УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей н

Дата введения: С

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДЕЛЬТАМЕТРИНА В КУКУРУЗНОМ МАСЛЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации дельтаметрина в кукурузном масле в диапазоне 0,01-0,1 мг/кг.

Дельтаметрин - действующее вещество инсектицидов Децис, КЭ (25 г/л), Децис Экстра, КЭ (125 г/л) и Децис Профи, ВДГ (250 г/кг), фирма производитель Байер Кроп Сайснс (Г ермания)

(S) -а -циано-3-фсноксибензил (1 R, 3 Я)-3-(2,2-дибромвинил)- 2,2-диметилциклопропанкарбоксилат(ИЮПАК)

(I R-[l-a ($*),3-а)]-циано(Зфсноксифенил)метил 3-(2,2дибромэтенил)- 2,2-димстилциклопропанкарбоксилат (С.А.)

CajHi^BraNOj Мол. масса: 505,2

Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления: 100 - 102°С. Давление паров при 25°С:    1,24    х    10'³    мПа. Коэффициент распределения

н-октанол/вода: Kow log Р = 4,6. Растворимость (г/дм³) при 20°С: диоксан - 900, циклогексан - 750, дихлорметан - 700, ацетон - 500, этанол - 15, вода (при 25°С) < 0,2 мкг/дм³.

Стабильно при хранении на воздухе. Более стабильно в кислой, чем в щелочной среде (DTso * 2,5 дня при pH 9)

В биологически активных почвах в аэробных условиях дельтаметрин подвергается микробиологическому разложению в течение 1 - 2 недель.

Краткая токсикологическая характеристика Острая пероральная токсичность (LD30) для крыс -    128    -    138    мг/кг;    острая

дермальная токсичность (LD50) для крыс - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LCjo) для крыс - 2,2 мг/дм³ воздуха.

Дельтаметрин вызывает умеренное раздражение глаз кролика и не влияет на кожу. Вещество токсично для рыб (LC50 = 0,9-1,4 мкг/дм³) и пчбл (LD50 = 50-80 нг/особь). Рекомендуемый норматив для дсльтаметрина в кукурузном масле - 0,02 мг/кг. Область применения препарата Дельтаметрин - инсектицид контактного и кишечного действия из группы синтетических пиретроидов. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жбеткокрылых, перепончатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых и овощных культур, кукурузы, хлопчатника, на плантациях картофеля, технических и плодовых культур при норме расхода 5 - 25 г д.в./га.

Зарегистрирован в России под торговыми названиями Децис, КЭ (25 г/л), Децис Экстра, КЭ (125 г/л) и Децис Профи, ВДГ (250 г/кг) в качестве инсектицида для применения в посевах пшеницы, ячменя, кукурузы, пастбищных трав, в посадках капусты и картофеля, на плодовых культурах путбм опрыскивания вегетирующих растений.

1. Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и 2.

12. Разработчики

Талалакина Т.Н., науч. сотр.; Дубовая Л.В., науч. сотр.; Макеев А.М., зав. лаб., канд. биол. наук

ВНИИ фитопатологии, 143050 Московская обл., п/о Большие Вяземы 592-92-20

С? ^Г    '    t    с/>    /1    —yf

Подпись руки Тал ал аки ной Т.Н., Дубовой Л.В. и Макеева А.М. заверяю

л*- ■ ■" >А*■ ’‘

Зав. канцелярией ВНИИФ

Р < *" |    •    Г    ^    •    '    ".    Л

ссх&'к-с-а.i (Банюлис Г.Г.)

