Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребите.юй и благополучия человека Главный гос ударе твеюшй санитарный врач

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХЛОРСУЛЬФОКСИМА В ВОДЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ жидкое I IЮЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие методические указания устанавливают метол высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воле водоемов массовой концентрации хлорсульфоксима в диапазоне 0.0005 -0.01 мг/дм'.

Хлорсульфоксим - действующее вещество препарата КРОСС. ВГР (д в. 92 г'л хлорсульфоксима к-ты + 47 г/л хлорсульфурона к-ты). производитель Карс Интер-нешнл. Инк (США).

1 -(2-хлорфенилсульфонил)-3-(4-изопропилидениминоокси-6-диметиламино-1.3.5-триазин-2-ил)мочевина (IUPAC)

, N(CH₃)₂

N

SOjNHCONH —('    N

N =4

ON»C(CHj)2

Белое кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления 198"С. Давление паров при 25°С: 3.76 хЮ'⁶ мм рт. ст. Коэффициент распределения и-октанол/вода: Kow log Р -0,018 (pH 7). Растворимость в органических растворителях (г/дм³): ацетон - 105; этанол - 330; толуол - 12, метанол - 95; н-гексан - менее 0.001 Растворимость в воде при 25°С (г/дм³): 0.025 (pH 5); 3.0 (pH 7).

Водные растворы устойчивы к гидролизу в щелочной среде, гидролизуются в кислой среде: DT*, - 750 дней (pH 10), 60-85 дней (pH 7), 6-10 дней (pH 5), менее 1 суток (pH < 3,5).

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD <о) для крыс - 1358 мг'кг:    ост

рая дермальная токсичность (LD so) для крыс > 2500 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LKjo) для крыс > 2000 мг/м³.

Область применения препарата

Препарат КРОСС, ВГР (д.в. 92 г/л хлорсульфоксима к-ты + 47 г/л хлорсульфх-рона к-ты) рекомендуется в качестве гербицида для борьбы с сорной растительностью на посевах зерновых колосовых культур и льна с нормой расхода 100-150 мл/га.

ПДК хлорсульфоксима в воде водоемов - 0,00! мг/дм³.

1. Метрологические характеристики метода (Р * 0,95, п = 24)

Предел обнаружения: 0,0005 мг/дм³

Диапазон определяемых концентраций: 0,0005 - 0,01 мг/дм³

Среднее значение извлечения: 86,32%

Стандаргное отклонение: 5,74%

Доверительный интервал среднего результата: ± 8,62%

Таблица

Полнота извлечения хлорсульфоксима из воды (6 повторностей для каждой концентрации, Р = 0.95)

Среда Внесено хлорсульфоксима, мг/дм3 Обнаружено хлорсульфоксима. мг/дм3 Полнота извлечении. % 0,0005 4.2898*10'* ± 5.9313* 10'3 85.80 0,001 8,6105*10^ ±1,5215*10“* 86.10 Вода 0,005 4,3115*10'3 ±7,5397*1 O'4 86.32 0,01 8,7160*10'3 ± 1,5693*10'3 87.16 ___I

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой пробы воды (после подкисления) - хлористым метиленом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детек-    Номер Госреестра

тором с переменной длиной волны (фирмы Perkin- 15945-97 Elmer, США)

Весы аналитические ВЛА-200    ГОСТ    24104

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим ГОСТ 7328 пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г

Иономер ЭВ-74    ГОСТ    22261

Колбы мерные 2-100-2,2-250-2    и    2-1000-2    ГОСТ    1770

Меры массы    ГОСТ    7328

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимо- ГОСТ 29227 стью 1,0,2,0, 5,0,10 см³

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью ГОСТ 1770 10, 25, 50, 100, 200, 500 и 1000 см³ Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы Хлорсульфоксим с содержанием действующего вещества 98% (ОАО «Химпром», Россия) Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода деионизованная или перегнанная над КМпОд н-Гексан. хч

Кислота орто-фосфорная, хч, 85%

Метилен хлористый (дихлорметан), хч    ГОСТ    12794

Натрий гидроксид (натр едкий), чда    ГОСТ    4328

Натрий сернокислый, безводный, хч    ГОСТ    4!    66

Натрий фосфорнокислый однозамешенный. 2-водный ГОСТ 245 (NaH₂P0₄*2H₂0), чда

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичном и.ш более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные    ТУ    6-09-2678-77

Вата хлопковая

Воронки делительные вместимостью 500 см³    ГОСТ    25336

Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм    ГОСТ    25336

Г руша резиновая

Колбы плоскодонные вместимостью 300 - 400 см'    ГОСТ    9737

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 200 см³ ГОСТ 9737 Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм Насос водоструйный    ГОСТ    10696

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротаци- ТУ 25-11-917-74 онный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi. Швейцария

Стаканы химические, вместимостью 100,400 и 1000 см³ ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см.

внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100

С18, зернением 8 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 - 100 мм³

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

л*

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019. а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант». имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции:    очистка

органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7. ]. 1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия

/а

7.1.2. Очистка и-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серноП кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Приготовление 1 Л'раствора гидроксида натрия В мерную колбу вместимостью 250 см³ помешают 10 г едкого натра, растворяют в 100 - 150 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают

7.3. Приготовление 1Мраствора орто-фосфорной кислоты В мерную колбу вместимостью 100 см³ помешают 6.9 см³ орто-фосфорной кислоты. доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.4. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помешают 500 см³ ацетонитрила. 500 см³ деионизованной воды и 0,5 см³ 85%-ной орто-фосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.5. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.4) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 cm^j/mhh до установления стабильной базовой линии.

7.6. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.6.1 Исходный раствор хлорсульфоксима для градуировки (концентрация 100 мкг/см³) В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.01 г хлорсульфоксима, растворяют в 50-70 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы № 1-6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного градуировочного раствора.

7.6.2. Раствор Ns 1 хлорсульфоксима для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³) В мерную колбу вместимостью 100 cm^j помешают 10 см^-' исходного гру-дуировочного раствора с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.6.1.). разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения хлорсульфоксима из исследуемых образцов.

ns

7.6.3. Рабочие растворы №2-6 хлорсульфоксима для градуировки (концентрация 0.05 -1.0 мкг/см*)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0.5. 1.0. 2.5. 5.0 и 10.0 см³ градуировочного раствора №1 с концентрацией 10 мкг/см³ (л. 7.6.2.). доводя! до метки подвижной фазой (приготовленной по п. 7.4.), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2 - 6 с концентрацией хлорсульфоксима 0.05. 0.1. 0.25. 0.5 и 1,0 мкг/см³, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более суток.

7.7. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации хлорсульфоксима в растворе (мкг/см’’). устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки №№ 2-6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5-х параллельных измерений.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000.

Огобранные пробы воды анализируют в день отбора или хранят при 4“С в течение 3-х дней. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре ниже - 12°С.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция и очистка экстракта

Анализируемый образец воды объемом 200 см³ помещают в коническою ко.тт вместимостью 300-400 см³, вносят 1,18 г однозамешенного фосфата натрия (ЫаНгРОд^НгО), перемешивают до полного растворения соли, с помощью 1 N едкого натра доводят pH раствора до 10, осуществляя его контроль по иономеру. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³, добавляют 50 см³ смеси гексан-хлористый метилен (20:80, по объему), интенсивно встряхивают в течение 2-х мин После полного разделения фаз нижний органический слой сливают и отбрасывают. Операцию промывки водного раствора смесью гексан-хлористый метилен (20:801 повторяют еще дважды порциями по 30 см³.

Водную фазу переносят в коническую колбу вместимостью 300-400 cm^j. полкис-ляют с помощью 1 М орто-фосфорной кислоты до pH 3, контролируя его значение но иономеру. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³. добавляют 50 cm^j хлористого метилена, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. Нижний органический слой собирают в коническую колбу вместимостью 200 см³. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 30 см’¹ хлористого метилена. Объединенную органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помешенный в конусную химическую воронку на бумажном фильтре «красная лента». в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35°С. Сухой остаток в колбе растворяют в ! см³ ацетонитрила, добавляют 1 см³ подвижной фазы, перемешивают и анализируют содержание хлор-сульфоксима по п. 9.3.

9.2. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США) Колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4.0 мм. содержащая Кромасил 100 С 18, зернением 8 мкм

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - орто-фосфорная кислота (50:50:0,05, по объему)

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин Рабочая длина волны: 230 нм Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы: 20 мм³

Ориентировочное время выхода хлорсульфоксима: 7,3 * 7,5 мин Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор хлорсульф\ -рона с концентрацией 1.0 мкг/см³. разбавляют подвижной фазой.

10. Обработка результатов анализа

Содержание хлорсульфоксима в пробе воды рассчитывают по формуле:

Ах V

X ---------- ,    где

m

X - содержание хлорсульфоксима в пробе, мг/кг;

/У/

А -мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см^: m - объем анализируемого образца, см^-*.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12. Разработчики.

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. - Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (ФНЦГ им. Ф.Ф.Эрисмана)