Государственное санитарно-эпндсмно.кн ичсское нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение вредных веществ в биологических средах

Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.2116—06

Издание официальное

Москва • 2008

Федеральная сдужба по напору в сфере защиты нрав ноз ребшедей н G.iaioiio.ivmiih че.ювека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение вредных веществ в биологических средах

Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.21*16—06

МУК 4.1.2115—06

Во флаконы из-под пенициллина помсишют по 5 см³ крови с аттестованной смесью, добавляют по 2 см³ 10 %-го раствора щавелевой кислоты. флаконы закрывают резиновой пробкой и ставят в металлические цилиндры с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой (рис. 1). Первый цилиндр с флаконом погружают в кипящую водяную баню. По истечении 5 мин отбирают нагретым в термостате при / = 60 °С шприцем из флакона 5 см³ парогазовой пробы и вводят ее в хроматографическую колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:

температура термостата колонок - 90 °С: температу ра испарителя - 170 °С: температу ра детектора -250 °С: расход газа-носителя (азота) - 30 см³/мнн. скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч; время удерживания хлороформа - 3 мин 05 с:

тетрахлорметана - 4 мин 20 с:

1.2-дихлорэтана - 5 мин 30 с.

На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику . Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

7.5. Отбор проб

Отбор проб венозной крови в объеме нс менее 10 см³ производится в тщательно вымытую стеклянную пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно добавлено 0.1 см³ раствора гепарина. Анализ крови проводить сразу или хранить в морозильной камере нс более 5 дней.

8. Выполнение измерений

В два флакона из-под пенициллина помещают по 5 см³ крови, добавляют по 2 см³ 10 %-го раствора щавелевой кислоты, флаконы закрывают резиновой пробкой и ставят в металлические цилиндры с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой (рис. 1). Первый цилиндр с флаконом погру жают в кипящу ю водяну ю баню. По истечении 5 мин отбирают нагретым в термостате при / = 60 °С шприцем из флакона 5 см³ парогазовой пробы и вводят се в хроматографическую колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для

168

МУК 4.1.2115—06

Таблица 2 Диапазон измереннй, значения показа гелей точности, 1101М0рЯСМ0С П1, НОСМроМ И50Ц1М0С1II

I ^именование определяемого компонент и диапазон измерений, мкг/см3 Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), <тг, % 11оказа'гель воспроизводимости (относительное среднеквадра-тическое отклонение воспроизводимостиХ <То_ , % I Указатель точ-ности (границы относительной погрешности при вероятности Р = 0,95), ± 5, % Хлороформ, от 0,005 до 0,12 вкл. 15,1 19,5 20,7 Тетрахлорметан. от0,0006 до 0,015 вкл. 5,3 5,7 17,6 1,2-Дихлорэтан от 0,05 до 1,25 вкл. 3,7 4,5 пл

Таблица 3 Значения предо.юк новгоряемосi и и воспроизводимости при доверительной вероя шосгп Р = 0,95

11аименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см3 Предел повторяемости (относительное значение допускаемого рас-хождеиия между двумя результатами параллельных определений), г„, % Предел виутрилабораториой воспроизводимости (относи-тельное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, получен-ш,1 ми в одной лаборатории, но в разных условиях), R-f, % Хлороформ, от 0,005 до 0,12 вкл. 21,87 26,17 1,2-Дихлорэтан ог 0,05 до 1,25 вкл. 10,7 9,5 Тетрахлорметан, от 0,0006 ;ю 0,015 вкл. 7,3 8,7

10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала.

Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает 5 %.

МУК 4.1.2115—06

10.2. Контроль повторяемости

Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы, с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, в течение возможно минимального интервала времени, нс должно превышать значения предела повторяемости г_п (табл. 3)

Повторяемость результатов параллельных измерений признают удовлетворительной, если

г_п - значение предела повторяемости. %:

Х_тт - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;

Х_тт - минимальный результат из 2-х параллельных измерений.

Если условие нс выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неу довлетворительным результатам, и устраняют их.

10.3. Контроль воспроизводимости

Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т. д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной. если выполняется условие:

Л', - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, мкг/см³;

X2 - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, полученный в других условиях, мкг/см³;

R.. - значение предела внутрнлабораторной воспроизводимости.

% (табл. 3).

Расхождение между результатами измерений Х_} и Х₂. полученных в разных условиях, нс должно превышать значений показателя воспроизводимости R— при доверительной вероятности Р = 0,95, указан

ных в табл. 3. Если условие нс выполняется, эксперимент повторяют.

171

МУК 4.1.2115—06

При повторном получении отрицательного результата выясняют причины. приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.4. Оперативный контроль точности

Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между результатом контрольного измерения содержания алифатических хлорированных соединений (хлороформ, тстрахлорметан. 1.2-дихлорэтан) в пробе с известной добавкой (Л'¹). в рабочей пробе без добавки (X) и величиной добавки С₀ (добавка должна составлять не менее 40 % от содержания алифатических хлорированных соединений в рабочей пробе) с нормативом точности К. Результаты контроля признаются удовлетворительными. если выполняется условие:

|F-X-C₀| = K, .где

Л'¹ - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных измерений, мкг/см ;

X - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе из 2-х парадлельных измерений. мкг/см³;

С_д - величина добавки к пробе, мкг/см³.

