Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.1994-4.1.2002-05

Издание официальное

Москва, 2009

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека.

Главный государственна санитарный врач Росс и йской^цедеру^ии,

7

МУК 4.1.-Гг

Дата введения; / ^чГ.Оы 2/ :» «

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по измерению концентраций Тепралоксиднма в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации тепралоксиднма в диапазоне 0,1 - 1,0мг/м³.

Тепралоксидим - действующее вещество препарата АРАМО 50, КЭ (50 г/л); фирма производитель БАСФ (Германия)

(EZ) -(ЯБ^З-Гилрокси -5-(пергидропиран-4-ил)- 2-{1-((2Е)-3-хлораллилокси-имино)пропил}циклогек-2-ен-1-он (IUPAC).

С.тНлОЖ),

Мол. масса 341.8

Тепралоксидим - белое кристаллическое вещество, без запаха. Температура плавления 72.5-74.4°С. Давление паров при 20°С 0.011 мПа. Растворимость технического продукта в органических растворителях при 20°С (в мг/дм³): ацетон -700; гептан - 10. дихлорметан - 1190, метанол - 330; толуол - 820; этилацетат - 690.

Рис.1. График зависимости площади хроматографического пика от содержания тепралоксидима в растворе

S ^я -1442.0 + 449666 хС (г = 0.9989).

где S - площадь хроматографического пика тепралоксидима, отн. ед.; С - концентрация тепралоксидима в растворе, мкг/см³; г - коэффициент корреляции.

Жидкостной хроматограф “Perkin-Elmer" (США) с ультрафиолетовым детектором (рабочая длина волны 260 нм), колонка (25 см х 4 мм), содержащая Zorbax ODS (5 мкм), подвижная фаза: ацетонигрил - вода - муравьиная кислота (60:40:0.1. по объему), чувствительность 0,005 ед. оптической плотности на шкалу, объем вводимой пробы 20 мм³.

Растворимость в воде при 20°С (в г/дм³): 0,43 (pH 7); 7,25 (pH 9).. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log Р» 1,03 (pH 7); 3,5 (pH 2.5). Стабильность в водных растворах при 22°С: 6,6 дней (pH 4); 22,1 дней (pH 5); 33 дня (pH 7 и 9). Константа диссоциации рКа 4.58 (20°С).

Агрегатное состояние в воздухе -аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD$o) для крыс 5000 мг/кг: острая дермальная токсичность (LD50) для кроликов >2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC*o) > 5100 мг/дм¹ (4 часа).

Область применения препарата

Тепралоксидим - высокоэффективный системный гербицид, рекомендуется для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорняками в посевах сахарной свеклы и сои.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) тепралоксидима в воздухе рабочей зоны - 1.0 мг/м³.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей ± 25%, при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций тепралоксидима выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование тепралоксидима из воздуха осуществляют на бумажные фильтры ‘'синяя лента”, экстракцию с фильтров проводят ацетоном.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 2.0 нг.

Определению нс мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым Номер в Государственном детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin- реестре средств измерений

$0

Elmer. США)	15945-97
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Колбы мерные 2-50-2. 2-IOO-2 и 2-1000-2	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ 7328
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1.0. 2.0. 5,0, 10 см3	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10 см3 Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО “ОПТЭК”,	ГОСТ 1770
г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1	ТУ 25-11-1414-78
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления !"С. пределы измерения 0 - 55°С	ТУ 2I5-73E
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10. 500 и 1000 см3	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Тспралоксидим с содержанием основного вещества 99,8%

(фирма БАСФ. Германия)

Аиетон. о.с.ч.    ТУ-6-09-3513-86

Ацетонитрил для хроматографии, х.ч.    ТУ 6-09-4326-76

Вода билистиллированная. деионизованная или перегнанная ГОСТ 6709 над КМпО«

Кислота муравьиная, ч, 85%    ГОСТ 5848

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с    ТУ 64-1 -285! -78

Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные    ТУ 6-09-2678-77

Воронки конусные диаметром 30-37 мм    ГОСТ 25336

9/

Стекловата

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см,

внутренним диаметром 4.0 мм. содержащая Zorbax

ODS. зернением 5 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100 мм³

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1 007. требования электробезоиасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4 009. Содержание вредных веществ в воздухе нс должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0 004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеюших квалификацию нс ниже лаборанта-исследователя. с опытом работы на жидкостном хроматографе

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции:    очистка

органических растворителей, подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ. кондиционирование хроматографической колонки. приготовление растворов для градуировки, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров для отбора проб воздуха, отбор проб.

