Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
Сборник методических указаний МУК 4.1.1994—4.1.2002—05
Издание официальное
Москва, 2009
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека.
Главный государственный санитарный врач Росс и йс коВ<#еЬ:ра^1 и,
МУК 4.1. ЫчЧ'УЬ ц Z 2 » ъс-ьлл.
Г Г. Онишенко _ 200>~ г.
Дата введения: * I fa
Методические указания по определению остаточных количеств бродифакума в воде методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации бродифакума в воде в диапазоне 0,0005 *0,01 мг/дм3.
Бродифакум - действующее вещество препарата Килрат, Г (0,05 г/кг); фирма производитель ООО "Северо-Кавказский Агрохим” (Россия) 3*{3*(4‘-Бромбифенил*4-ил )-1,2,3,4-тетрагидро-]-нафтил ]-4-гидроксикумарик (IUPAC)
C„H2JBrO,
Мол. масса 523.4
Бродифакум * белое порошкообразное веществу (технический продукт - цвет от белого до желтовато - белого или бежевого). Температура плавления 228-232°С. Давление паров при 20°С «< 0.001 мПа Растворимость в органических растворителях при 20°С (в мг/дм3): ацетон - 20; хлороформ - 3; бензол - <6. Растворимость в воде при 20°С (в мг/дм3): 3,8x103 (pH 5,2); 0,24 (pH 7.4); 10 (pH 9,3). Коэффициент
распределения м-октанол/вода К^- log Р = 8,5. Термически (50°С) и фотон и гн чески стабилен (30 дней на прямом солнечном свете). Является очень слабой кислотой.
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (U)jo) для самцов крыс, мышей - 0.4 мг/кг. кроликов - 0,2 мг/кг, самок морских свинок - 2.8 мг/кг, кошек * около 25 мг/кг, собак - 0,25-3,6 мг/кг; острая дермальная токсичность (I.D») для кроликов 0,25 -0,63 мг/кг, острая ингаляционная токсичность (LC*>) 5 мг/w3.
Область применения препарата
Бродифакум - родентишш акткоагулянгного типа, активен против всех видов грызунов. Выпускается в виде готовой брикетированной приманки.
1 игиснпчсскиЛ норматив не установлен.
1. Метрологические характеристики метода (Р = 0,95, п ■ 24)
Предел обнаружения: 0,0005 мг/дм3
Диапазон определяемых концентраций. 0,0005 • 0.01 мг/дм3
Среднее значение извлечения. 92,81%
Сшндартнос отклонение: 3.92%
Доверительный интервал среднего результата: ± 4,12%
Таблица
Полнота извлечения бродифахума из воды (6 повторностей для каждой концентрации. Р * 0,95)
|
Среда |
Внесено бродифахума, мг/дм3 |
Обнаружено бродифакума, мг/дм3 |
Полнота извлечения. % |
|
|
0,0005 |
4,6225*1 O'* ± 0,3644*10-4 |
92,45 |
|
Вода |
0.001 |
9,3717*1 O'4 + 0.7844 МО** |
93,72 |
|
1 |
0,002 |
1.8589* 10 3+0.1876Ч0’3 |
92,94 |
|
L |
0,01 |
9,2124*103 + 0,7845 *10'3 |
92,12 |
2. Метод измерений Метод основан на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ЮЖХ) с ультрафиолетовым детектором Для концентрирования и очистки проб волы использованы патроны для твердофазной экстракции Диапак-С16
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки
Г
3. Средства измерений, вспомогательные устройства.
реактивы и материалы
Номер Госреестра 15945-97
3.1. Средства измерении Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perk\n-Elmer. США)
Весы аналитические ВЛА-200
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и Пределом допустимой погрешности +/- 0.038 г Колбы мерные вместимостью 2*100-2. 2-1000-2 Меры массы
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5.0; 10 см3 Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 см3
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25. 50. 100.250 и 1000 см3
Допусхается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Бродифакум технический с содержанием основного вещества не менее 95% (фирмы ООО «Валмбрента Кемикалс»)
Вода деионизованная ГОСТ 6702
Кислота орто-фосфорная, хч. 85% ГОСТ 6552
Метиловый спирт (метанол), хч ГОСТ 6995
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
Бумажные фильтры «красная лента», обеээоленные или ТУ 6-09-2678-77 фильтры из хроматографической бумаги Ватман ЗММ
£
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм Груша резиновая Дефлегматор елочныЯ
Колбы плоскодонные вместимостью 100, 250,400-500 см Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм Набор для фильтрации растворителей через мембрану Насос водоструйный вакуумный Стаканы химические, вместимостью 100 и 250 см3
Стекловата Стеклянные палочки
Патроны для твердофазной экстракции Диапак-С16 (АО БиоХимМак. Россия)
Установка для перегонки растворителей Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см. внутренним диаметром 4,0 мм. содержащая Кромасил 100 С18. зернением 8 мкм
Шприц для овода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50- 100 мм''
Шприцы медицинские с разъемом Льюера вместимостью ГОСТ 22090 5 и 20 см3
Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019. а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно*допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исслсдователя. с опытом работы на жидкостном хроматографе
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка метанола перегонкой с дефлегматором (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ. кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка концентрирующих патронов Диапак-С16.