К = 0.84 • J(— • X)² + (— • X^х )² V 100    100

Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при выполнении условия: А* <, К.

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Периодичность контроля исполнения процедуры ВКК регламентируют в руководстве по качеств) .лаборатории.

Литература

1. Бандман А. Л.. Войтснко Г. А.. Волкова Н. В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогснпроизводныс углеводородов: Справ, изд. /Под рсд. В. А. Филова и др. Л.: «Химия». 1990.

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т. С. Уланова. Т. В. Нурисла.мова. Н. А. Попова).

МУК 4.1.2115—06

1 - термометр; 2 - инертная прокладка; 3 - шприц;

4 - металлический цилиндре завинчивающейся крышкой;

5 - отверстие в металлической крышке; 6 - пенициллиновый флакон; 7 - проба крови; 8 - термостатируемая водяная баня

Рис. 1. Прибор для анализа равновесной паровой фазы

173

Определение вредных веществ в биологических средах: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2008.—183 с.

1.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 11.07.06 №2).

2.    Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 9 августа 2006 г.

3.    Введены впервые.

ЬКК 28.072

<    Роспотребнадзор, 2008

<    Федеральный центр iтн ненм и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008

МУК 4.1.2102-4.1.2116—06

Содержание

Измерение массовой концешрации селена в моче методом атомко-

абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2102—06............................................4

Определение массовой концентрации ванадия в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии с электротермической

атомизацией: МУК 4.1.2103—06........................................................................14

Определение массовой концентрации меди, магния, кадмия в пробах мочи

методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2104—06..................25

Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах

волос методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2105—06 37

Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии:

МУК 4.1.2106—06................................................................................................50

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2107—06....................................63

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (кровь)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2108—06....................................74

Определение массовой концентрации 2-хлорфенола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2109—06....................................85

Определение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах мочи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2110—06................................................................................................96

Измерение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2111—06..............................................................................................ПО

Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, гетрахлормешна. хлорбензола в биосредах (кровь)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2112—06..................................125

Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана в биосредах (моча) методом газохроматографического

анализа равновесного пара: МУК 4.1.2113—06...............................................137

Определение массовой концентрации хлороформа. 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана, хлорбензола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2114—06..................................149

Определение массовой концепграции хлороформа, 1,2-дихлорэтана,

тетрахлорметана в биосредах (кровь) методом газохромато1рафического

анализа равновесного пара: МУК 4.1.2115—06...............................................162

Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом

высокоэффективной жидкостной хромаго1рафии: МУК 4.1.2116—06.........174

МУК 4.1.2115—06

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|)срс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

9 августа 2006 г.

Дата введения: 1 сентября 2006 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение массовой концентрации хлороформа,

1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана в биосредах (кровь) методом газохроматографнческого анализа равновесного пара

Методические указания _МУК    4.1.2115—06_

1. Область применения

Методические указания по определению концентраций химических веществ в биологических средах предназначены для использования Федеральной службой по надзор> в с(|юрс защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием органических соединений в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «ГСОЕИ. Методики выполнения измерений». ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов». Методика анализа обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации алифатических хлорированных углеводородов в крови в диапазоне концентраций:

162

МУК 4.1.2115—06

•    хлороформ от 0.005 до 0.120 мкг/см³ с погрешностью 20.7 % при доверительной вероятности 0.95;

•    тетрахлорметан от 0.0006 до 0.0150 мкг/см³ с погрешностью 17.6 % при доверительной вероятности 0,95;

•    1.2-дихлорэтан от 0.05 до 1.25 мкг/см³ с погрешностью 12.2% при доверительной вероятности 0,95.

Хлороформ (трихлорметан)

СНС1₃    Молекулярная    масса    119.38

Хлороформ - бесцветная жидкость с характерным сладковатым за-пахом. Температура кипения 61.15 °С. температура плавления -63.5 °С. Хлороформ растворим в органических растворителях и малорастворим в воде, наркотик 111.

Т етрахлормстан

CQ,    Молекулярная масса    153.82

Тетрахлорметан - бесцветная жидкость. Температура кипения 76,75 °С. температура плавления (-22.87 °С). Тетрахлорметан растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Тетрахлорметан - сильнейший наркотик 11).

1.2- Дихлорэтан

С:Н.₁С1:    Молекулярная масса 98.97

1.2- Дихлорэтан - бесцветная жидкость. Температура кипения 83.5 °С. температура плавления -35.3 °С. растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. 1.2-Дихлорэтан является токсичным соединением 111.

2. Сущность метода

Методика основана на предварительном выделении алифатических хлорированных углеводородов из биологического материала (кровь) путем нагревания объекта и последующего газохроматографичсского анализа парогазовой пробы.

Выполнение измерений массовой концентрации алифатических хлорированных углеводородов проводят методом газовой хроматографии с детектором электронного захвата. Определению нс мешают ацетон. ароматические углеводороды, алифатические спирты, трихлорэтилен при содержании каждого из указанных веществ не более 0.5 мкг/см³

Длительность анализа одной пробы крови - 20 мин.

