Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств химических веществ в объектах окружающей среды, атмосферном воздухе, воздухе рабочей зоны и сельскохозяйственной продукции

Сборник методических указаний МУК 4.1.1960, 4.1.1961, 4.1.1963—4.1.1980—05

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств химических веществ в объектах окружающей среды, атмосферном воздухе, воздухе рабочей зоны и сельскохозяйственной продукции: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007.—196 с.

1.    Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.

А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Токсикология пестицидов и агрохимикатов» (Калинин В. А., Калинина Т. С., Рыбакова О. И., Калинин А. В.).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно - гигиеническому нормированию Минздрава России (протокол № 1 от 31 марта 2005 г.).

3.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 21 апреля 2005 г.

4.    Введены в действие с 1 июля 2005 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

О Роспотребнадзор, 2007 О Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007

МУК 4.1.1961—05

7.4.3. Рабочие растворы № 2—6 дифеноконазола для градуировки (концентрация 0,1—1,0 мкг/см³)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 и 10 см³ градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2— 6 с концентрацией дифеноконазола 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 и 1,0 мкг/см³, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более 10 дней.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации дифеноконазола в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки №№ 2—6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по и. 9.3. Осуществляют не менее 3 параллельньгх измерений.

7.6. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8—10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 4 г оксида алюминия в 15—20 см³ этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. После этого колонка готова к работе.

7.7. Проверка хроматографического поведения дифеноконазола на колонке с оксидом алюминия

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ раствора № 1 для градуировки (п. 7.4.2), упаривают досуха, добавляют 2 см³ этилацетата, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6. Промывают колонку 50 см³ этилацетата со скоростью 1— 2 капли в с. Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 5 см³ подвижной фазы (приготовленной по п. 7.2), анализируют на содержание дифеноконазола по п. 9.3.

Фракции, содержащие дифеноконазол, объединяют и вновь анализируют.

17

МУК 4.1.1961—05

Рассчитывают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: Проверку хроматографического поведения дифеноконазола следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбента и растворителя.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 17.1.3.03-77 «Правила выбора и оценки качества источников централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения».

Отобранные пробы воды анализируют в день отбора или хранят при 4 °С в течение 10-ти дней.

Непосредственно перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция

Образец анализируемой воды объемом 400 см³ помещают в делительную воронку вместимостью 1 ООО см³, добавляют 50 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³, фильтруя его через 2 см слой безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром «красная лента». Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды порциями хлористого метилена по 50 см³. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, подвергают очистке в соответствии с п. 9.2.

9.2. Очистка экстракта

Остаток, полученный по п. 9.1, с помощью 1,5—2 см³ этилацетата порциями переносят в колонку, подготовленную по п. 7.6, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Дифеноконазол элюируют с колонки 25 см³ этилацетата, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С почти досуха, вносят в колбу 3—4 см³ н-гексана, вновь упаривают. Операцию упаривания с н-гек-саном повторяют трижды.

МУК 4.1.1961—05

Сухой остаток в колбе растворяют в 2 см³ подвижной фазы (приготовленной по п. 7.10) и анализируют на содержание дифеноконазола по п. 9.3.

9.3. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США).

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С 18, зернением 8 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (80 : 20, по объему).

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин.

Рабочая длина волны: 230 нм.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мм³.

Ориентировочное время выхода дифеноконазола: 4,4—4,6 мин.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор дифеноконазола с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2.

10. Обработка результатов анализа

Содержание дифеноконазола в пробе рассчитывают по формуле:

X - содержание дифеноконазола в пробе, мг/дм³;

А - концентрация дифеноконазола, найденная по градуировочному графику, в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; V - объем анализируемого образца, см³.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12. Разработчики

Юдина Т. В., Федорова Н. Е., Волкова В. Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана).

19

МУК 4.1.1960—4.1.1961, 4.1.63—4.1.1980—05

Содержание

Измерение концентраций Пропетамфоса методом газожидкостной

хроматографии в воздухе рабочей зоны: МУК 4.1.1960—05.............................5

Определение остаточных количеств дифеноконазола в воде методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.1961—05...........11

Определение остаточных количеств лямбда-Цигалотрина

в корнеплодах моркови и луке-репке методом газожидкостной

хроматографии: МУК4.1.1963—05....................................................................20

Определение остаточных количеств 3-гидроксикарбофурана (основного метаболита карбофурана) в корнеплодах и зелёной массе сахарной свёклы, в семенах и масле рапса (горчицы) методом газожидкостной

хроматографии: МУК4.1.1964—05....................................................................29

Определение остаточных количеств флутриафола в плодах яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии:

МУК 4.1.1965—05................................................................................................39

Определение остаточных количеств протиоконазола по его основному метаболиту протиоконазол-дестио в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом газожидкостной хроматографии:

МУК 4.1.1966—05................................................................................................47

Определение остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.1967—05....................................................................57

Определение остаточных количеств имазетапира в воде, почве, семенах и масле сои методом газожидкостной хроматографии:

МУК 4.1.1968—05................................................................................................67

Определение остаточных количеств ацетохлора в ботве, корнеплодах сахарной свеклы и корнеплодах моркови методом газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.1969—05....................................................................77

Определение остаточных количеств фипронила и его метаболитов (МВ 46513, МВ 45950, МВ 46136) в зеленой массе пастбищных трав методом капиллярной газожидкостной хроматографии:

МУК 4.1.1970—05................................................................................................84

Определение остаточных количеств хлорпрофама в картофельных

чипсах методом газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.1971—05 ...........93

Определение остаточных количеств метрибузина в воде, почве, томатах и картофеле методом газожидкостной хроматографии:

МУК 4.1.1972—05..............................................................................................103

Определение остаточных количеств эпоксиконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.1973—05..................................................................113

