Государственное санитарно-эпндсмно.кн ичсское нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение вредных веществ в биологических средах

Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.2116—06

Издание официальное

Москва • 2008

Федеральная сдужба по напору в сфере защиты нрав ноз ребшедей н G.iaioiio.ivmiih че.ювека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение вредных веществ в биологических средах

Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.21*16—06

МУК 4.1.2108—06

и по средним результатам из 7 серий рассчитывают градуировочные коэффициенты.

Значение градуировочного коэффициента вычисляют по фор-муле:

^//ст

S,, S„ - площади пиков исследуемого компонента (метилфениловый эфир) и внутреннего стандарта (нафталин), мм,

Q_i% Qcr - количество исследуемого компонента (метилфениловый эфир) и внутреннего стандарта (нафталин), мкг.

По результатам 7 измерений определяется среднее значение градуировочного коэффициента K_ifcl и строится градуировочный график в координатах: градуировочный коэффициент - отношение площадей пиков S,/S_cv. Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

7.6. Отбор проб

Отбор проб венозной крови в объеме нс менее 10 см³ производится в тщательно вымытую стеклянную пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно добавлено 0.1 см³ раствора гепарина. Анализ крови проводить сразу или хранить в морозильной камере нс более 5 дней.

8. Выполнение измерений

Пробу крови объемом 2 см³ доводят до 50 см³ бидистиллированной водой и помещают в делительную воронку объемом 250 см³, добавляют внутренний стандарт - нафталин 0.1 см³. Затем добавляют 2 г кристаллического карбоната натрия. Плавным покачиванием перемешивают содержимое воронки, затем вводят в воронку 0.3 см³ йодистого метила и встряхивают в течение 5 мин для перевода фенола в метилфениловый эфир.

Продукт метилирования экстрагируют 10 см³ диэтнловым эфиром в течение 10 мин. Подготовленную пробу - экстракт центрифугируют для денатурации белка в течение 10 мин. затем помещают в бюксу и упаривают под ИК-лампой до 1 см³. Полученный экстракт хроматографируют и проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе методом внутреннего стандарта. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб крови. Условия выполнения измерений аналогичные, как при установлении градуировочной характеристики (п. 7.5).

МУК 4.1.2108—06

9. Вычисление результатов измерении

На хроматограмме рассчитывают площади пиков метнлфенилового эфира и внутреннего стандарта (нафталина).

За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений Х_т{а. Х_тт. расхождение между которыми не должно превышать значения предела повторяемости г_п (табл. 3).

Расчет концентрации фенола (мкг/см³) в биопробс вычисляют по формуле:

А'- концентрация фенола в биопробс. мкг/см³;

$_ст - площади пиков метнлфенилового эфира и нафталина, мм": K_tCT ~ градуировочный коэффициент (устанавливается по градуировочному график) - К_1СТ - Sj/Scr); nicj - навеска нафталина, мкг:

V - объем пробы, см³.

Результат измерений представляют в виде (X ± Д) мкг/см³, где

А' - средний результат измерений, мкг/см³.

при условии:    X    - X_min <    ⁺    _гдс

F .    /ша    mm    _{10()    2}

А'пшх- максимальный результат из 2-х параллельных измерений: X_mm - минимальный результат из 2-х параллельных измерений: г_п - значение предела повторяемости. %:

Д - характеристика погрешности, мкг/см³ при Р = 0.95. равная:

б - относительное значение характеристики погрешности. % (табл. 2).

10. Внутренний контроль качества

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений -повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость). точность - осуществляют с целью получения оперативной ин-(|юрмации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335—2(ЮЗ «ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

81

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, нс превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.

Таблица 2

Диамант измерений, значения показателен точности, повторяемости, воспроизводимости

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см Показатель повторяемости (относительное средне-квадратическое отклонение повторяемости), *„% Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадра-тическое отклонение воспроизводимости) (Тп , % Rx< Показатель точности (1 ранним относительной погрешности при вероятности г = 0,95), ±6, % Фенол, от 0,04 до 0,50 вкл. 10,5 10,7 24,8

Таблица 3

Значения пределов повторяемости и воспроизводимое i и при доверт ел иной вероятности /, = 0,95

I (аименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см Предел повторяемости (относительное значаще допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), Ъ% 11редел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значаще допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, по в разных условияхХ *»•* Фенол, от 0,04 до 0,50 вкл. 12,9 29,6

10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением концентраций нс превышает 5 %.

10.2. Контроль повторяемости

Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы, с использованием одних

МУК 4.1.2108—06

и тех же средств измерений и реактивов, в течение возможно минимального интервала времени, нс должно превышать значения предела повторяемости г_п (табл. 3).

Повторяемость результатов параллельных измерений признают удовлетворительной, если

г„ - значение предела повторяемости. %:

Х/пах — максимальный результат из 2-х параллельных измерений:

Х_тт - минимальный результат из 2-х параллельных измерений.

Если условие нс выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.3. Контроль воспроизводимости

Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разнос время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т. д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной. если выполняется условие:

\у vM    *.+*2

Х_] - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, мкг/см³;

Х₂ - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, полученный в других условиях, мкг/см³;

R_v/- значение предела внутрилабораторной воспроизводимости. % (табл. 3).