7.1. Приготовление 0,02 М раствора орто-фосфорной кислоте/
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помешают 1.36 см1 85%-ной орто-фосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.
7.2. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-С 16
Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца 2 см3 метанола со скоростью прохождения растворителя через патрон 1-2 капли в сек., затем 5 см’ деионизованной воды. Патрон готовят непосредственно перед использованием для концентрирования образца.
7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 30 см3 бидистиллированной или деионизированной воды. 0.5 см3 орто-фосфорной кислоты. 970 см-' метанола, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
8
7.4. Кондиционирование хроматографической колонки Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по л. 7.3) при скорости подачи растворителя 1.0 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
7.5. Приготовление градуировочных растворов
7 5.1 Исходный раствор бродифакума для градуировки {концентрация 100 мкг/см3) В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0.0100 г бродифакума. добавляют 50*70 см-> метанола, помешают на ультразвуковую баню на 1 мин для растворения, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.
Растворы № 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
7.5.2 Раствор N$ 1 бродифакума для градуировки (концентрация 5 мкг/см3)
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помешают 5 см? исходного градуировочного раствора бродифакума с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 7.5.1 ). разбавляют метанолом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
7.5.3. Рабочие растворы N? 2-5 бродифакума дяя градуировки {концентрация 0 025 - 0 5 икг'си3}
В 5 мерных колб вместимостью 100 см3 помешают по 0.5. 1.0. 2.0 и 10.0 см-’ градуировочного раствора с концентрацией 5 м к г/см3 (п. 7.5.2.), доводят до метки подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.3.), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы 2 - 5 с концентрацией бродифакума 0.025.0.05.0.1. и 0.5 мкг/см'. соответственно
Растворы хранятся в холодильнике в течение 2-х недель.
7.6. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику. выражающую зависимость плошали пика (отн. единицы) от концентрации бродифакума в растворе (мкг/см3). устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки 2 - 5
В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика действующего вещества.
3
Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х растворов для градуировки различной концентрации. Если значения плошадсй отличаются более, чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.
8. Отбор и хранение проб Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Обшие требования к отбору проб».
Пробы воды анализируют в день отбора, при необходимости хранят в холодильнике при температуре 4-6°С в течение 3-х недель. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18°С.
Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.
9. Выполнение определения
9.1. Концентрирование и очистка пробы
Образец отфильтрованной воды объемом 200 см3, помешенный в химический стакан вместимостью 250-300 см\ вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон Диапак-С16, подготовленный по п. 7.2. со скоростью пропускания раствора 1-2 капли в сек. После завершения концентрирования пробы патрон промывают последовательно тремя порциями по 5 см3 смеси вода-метанол в следующем объемном соотношении - 9:1. затем 7:3 и 1:1. далее 5 см' смеси метанол-0.02 М орто-фосфорная кислота (1:1. по объем)), элюаты отбрасывают Вещество элюируют с патрона 4 см3 подвижной фазы, приготовленной по п 7 3. собирая элюат в градуированную пробирку с пришлифованной пробкой, перемешивают и анализир>ют на содержание бродифакума по п. 9.2.
9.2. Условия хроматографирования
Колонка стальная, длиной 25 см. внутренним диаметром 4.0 мм. содержащая Кромасил 100 С 18. зернением 8 мкм Температура колонки: комнатная
Подвижная фаза: метанол-вода-орто-фосфорная кислота (97:3:0.05. по объему)
Скорость потока элюента: 1.0см3/мин
Рабочая длина волны- 280 нм
Чувствительность: 0.005 ед абсорбции на шкалу
Объем вводимой пробы: 20 мм3
/О
Ориентировочное время выхода бролифакума 4 8-5 0 мин Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор бролифакума с концентрацией 0 5 мкг/см3. разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п 7 1)
10. Обработка результатов анализа
Содержание бролифакума в пробе воды (X. мг/дм3) рассчитывают по формуле*
А • V X * , где
W
А - концентрация бролифакума. найденная по градуировочному графику, м кг/см'.
V • объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3,
W - объем анализируемого образца см3
П. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений»
12. Разработчики.
Юдина Т В Федорова Н Е . Волкова В Н (Федеральный научный центр гигиены им Ф Ф Эрисмана)
//
|
Рис.1. График зависимости площади хроматографического пика от содержания бродифакума в растворе |
|
S * 2096.2 + 712088 хС (г-0,9985).
где S - плошадь хроматографического пика бродифакума. отн. ед.; С - концентрация бродифакума в растворе. мхг/см*. г • коэффициент корреляции.
Жидкостной хроматограф *'Perkin-Elmer'* (США) с ультрафиолетовым детектором (рабочая длина волны 280 нм), колонка (25 см х 4 мм), содержащая Кромаснл 100 С18 (8 мкм). подвижная фаза: метанол • вода - орто-фосфорная кислота {97-3:0.05. по объему), чувствительность 0.005 ед. оптической плотности на шкалу, объем вводимой пробы 20 мм3.
/г
