МУК 4.1.2009-05
Определение остаточных количеств цетилпиридиний хлорида в мясе кур и продуктах его переработки

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4 1. МЕТОДЫ КОН I РОЛЯ ХИМИЧЕСКИЕ ФА ГОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1 2009—4.1.2021—05

Издание официальное

Москва. 2009

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главный государственный санитарный

Дат

4.1.МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЦЕТИЛ1ШРИДИНИЙ ХЛОРИДА В МЯСЕ КУР И ПРОДУКТАХ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ

Методические указания МУК 4.1.2^-05

Настоящие методические указания устанавливают хроматографическую методику выполнения измерений массовой концентрации цетилпиридиний хлорида (ЦПХ) в мясе кур и продуктах его переработки и предназначены для проведения лабораторных исследований мяса кур и продуктов его переработки учреждениями Роспотребнадзора Российской Федерации, на предприятиях и в организациях, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и продуктов питания в соответствии с СанПин 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».

У

1. Краткая характеристика препарата

Общепринятое название: цетилпиридиний хлорид (ЦПХ).

Название по номенклатуре ИЮПАК:    N-цетилпиридиний    хлорид.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C21H38NCI, моногидрат. М.м. 339,5 Физические свойства: белый порошок, без запаха, температура плавления 77-83°С, pH 1%-ого водного раствора 6,0-7,0. Хорошо растворим в воде, спирте и хлороформе, нерастворим в эфире.

Торговая марка: технологическое вспомогательное средство «Секур» («Сесиге»).

Фирма-производитель: «Safe Food Corporation», США.

Форма выпуска:    водный раствор цетилпиридиний хлорида и

лропиленгликоля.

Область применения. Технологическое вспомогательное средство «Секур» предназначено для использования в пищевой промышленности для противомикробной обработки поверхности сырых тушек домашней птицы. Средство распыляется на сырые тушки домашней птицы перед погружением в охладитель в количестве не более 0,66 грамм ЦПХ на килограмм тушки. Гигиенические нормативы. Установленная предельно допустимое содержание остатков ЦПХ составляет 4,0 мг на кг птицы.

2. Методика определенна остаточных количеств ЦПХ в мясе кур и продуктах его переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода Методика основана на определении остаточных количеств ЦПХ в мясе кур и продуктах его переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектированием при длине волны 260 нм после водно-спиртовой экстракции ЦПХ из анализируемых проб и обезжиривании экстракта. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

S'

2.1.2. Метрологические характеристики метода

Таблица 1. _Метрологические    параметры_

Анализи руемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 10 предел обнару жения, мг/кг диапазон определяемых концентраций, мг/кг среднее значение определения, % стандарт. отклон., S доверит, интервал среднего результата, %,± Кожа и мясо кур 0,02 0,08-5 86,6 3,4 86,6±2,1

Таблица 2. Полнота определения цетилпиридиний хлорида в коже и мясе кур _ (5    повторностей    для    каждой    концентрации)_

Анализиру емый объект Добавлено ЦПХ, мг/кг Обнаружено ЦПХ, мг/кг Доверительный интервал, ± Полнота определения, % Кожа кур 5 4,63 0,05 92,6 2 1,67 0,04 83,5 0,8 0,70 0,01_ 87,5 _ 0,2 0,16 0,01 80,0 Среднее: 85,9 Мясо кур 5 4,83 0,04 96,6 2 1,69 0,04 84,5 0,8 0,66 0,01 82,5 _____од_ 0,17 0,02 85,0 Среднее: 87,2

2.2. Реактивы

Спирт этиловый ректификованный технический, ГОСТ 18300;

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-74;

Н-Гексан, х.ч., по ТУ 6-09-4521-84;

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709;

Кислота трифторуксусная >99,8%, х.ч., ГОСТ 18270-72;

Цетилпиридиний хлорид моногидрат, Zeeland Chemicals Inc., (США).

2.3. Приборы, аппаратура, посуда Жидкостной хроматограф высокого давления с подачей растворителя от 0,1 до 5,0 см³/мин., оборудованный спектрофотометрическим детектором с переменной длиной волны (Jasco) и системой для сбора и обработки хроматографических данных Мультифром 1.5х (Амперсенд, Россия).

6

Колонка для ВЭЖХ PLRP-S (Polymer Labs, США) с размером частиц 5 мкм; длина колонки • 25 см, внутренний диаметр колонки - 0,46 см;

Микрошприцы обемом 10 и 25 мкл для жидкостной хроматографии (Hamilton, США).

Спектрофотометр СФ-26 или подобный, позволяющий проводить измерения при длинах волн 200- 350 нм, с допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%;

Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С, ТУ 64-1-2451-78.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и погрешностью ±0,0001 г.

Ротационный испаритель ИР-1М или аналогичный, ТУ 25-11-917;

Дистиллятор

Блендер

Баллон с сжатым азотом квалификации ПНГ;

Воронка делительная на 250 см3 по ГОСТ 10054;

Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ

1770;

Колбы грушевидные по ГОСТ 25336 с конусом 14/23 вместимостью 100 см³;

Цилиндры по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см³;

Пипетки 4-1-2 или 5-1-2, 4-2-10 или 5-2-10, 4-2-25 или 5-2-25 по ГОСТ 29227.

Фильтры обеззольные ФО-ФС-15 «Красная лента» и «Синяя лента» по ГУ 2642-001-42624157-98;

Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных в МУК.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 6687.0. Для длительного хранения пробы мяса и кожи птицы замораживаются и хранятся при -18°С.

Перед анализом снятую кожу или отделенное мясо кур перемалывают на мясорубке и тщательно перемешивают в блендере.