Расхождение между результатами измерений Х_] и Х₂, полученных в разных условиях, нс должно превышать значений показателя воспроизводимости R_x( при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.

Если условие нс выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

83

10.4. Контроль точности

Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между результатом контрольного измерения содержания фенола в пробе с известной добавкой (Л’¹) в рабочей пробе без добавки (X) и величиной добавки С₀ (добавка должна составлять не менее 40 % от содержания фенола в рабочей пробе) с нормативом точности К.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

|Г-*-Г₀| = К*.гдс

Х^] - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных измерений, мкг/см³;

X - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений. мкг/см³;

С_д - величина добавки к пробе, мкг/см³.

К = 0.84 • J(— • X)² + (— • X¹)² V 100    100

Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при выполнении условия: К_к й К.

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, устраняют их и процедуру контроля повторяют.

Периодичность ВКК регламентируют согласно руководству по качеств) лаборатории.

Литература

1. Бандман А. Л., Войтенко Г. А.. Волкова Н. В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галоген производные углеводородов: Справ, изд. /Под ред. В. А. Филова и др. Л.: «Химия». 1990.

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т. С. Уланова. Т. В. Нурисламова. Н. А. Попова).

Определение вредных веществ в биологических средах: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2008.—183 с.

1.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 11.07.06 №2).

2.    Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 9 августа 2006 г.

3.    Введены впервые.

ЬКК 28.072

<    Роспотребнадзор, 2008

<    Федеральный центр iтн ненм и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008

МУК 4.1.2102-4.1.2116—06

Содержание

Измерение массовой концешрации селена в моче методом атомко-

абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2102—06............................................4

Определение массовой концентрации ванадия в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии с электротермической

атомизацией: МУК 4.1.2103—06........................................................................14

Определение массовой концентрации меди, магния, кадмия в пробах мочи

методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2104—06..................25

Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах

волос методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2105—06 37

Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии:

МУК 4.1.2106—06................................................................................................50

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2107—06....................................63

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (кровь)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2108—06....................................74

Определение массовой концентрации 2-хлорфенола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2109—06....................................85

Определение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах мочи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2110—06................................................................................................96

Измерение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2111—06..............................................................................................ПО

Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, гетрахлормешна. хлорбензола в биосредах (кровь)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2112—06..................................125

Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана в биосредах (моча) методом газохроматографического

анализа равновесного пара: МУК 4.1.2113—06...............................................137

Определение массовой концентрации хлороформа. 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана, хлорбензола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2114—06..................................149

Определение массовой концепграции хлороформа, 1,2-дихлорэтана,

тетрахлорметана в биосредах (кровь) методом газохромато1рафического

анализа равновесного пара: МУК 4.1.2115—06...............................................162

Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом

высокоэффективной жидкостной хромаго1рафии: МУК 4.1.2116—06.........174

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|>ерс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

9 августа 2006 г.

Дата введения: 1 сентября 2006 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (кровь) газохроматографическим методом

Методические указания _МУК    4.1.2108—06_

1. Область применения

Методические указания по определению концентраций химических веществ в биологических средах предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием органических соединений в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «ГСОЕИ. Методики выполнения измерений». ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов». Методика анализа обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации фенола в крови в диапазоне концентраций: от 0.04 до 0.50 мкг/см³ с погрешностью 24.8 % при доверительной вероятности 0.95.

Фенол

СбН₅ОН

МУК 4.1.2108—06

Фенол - бесцветные кристаллы с характерным запахом. Т_пт -181.75 °С Растворим в воде и органических растворителях. Является сильным нсйротоксином. поражает печень, почки, проникает через кожу 111.

2. Сущность метода

Методика основана на предварительном переводе фенола в метил-фениловый эфир в щелочной среде с помощью йодистого метила, концентрировании продукта дериватизации из крови экстракцией диэтило-вым эфиром и последующем газохроматографическом анализе экстракта. Необходимость превращения фенола в производные вызвана тем. что прямой газохроматографичсский анализ фенолов, особенно следовых количеств, осложнен высокой полярностью фенольных соединений и низким давлением их паров. Улучшить газо хромаю графические свойства фенола можно путем превращения их в менее полярные соединения.

Выполнение измерений массовой концентрации фенола проводят методом газовой хроматографии с использованием пламенноионизационного детектора. Определению не мешают о-, м-. п-крезолы. ксиленолы в количествах, не превышающих верхнюю границ) измеряемой концентрации фенола. Длительность анализа, включая экстракцию пробы. - 20 мин.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений. вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками

3.1. Средства тмерений

Хроматограф газовый с пламенно-ионизационным детектором Секундомер «Агат»

Микрошприцы МШ-10

Весы лабораторные ВЛР-2(Х) аналитические

Разновесы Г₂-210

Линейка измерительная

Лупа измерительная

Колбы мерные, вместимостью 25. 50. 100 и

1 000 см³

Пипетки, вместимостью 5. 10 см³    ГОСТ 29227-91

3.2. Вспомогательн ые устройства Хроматографическая колонка стеклянная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм Бидистиллятор стеклянный БС Редуктор кислородный Центрифуга СМ-4. 3 ООО об./мин Бюксы стеклянные Воронка делительная

3.3. Материалы

Гелий в баллоне Водород технический Воздух в баллоне

3.-4. Реактивы 3 %OV-l на хроматоне N-cynep фракции 0.16 0.20 мм - неподвижная фаза хля заполнения хроматографической колонки Фенол, чда Нафталин, хч Натрия карбонат, чда Мстил йодистый Диэтило в ый эфир мед.

