 см³ метанола* перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7,4, Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п, 7.3) при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.5. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.5.1. Исходный раствор бромадиолона для градуировки (концентрация 100 мкг/см³) В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,0100 г бромадиолона, добавляют 50-70 см³ метанола, помешают на ультразвуковую баню на 1 мин для растворения, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы № 1-6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7J.2. Раствор Ns 1 бромадиолона для градуировки и внесения (концентрация 5 мкг/см³) В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 5 см³ исходного градуировочного раствора бромадиолона с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.5.1.), разбавляют метанолом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесеио-кайдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.5.3. Рабочие растворы № 2-6 бромадиолопа для градуировки (концентрация 0.025 -0.5 мкг/см³)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0.5,1.0,2.0,5.0 и 10.0 см³ градуировочного раствора №1 с концентрацией 5 мкг/см³ (п. 7.5.2.), доводят до метки подвижкой фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.3.), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы Ка№ 2 - 5 с концентрацией бромадиолона 0.025,0.05,0.1, 0.25 и 0.5 мкг/см³, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 2-х недель.

7.6. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую зависимость суммы площадей пиков диастереоизомеров бромадиолона (отн. единицы) от концентрации вещества в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки К°№ 2-6,

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют нс менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают сумму площадей пиков диастереоизомеров действующего вещества.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х растворов для градуировки различной концентрации. Если значения суммы площадей отличаются более чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для 1радуировки.

8. Отбор и хранение проб Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (Кг 2051-79 от 21.08,79).

Пробы воды анализируют в день отбора, при необходимости хранят в холодильнике при температуре 4-6°С в течение 3-х недель. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18°С.

Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.