2.5. Подготовка к определению 2.5 1 Приготовление стандартных растворов ЦПХ и калибровка хроматографа

0,025 г кристаллического ЦПХ количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см³, растворяют в 150 см³ 95%-ого этанола, доводят 95%-ым этанолом до метки и тщательно перемешивают. Получают основной стандартный раствор в 95%-ом этаноле с массовой долей ЦПХ 0,1 мг/см³;

Для построения градуировочной кривой методом последовательного разбавления подвижной фазой готовят рабочие стандартные растворы с содержанием ЦПХ 0,01; 0,002; 0,0005 и 0,0002 мг/см³. Хроматографируют по 10-20 мкл всех полученных растворов. Хроматографирование каждого раствора проводят трижды и строят график зависимости средних площадей пиков от концентрации ЦПХ в мкг/мл.

Г

Основной и рабочие стандартные растворы ЦПХ хранят в стеклянной посуде (мерной колбе) с притертой пробкой в прохладном месте (при температуре около 0°С). Сроки годности основного раствора полгода, рабочего - 2 недели.

2.5.2. Приготовление подвижной фазы и кондиционирование хроматографической колонки Навеску 1 г± 0,1 г трифторуксусной кислоты (взвешивание производят в закрытой посуде) помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см³, содержащую около 200 мл дистиллированной воды и доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Концентрация полученного раствора - 0,1%.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 700 см³ ацетонитрила, примерно 250 см³ 0,1%-ого раствора трифторуксусной кислоты, перемешивают и выдерживают до комнатной температуры. Затем доводят до метки 0,1%-ым раствором трифторуксусной кислоты, тщательно перемешивают. Раствор дегазируют.

Хроматографическую колонку кондиционируют до минимального дрейфа базовой линии.

2.5.3. Подготовка образца Навеску 10 г ± 0,01 измельченного и перемешанного в блендере образца кожи или мяса птицы помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ 95%-ого этанола, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 минут.

Экстракт фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента» в мерный цилиндр вместимостью 100 см³, замеряют полученный объем. Фильтрат количественно, порциями переносят в круглодонную колбу для упаривания, смывая остатки экстракта из цилиндра 95%-ым спиртом и затем спирт упаривают в вакууме на ротационном испарителе при температуре 40-45°С. К остатку добавляют 25 мл ацетонитрила и 20 мл гексана. После встряхивания одержимое колбы , количественно переносят в делительную воронку.. Колбу для упаривания ополаскивают 5 мл ацетонитрила и 5 мл гексана, перенося содержимое колбы в делительную воронку.Содержимое делительной воронки встряхивают, после разделения слоев отбрасывают верхний гексановый слой. Дважды повторяют обезжиривание ацетонитрильного слоя , встряхивая в делительной воронке с 10 мл гексана, насыщенного ацетонитрилом, каждый раз отбрасыая верхний гексановый слой. Если жидкости расслаиваются с трудом, в воронку добавляют немного сухого хлорида натрия и повторно встряхивают. Обезжиренный ацетонитрильный слой помещают в круглодонную колбу для упаривания и упаривают в вакууме на ротационном испарителе при температуре 40-45°С. Остаток отдувают в токе азота досуха на теплой водяной бане. Остаток растворяют в 3 см³ подвижной фазы, переносят в пикнометр вместимостью 5 см³, ополаскивают колбу для упаривания еще 1 см³ подвижной фазы и доводят объем до метки подвижной фазой, содержимое пикнометра перемешивают и фильтруют через бумажный

я

складчатый фильтр «синяя лента». При необходимости фильтруют через нейлоновый фильтр. При анализе используют аликвоты 0,005-0,020 см³.

Описание определения

2.5.1. Условия хроматографирования Хроматографическая колонка: PLRP-S (Polymer Labs), с размером пор 1ООА, размером частиц 5 мкм; параметры колонки 250x4,6 мм ID.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,1% раствор трифторуксусной кислоты 80:20 % об., скорость подачи подвижной фазы 1,0 мл/мин.

Детектирование: УФ, Х=260 нм. Чувствительность 0,01 е.а Объем вводимой пробы 5-20 мкл.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 2-200 нг ЦПХ. Абсолютное время удерживания ЦПХ - около 8,5 минут.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза, вычисляют среднюю площадь пика, соответствующего ЦПХ.

Альтернативные условия хроматографнтческого разделения: Колонка с силикагелем, химически связанным с цианпропилом (HanpHMep,Nucleosil-CN) с размером частиц 5 мкм; параметры колонки 250x4,6 мм ID. Подвижная фаза: метанол - водный 8 шМ раствор тетрабутиламмоний бромида (45:55 % об.)., скорость подачи подвижной фазы 1,0 мл/мин. Условия детектирования аналогичны. Время удерживания ЦПХ - около 6 минут.

2.6.2. Обработка результатов анализа

Концентрацию ЦПХ в анализируемом очищенном экстракте образца определяют либо методом градуировочного графика , либо сравнением площадей пиков ЦПХ стандартного раствора и раствора образца.

Для расчета используют стандартный раствор, площадь пика которого наиболее близка к площади пика ЦПХ в образце.

Х^жСсг* 1000^х5х х V/mxSct, где

X - содержание ЦПХ в пробе мяса или кожи птицы, мг/кг;

Сет - содержание ЦПХ в стандартном растворе, мг/мл;

S_x - площадь пика ЦПХ в анализируемом образце;

Л’_С1 - площадь пика стандарта;

V - объем очищенного экстракта (5мл), мл М - навеска образца, г.

3. Требования техники безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами и ♦лсктроприборами.

9