Серная кислота, осч Калия дихромат, чда Ацетон, осч

3.5. Растворы Раствор калия дихромата. 3 %-й

4. Требования к безопасности

4.1.    При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004—85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007—76.

4.2.    При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях» (Утверждены М3 СССР 20.12.82) и «Правила устройства и

МУК 4.1.2108—06

безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением» (Утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87).

4.3.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.4.    При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию нс ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.

6. Условия измерений

6.1.    При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

•    температура воздуха (20 ± 5) °С:

•    атмосферное давление 630—800 мм рт. ст.;

•    влажность воздуха нс более 80 % при температуре 25 °С.

6.2.    Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекоменду емых технической документацией по прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следу ющие работы: подготовка посуды, подготовка хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка посуды

Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3 %-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 см³ концентрированной серной кислоты), отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть дистиллированной водой и просушить при температуре 120 °С.

77

7.2. Подготовка хроматографической колонки

Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном и высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и. нс подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелий) с расходом 30 см³/.мин при температуре 250 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору. записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

7.3. Приготов.1еиие аттестованных смесей Для построения граду ировочного графика собирают кровь, не содержащую исследуемых компонентов, и готовят серию рабочих аттестованных растворов.

Исходный аттестованный раствор фенола. В мерную колбу объемом 25 см³, содержащу ю ацетон в объеме 15 см³, вводят 10 мг фенола, и объем доводят до метки ацетоном. Весовое содержание определяемого вещества в исходном аттестованном растворе составляет 400 мкг/см³. Срок хранения - 5 ч.

Исходный аттестованный раствор нафташна (внутренний стандарт). В мерную колбу объемом 25 см³, содержащую ацетон в объеме 15 см³, вводят 10 мг нафталина и объем доводят до метки ацетоном. Весовое содержание определяемого вещества в исходном аттестованном растворе составляет 400 мкг/см³. Срок хранения - 3 дня.

7.4. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику устанавливают методом внутреннего стандарта на градуировочных смесях фенола. Строится градуировочный график в координатах: градуировочный коэффициент K_tVT - отношение площадей пиков Sf/S„ по 5 сериям аттестованных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 аттестованных растворов. готовят в мерных колбах объемом 50 см³. В мерную колбу объемом 50 см³, содержащую бидистиллированную воду в объеме 30 см³, вносят по 2 см³ крови. Затем вносят различные объемы исходных аттестованных растворов фенола и нафталина (внутренний стандарт) согласно табл. I и содержимое колбы доводят до метки водой. Далее проводят определение градуировочных коэффициентов фенола по отношению к вну треннему стандарту.

Таблица 1 Рабочие аттестованные растворы для установления i ратуировочных коэффициентов фенола но о ■ ношению к внутреннему стандарту

11омер смеси 1 2 3 4 5 6 7 Фенол, объем исходного аттестованного раствора (4(К) мкг/см3), см3 (),(Х)5 0,010 0,015 0,020 0,040 0,050 0,060 Содержание фенола, мкг/см3 0,04 0,08 0,12 0,16 0,32 0,40 0,48 Нафталин, объем исходного аттестованного раствора (4(Х) мкг/см3), см3 0,10 0,09 0,07 0,05 0,03 0,02 0,01 Содержание нафталина. мкг/см3 0,80 0,72 0,56 0,40 0,24 0,16 0,08

7.5. Определение градуировочных ко)(/н/шциентов фенола по отношению к внутреннему стандарту Определение градуировочных коэффициентов. 50 см³ рабочего аттестованного раствора помещают в делительную воронку объемом 250 см³ и добавляют 2 г кристаллического карбоната натрия. Плавным покачиванием перемешивают содержимое воронки, затем вводят в воронку 0.3 см³ йодистого мстила и встряхивают в течение 5 мин для перевода фенола в метилфениловый эфир.

Продукт метилирования экстрагируют 10 см³ диэтилового эфира в течение 10 мин. Подготовленные пробы - экстракты центрифугируют для денатурации белка в течение 10 мин, затем помещают в бюксу и упаривают под ИК-лампой до 1 см³.

В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 10 мм³ каждого экстракта рабочего аттестованного раствора и анализируют в условиях:

температу ра термостата колонок - НО °С: температу ра испарителя - 170 °С: температу ра детектора - 170 °С: расход газа-носителя (гелий) - 30 едг/мин: скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч; время удерживания мстилфснилового эфира - 4 мин 05 с: нафталина - 6 мин 45 с.

На полученной хроматограмме определяют высоты или площади пиков анализируемого компонента и внутреннего стандарта (нафталин)

79