Метрологические параметры Таблица 1

Анализи руемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S, % Относительное отклонение DS, % Довери тельный интервал среднего, % Масло 0,01 о о о 83,8 4,2 1,9 ±3,9

Таблица 2 Полнота определения дельтаметрина в модельной матрице (п = 5)

Внесено Открыто Доверительный Матрица дельтаметрина, мг/кг дельтаметрина. интервал среднего. % % 0,01 79,3 ±3,8 Масло 0,02 83,5 ±3,1 0,05 85,4 ±2,5 0,10 87,0 ±2,9

2. Методы измерений

Методика основана на определении вещества с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД). Контроль дельтаметрина в матрице осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из масла водным ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диалак-диол.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

/*г

Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с ЭЗД    Номер Госреестра

(СКБ «Хроматэк», Россия)    X? 14516-95

Весы аналитические ВЛА-200    ГОСТ 24104

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим ГОСТ 7328 пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,036 г

Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2    ГОСТ 1770

Меры массы    ГОСТ 7328

Пипетки градуированные 2-го класса точности    ГОСТ 29227

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой ГОСТ 1770 вместимостью 5 см³

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью ГОСТ 1770 25, 50, 100, 500 и 1000 см³ Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Дельтаметрин, аналитический стандарт фирмы Байер (Германия) с содержанием

д.в. 99,6%

Ацетон, чда    ГОСТ 2603-79

Ацетонитрил, ч    ТУ 6-09-3534-82

Вода бидистиллиро ванная    ГОСТ 6702

в-Гексан.    ТУ 6-09-3375

Натрий сернокислый, безводный, хч    ГОСТ 4166

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч    ГОСТ 22300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы Азот газообразный (баллон), осч.    ГОСТ 9293

Аппарат для встряхивания типа АВУ    ТУ 64-1-1081

Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Со. (США)

Воронки делительные вместимостью 100 см³    ГОСТ 25336

Дефлегматор елочный    ГОСТ 9737

Колбы плоскодонные вместимостью 250 см³    ГОСТ 9737

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 150 см³ ГОСТ 9737 Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см ГОСТ 9737 Концентрирующий патрон Диалак-диол (ЗАО БиоХимМак, РФ)

Силикагель (0,063-0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Мерк, Германия) 1 степени активности Стекловата

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или    ТУ 25-11 -917

ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария)

Установка для перегонки растворителей

Колонка хроматографическая, стеклянная, длиной 1 м, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Хромосорб W/HP (0,12-0,15 мм) с 3% SE-30

Колонка капиллярная кварцевая, ZB-1, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex (США) или аналогичная Центрифуга Т-23 (Janetzki, Германия) или аналогичная Шприц для ввода образцов в газовый хроматограф    ТУ 64-1 -2850

вместимостью 10 мм³ Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313- 03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

т

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20+5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции:    очистка органических

растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующих патронов Диапак-диол.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1.    Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения ее окрашивания в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.2.    Очистка этшацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

7.2 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 20 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 см³ гексана со скоростью 1-2 капли в сек., после чего она готова к работе.

7.3. Проверка хроматографического поведения дельтаметрина на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см¹ помещают 1 см³ градуировочного раствора № 1 дельтаметрина с концентрацией 1 мкг/см³ в гексане (п. 7.6.2), отдувают растворитель током азота, остаток растворяют в 3 см³ гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п.7.2. Промывают колонку 50 см³ гексана со скоростью 1 -2 капли в сек., элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 50 см³ смеси гсксан-этилацетат (9:1, по объему). Фракционно (по 5 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 см³ гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание дельтаметрина по п.9.5.

7.4. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-диол

Концентрирующий патрон промывают последовательно с помощью медицинского шприца 20 см³ смеси гексан-этил ацетат (9:1, по объему) и 10 см³ гексана со скоростью 5 см³/мин.

7.5. Подготока и кондиционирование хроматографической колонки

Засыпают готовую насадку (3% SE-30 на Хромосорбе W/HP) в стеклянную колонку и уплотняют под вакуумом. Колонку устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 270°С и скорости газа-носителя 2,5 см³/мин в течение 8-10 часов.

7.6. Приготовление градуировочных растворов

7.6.1.    Исходный раствор дельтаметрина для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,010 г дельтаметрина, растворяют в 40-50 см³ гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение 3-х месяцев.