Определение остаточных количеств пираклостробина в зерне, соломе, зеленой массе и зерновых колосовых культур методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.1974—05.........122

3

МУК 4.1.1960—05

Определение остаточных количеств метсульфурон-метила в семенах, масле и соломке льна методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.1975—05..................................................................135

Определение остаточных количеств клопиралида в семенах, масле и соломке льна, в семенах и масле рапса методом газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.1976—05..................................................................146

Определение остаточных количеств имидаклоприда в яблоках, капусте, ботве и корнеплодах свеклы, семенах кукурузы, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.1977—05..................................................................158

Определение остаточных количеств глифосата в зерне и масле сои, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК4.1.1978—05............................................169

Измерение концентраций протиоконазола в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.1979—05..............................................................................................181

Определение остаточных количеств протиоконазола и его основного метаболита протиоконазола-дестио в воде, протиоконазола и протиоконазола-дестио по метаболиту протиоконазолу-дестио в почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК4.1.1980—05............................................190

4

МУК 4.1.1961—05

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

21 апреля 2005 г.

Дата введения: 1 июля 2005 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дифеноконазола в воде методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.1.1961—05_

1. Вводная часть

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воде массовой концентрации дифеноконазола в диапазоне 0,0005—0,005 мг/дм³.

Цис, ////^//с-З-х лор-4-[4-мети л-2-(1Н-1,2,4-триазол-1 -ил-метил)-1,3-диоксолан-2-ил-] фенил 4-хлорфениловый эфир (IUPAC)

Эмпирическая формула: С^НпС^ИзОз.

Молекулярная масса: 406,3.

Кристаллическое вещество белого или бледно-бежевого цвета. Температура плавления 78,6 °С. Давление паров при 25 °С: 3,3 х 10"⁵ мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kowlog Р = 4,2. Раствори-

11

МУК 4.1.1961—05

мость в органических растворителях при 25 °С (г/дм^{1 2}): ацетон - 610; этанол - 330; толуол - 490; н-октанол - 95; н-гексан - 3,4. Растворимость в воде при 25 °С (г/дм²): 0,015.

Дифеноконазол стабилен на воздухе при температуре до 150 °С, а также в водных растворах.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - 1453 мг/кг, для мышей > 2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для кроликов > 2010 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (ЬК₅₀) для крыс > 3300 мг/м².

Область применения

Дифеноконазол - системный фунгицид, рекомендуемый к применению для борьбы с болезнями яблони, груши, свеклы и зерновых культур.

ПДК в воде водоемов - 0,001 мг/дм².

Метрологические характеристики метода (Р = 0,95, п = 24).

Предел обнаружения: 0,0005 мг/дм².

Диапазон определяемых концентраций: 0,0005—0,005 мг/дм².

Среднее значение извлечения: 86,63 %.

Стандартное отклонение: 5,37 %.

Доверительный интервал среднего результата: ± 8,21 %.

Таблица

Полнота извлечения дифеноконазола из воды (6 повторностей для каяадой концентрации, Р = 0,95)

Среда Внесено дифеноконазола, мг/дм3 Обнаружено дифеноконазола, мг/дм3 Полнота извлечения, % 0,0005 0,0004 + 0,0001 86,58 Вода 0,001 0,0025 0,0009 + 0,0002 0,0022 + 0,0004 86,28 86,34 0,005 0,0044 + 0,0008 87,26

МУК 4.1.1961—05

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания сахарной и кормовой свеклы и яблок.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer. США)

Весы аналитические ВЛА-200 Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г Колбы мерные, вместимостью 100 и 1000 см³ Пипетки градуированные 2-го класса точности, вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 см³

Пробирки градуированные, вместимостью 5 или 10 см³

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 250, 500 и 1 000 см³ Допускается использование или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Дифеноконазол с содержанием действующего вещества 99,4 % (ВНИИХСРЗ, Россия)

Алюминий оксид для хроматографии, по Брокману II, нейтральный (фирмы «Реанал», Венгрия)

Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над КМи0₄ н-Гексан, хч

Метилен хлористый (дихлорметан), хч Натрий серно-кислый, безводный, хч Этиловый эфир уксусной кислоты, ч

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

13

МУК 4.1.1961—05

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Бумажные фильтры «красная лента»,

обеззоленные    ТУ 6-09-2678—77

Воронки делительные, вместимостью 1000 см³ ГОСТ 25336 Воронки конусные диаметром 30—37 и 60 мм ГОСТ 25336 Груша резиновая    ГОСТ 9737

Колбы плоскодонные, вместимостью

200—250 см³    ГОСТ 9737

Колбы кругло до иные на шлифе, вместимостью 10, 100 и 250 см³

Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см, внутренним диаметром 8—10 мм Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм

Насос водоструйный    ГОСТ 10696

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169

фирмы Buchi, Швейцария    ТУ 25-11-917—74

Стаканы химические, вместимостью 100 см³ ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Набор для фильтрации растворителей через

мембрану

Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 8 мкм Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа, вместимостью 50—100 мм³

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

МУК 4.1.1961—05

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с оксидом алюминия.

7.7. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

15

МУК 4.1.1961—05

7.1.2. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5 %-м водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.1.3. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 200 см³ деионизованной воды, 800 см³ ацетонитрила, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1.    Исходный раствор дифеноконазола для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,01 г дифеноконазола, растворяют в 50—70 см³ ацетонитрила, доводят ацетонирилом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

Растворы № 1—6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2.    Раствор № 1 дифеноконазола для градуировки (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора дифеноконазола с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения дифеноконазола из исследуемых образцов.

1

Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой пробы воды дихлорме-таном и последующей очистки экстракта колоночной хроматографией на оксиде алюминия.

2

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.