163

МУК 4.1.2115—06

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений. вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химрсактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками.

3.1. Средства ишерений Хроматограф газовый с детектором электронного захвата Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические	ГОСТ 24104-01
Разновесы Г:-210	ГОСТ 7328-01
Секу ндомер «Агат»	ТУ 25-1894.003—90
Микрошприцы МШ-10	ТУ 5Е2.833.106
Линейка измерительная	ГОСТ 427-75
Лупа измерительная	ГОСТ 25706-83
Шприцы медицинские стеклянные, вместимостью 5 см3	ТУ 64-1-378—83
Колбы мерные, вместимостью 25.50.100 и 1 ООО см3	ГОСТ 1770-74
Пробирки мерные со шлифом 10 см3	ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные 5. 10 см3	ГОСТ 29227-91
Хлороформ фарм. Массовая доля основного вещества. % нс менее 99.7	ГСО 7288—96
Тетрахлорметан. Массовая доля основного вещества. % нс менее 99.9	ГСО 7211—95
1.2-Дихлорэтан, хч. Массовая доля основного вещества. % нс менее 99.6	ГСО 7332—96

3.2. Вспомогательн ые устройство Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм

Бидистиллятор стеклянный БС    ТУ    25-11.1592—81

Редуктор кислородный    ТУ 264)5-236—73

3.3. Материалы

Азот газообразный

3.4. Реактивы

Apiezon L на хроматонс N-cynep фракции 0.16

0.20 мм - неподвижная фаза для заполнения

хроматографической колонки

Серная кислота, осч

Калия дихромат, чда

Щавелевая кислота, ч

Ацетон, осч

3.5. Растворы

Раствор калия дихромата. 3 %-й Раствор щавелевой кислоты. 10 %-й

4. Требования к безопасности

4.1.    При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004—85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007—76.

4.2.    При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях» (Утверждены М3 СССР 20.12.82) и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением» (Утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87).

4.3.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.4.    При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию нс ниже ннженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.

165

МУК 4.1.2115—06

6.    Условия измерений

6.1.    При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

•    температура воздуха (20 ± 5) °С:

•    атмосферное давление 630—800 мм рт. ст.;

•    влажность воздуха нс более 80 % при температу ре 25 °С.

6.2.    Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, подготовка хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики.

7.    /. Подготовка посуды

Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3 %-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 см³ концентрированной серной кислоты), отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть бидистиллированной водой и просушить при температуре 120 °С.

7.2. Подготовка хроматографической колонки

Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и. нс подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 30 c.m Vmhh при температу ре 250 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору. записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

7.3. Приготовление аттестованных смесей

Для построения градуировочного графика собирают кровь, не содержащую исследуемых компонентов, и готовят серию рабочих стандартных растворов.

Исходный аттестованный раствор для градуировки.

В мерную колбу объемом 1 000 см³, содержащую бидистиллиро-ванную воду в объеме 500 см³, вводят микрошприцем 8 мм³ хлороформа

МУК 4.1.2115—06

ГСО 7288—96. 1 мм³ тетрахлорметана ГСО 7211—95, 100 мм³ 1.2-дихлорэтана ГСО 7332—96 и заполняют колбу до метки водой. Весовое содержание компонентов в исходной аттестованной смеси составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): хлороформ - 11.9 мкг/см³. тетрахлорметана - 1.63 мкг/см³, 1,2-дихлорэтан -125.77 мкг/см³. Срок хранения раствора -12 ч.

Раствор щавелевой кислоты. В небольшом количестве воды растворяют 10 г щавелевой кислоты и доводят в мерной колбе на 100 см³ водой.

7.4. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристик) устанавливают методом абсолютной калибровки на градуировочных смесях хлорированных углеводородов. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм²) от массы компонента (мкг) и строится по 5 сериям аттестованных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 аттестованных растворов, готовят в мерных пробирках объемом 10 см³. Для этого в каждую пробирку вносят по 5 см³ крови. 2 см³ 10 %-го раствора щавелевой кислоты и добавляют исходную аттестованную смесь для градуировки в соответствии с табл. 1 и доводят до метки б иди сталированной водой. Срок хранения -12 ч.

Таблица 1

Аттестованные смеси для установления градуировочной характеристики при определении копнен i рации алифатических хлорированных

углеводородов

I 1омер смеси для градуировки	1	2	3	4	5
Хлороформ, объем исходной аттестованной смеси (11,9 мкг/см3), мм3	2	10	20	30	50
Содержа»те хлороформа, мкг/см'	0,005	0,024	0,048	0,071	0,119
Тетрахлорметан, объем исходной аттестованной смеси (1,63 мкг/см3), мм3	2	10	20	30	50
Содержание тетрахлорметана, мкг/см'	0,0006	0,0033	0,006	0,009	0,015
1,2-Дихлорэтан, объем исходной аттестованной смеси (125,77 мкг/см3), мм3	2	10	20	30	50
Содержание 1,2-дихлорэтана, мкг/см'	0,05	0,25	0,5	0,75	1.25