7.6.2.    Раствор дельтаметрина №1 для градуировки (концентрация 1 мкг/см³).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1 см³ исходного раствора дельтаметрина с концентрацией 100 мкг/см³ (п.7.6.1.), разбавляют гексаном до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов №№ 2-5, а также проб масла с внесением при оценке полноты извлечения дельтаметрина из исследуемых образцов.

Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение месяца.

7.6.3. Рабочие растворы №№    2-5    деяьтаметрина для градуировки

(концентрация 0,01-0,1 мкг/см*).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 1.0, 2.0, 5.0 и 10.0 см³ градуировочного раствора № 1 дельтаметрина с концентрацией 1 мкг/см³ (п.7.6.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2-5 с концентрацией дельтаметрина 0.01,0.02,0.05 и 0.10 мкг/см³, соответственно. Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.7. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ*с) от концентрации дельтаметрина в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 2 мм³ каждого градуировочного раствора (п.7.6.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

8. Отбор и хранение проб Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТом 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4-6°С. В некоторых случаях масло получают из зерна кукурузы экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция дельтаметрина Образец масла массой 5 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ смеси ацетонитрил-вода (80:20, по объему) и помещают на встряхиватель на 30 мин. Эмульсию центрифугируют 5 мин при 6000 g и отделяют водно-ацетонитрильную фазу. Операцию экстракции масляной фазы повторяют, используя 50 см³ смеси ацетонитрил-вода (80:20, по объему), и отделяют водноацетонитрильную фазу центрифугированием. Измеряют объем объединенной водноацетонитрильной фазы, отбирают 2/5 объема этой фазы (эквивалентна 2 г образца) и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстракту, полученному по п.9.1, и помещенному в делительную воронку, прибавляют 15 см³ гексана и воронку интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После разделения фаз нижний водно-ацетонитрильный слой переносят в круглодонную колбу и упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (7-10 см³) при температуре 40°С. К водному остатку прибавляют 10 см³ ацетона, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 30 см³ гексана, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. После разделения фаз верхний гексановый слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажный фильтр в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 см³. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 см³ гексана. Объединенную гексановую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С.

9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п.9.2., растворяют в 3 см³ гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают трижды порциями по 3 см³ гексана, которые также наносят на колонку. Промывают колонку 40 см³ гексана со скоростью 1 -2 капли в сек., элюат отбрасывают. Дельтаметрин элюируют 40 см³ смеси гексан-этил ацетат (9:1, по объему) в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40°С.

9.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак - диол Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п.9.3., растворяют при помощи ультразвуковой ванны в 2 см³ гексана и раствор переносят в подготовленный концентрирующий патрон (п. 7.4.). Дельтаметрин элюируют 7 см³ гексана, отбрасывая 1 см³ и собирая последующие 6 см³ элюата в круглодонную колбу вместимостью 25 см³. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Остаток в колбе растворяют в 2 см³ гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание дельтаметрина по п. 9.5.

ft/

9.5. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф "Кристалл 2000 М" с электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану не выше 8,2х10*¹⁵ г/см³

Колонка хроматографическая, стеклянная, 1000x2 мм, неподвижная фаза - 3% SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12-0,15 мм)

Температура испарителя - 270°С, термостата колонки - 240°С, детектора -320°С Скорость потока газа-носителя (азот) - 50 см³/мин Объем вводимой пробы - 2 мм³

Ориентировочное время выхода дельтаметрина: 2,7 - 2,8 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,2 нг

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/см³, разбавляют гексаном.

10. Обработка результатов анализа

Содержание дельтаметрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Н| х Ах V

X =-------------,    где

Н<, х m

X - содержание дельтаметрина в пробе, мг/кг;

Hi - площадь пика образца, мВ*с;

Н<, - площадь пика стандарта, мВ*с;

А - концентрация стандартного раствора дельтаметрина, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; m - масса анализируемой части образца (г) / для масла - 2 г/.

11. Контроль погрешности измерений Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

угл