7 / Очистка органических растворителей 7.1 Л. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшим количеством КМО-i и прокаленным карбонатом калия.

7.1.2. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пснтоксидом фосфора нс менее I часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонвтом калия.

7.2. Подготовка подвижной (разы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 400 см³ билистиллированной или деионизированной воды. 1.0 см³ муравьиной кислоты, 600 см³ ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

S3

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

? 4 I. Исходный раствор тепралоксидима для градуировки (концентрация I мг/смⁱ)    В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,100 г тепралоксидима.

добавляют 50-70 см³ ацетонитрила, растворяют, доводят ацетонитрилом до метки, тшательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев

Растворы Ns 1-5 готовят объемным метолом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.4 2 Раствор N9 / тепралоксидима для градуировки (концентрация 10 икг/с.и*) В мерную колбу вместимостью 100 см³ помешают 1 см³ исходного градуировочного раствора тепралоксидима с концентрацией 1 мг/см³ (п 7 4.1.). разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7.4.3. Рабочие растворы №    2-6    тепралоксидима для градуировки

(концентрация 0.1 - 1.0 мкг/см*)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 1.0, 2.0, 3.0, 5.0 и 10 0 см' градуировочного раствора №1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.4.2.). доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №N® 2 - 6 с кониен грацией тепралоксидима 0.1. 0.2, 0.3.0.5 и 1.0 мкг/см³. соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 2-х недель.

7.5. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику. выражающую зависимость плошали пика (относительные единицы) от концентрации тепралоксидима в растворе (мкг/см’). устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-и растворам для градуировки NcNs 2 - 6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика действующего вещества.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площадей отличаются более.

чем на 6% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, се строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.5.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирма Perkin Elmer,

США)

Колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - муравьиная кислота (60:40:0,1, по объему)

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин

Рабочая длина волны: 260 нм

Чувствительность: 0,005 сд. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 мм³

Ориентировочное время выхода тепралоксидима: 6,8-7,1 мин.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор тепралоксидима с концентрацией 1.0 мкг/см³, разбавляют ацетонитрилом.

7.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Бумажные фильтры «синяя лента» последовательно промывают этанолом и ацетоном порциями 25-30 см³, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

7.7. Отбор проб

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 “ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны”. Воздух со скоростью 1 - 3 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр “синяя лента”, помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации тепралоксидима на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 1,0 дм³ воздуха Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре не выше +4°С - 14 дней.

<9<-

8. Выполнение измерений Экспонированные фильтры «синяя лента» переносят в химический стакан вместимостью 100 см³, заливают 10 см³ ацетона, выдерживают 10 минут, периодически встряхивая. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 см³, выдерживая по 10 минут.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 см³ ацетонитрила и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию тепралоксидима в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированных фильтров.

9. Обработка результатов анализа Массовую концентрацию тепралоксидима в пробе воздуха X, мг/м³, рассчитывают по формуле:

X^е С* W/V₂₀, где

С - концентрация тепралоксидима в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

Vj<> - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20° С) условиям, дм³.

V₂₀= 0,386 *Р* ut/(273+T),

где Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град С,

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст. и - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин, t - длительность отбора пробы, мин.

3£

Примечание: Идентификация и расчет концентрации тепрллоксидима в пробах могут быть проведены с помощью профамм обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа (X) принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений Xi и X* ( X • (X» ♦ Xj)/2). расхождение между которыми нс превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d). IX, - Х,|<d.

d ³ d «нм ♦ Х/100, мг/м\

где d -норматив оперативного контроля сходимости, мг/м³;

d о»и -норматив оперативного контроля сходимости. % (равен 10%).

Результат количественного анализа представляют в виде:

• результат анализа X (мг/м³), характеристика погрешности 5, % (равна 25%).

Р •* 0.95 или

Х± А мг/м³. Р * 0,95, где А - абсолютная погрешность

_А 6 X . ,

А -- .    мг/м

100

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12. Разработчики

Юдина Т В.. Федорова Н Е.. Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им Ф Ф. Эрисмана. г Мытищи Московской обл );