Купить МУК 4.1.1921-04 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
1. Вводная часть
2. Методика определения остаточных количеств Пираклостробина в воде, почве, ягодах винограда, виноградном соке и яблоках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование
2.3. Подготовка к определению
2.4.Отборпроб
2.5. Описание определения
2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов
3. Требования техники безопасности
Дата введения | 11.08.2004 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.02.2017 |
Актуализация | 01.01.2021 |
11.08.2004 | Утвержден | Главный государственный санитарный врач Российской Федерации | |
---|---|---|---|
Разработан | Учебно-научный консультационный центр Агроэкология пестицидов и агрохимикатов | ||
Разработан | МСХА им К.А. Тимирязева | ||
Издан | Роспотребнадзор | 2005 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
Фсдера и.паи служба по манору в сфере защиты прав iioi рсбитслсн и благополучия человека
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств Пнраклостробина в воде, почве, ягодах винограда, виноградном соке и яблоках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1Л921—04
ББК 51.23+51.21 060
060 Определение остаточных количеств Пнраклостробнна в воде, почве, ягодах винограда, виноградном соке и яблоках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России. 2005.—19 с.
1. Разработка Московской сельскохозяйственной академией им. К. Л. Тимирязева. Учебно-научным ценiром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» (авторы В. А. Калинин. А. В. Довгилевич. Е. В. Довгилевич. II. В. Устименко).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты нрав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко.
3. Введены впервые.
ББК 51.23+51.21
€> Роспотребнадзор, 2005 €> Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005
МУК 4.1.1921—04
ацетон в соотношении 9 : 1 и также вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Пнраклостробин. объединяют их и рассчитывают полноту его смыва с колонки.
2.3.6. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-С 16 для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон нс должна превышать 5 мл/мин. При работе на патронах Диапак-С 16 используют очищенную воду.
Патрон Диапак-С 16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума. сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1 : 1 и 20 мл воды. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!
2.3.6.1. Проверка хроматографического поведения Пнраклостроби-на на концентрирующем патроне Диапак-С 16.
Из стандартного раствора Пираклостробнна в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/мл. отбирают 1 мл. помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре нс выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 10 с в ультразву ковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографиру ют. Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1 : 4 и смесь вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1 : 2 и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографиру ют. Концентратор обмывают тремя порциями по 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1 : 1 и также вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Пираклостро-бин. объединяют их и рассчитывают полноту его смыва с колонки.
11
2.3.7. Подготовка концентрирующего патрона Диопак-Лмин для очистки экстракта
Вес процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон нс должна превышать 5 мл/мин. При работе на патронах Диапак-Амин используют очищенную воду.
Патрон Диапак-Амин устанавливают на аллонж с отводом для вакуума. сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1 : 1 и 20 мл воды. Элюат отбрасывают.
Нельзя дот екать высыхания поверхности патрона!
2.3.7.1. Проверка хроматографического поведения Пнраклостроби-на на концентрирующем патроне Диапак-Амин.
Из стандартного раствора Пираклостробина в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/мл. отбирают 1 мл. помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре нс выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила. помещают на Юс в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл воды, тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. В исходный концентратор добавляют 1 мл ацетонитрила, стенки колбы тщательно обмывают, добавляют 9 мл воды, тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Процедуру повторяют еще раз. Определяют фракции. содержащие Пираклостробин. объединяют их и рассчитывают полноту его смыва с колонки.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколн-чсств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79). утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР.
12
МУК 4.1.1921—04
2.5. Описание определении
2.5.1. Вода
Пробу воды объемом 100 мл помещают в делительную вороню емкостью 250 мл. Затем в делительную вороню добавляют 30 мл хлористого метилена и интенсивно встряхивают ее 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой (хлористый метилен), содержащий Пирак-лостробнн. собирают в концентратор объемом 250 мл. пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Водный экстракт возвращают в делительную вороню и экстрагируют Пираклостробин еще двумя порциями хлористого метилена по 30 мл. интенсивно встряхивая делительную вороню 2 мин. Каждый раз после полного разделения фаз нижний слой (хлористый метилен), содержащий Пираклостробин. собирают в концентратор, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Выпаривают объединенный экстракт досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила и аликвоту объемом 20 мкл вводят в хроматограф.
2.5.2. Почва
2.5.2.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец почвы массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл. прибавляют 10 мл 0.1 %-ной соляной кислоты и выдерживают при комнатной температуре 10 мин. Затем к содержимому колбы прибавляют 30 мл ацетонитрила и экстрагируют Пираклостробин 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхиватслс. После экстракции пробу центрифугируют 5 мин при скорости 3 000 об./мнн и супернатант переносят через бумажный фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 250 мл с 10 г поваренной соли. Экстракцию повторяют еще 3 раза, используя по 30 мл ацетонитрила и экстрагируя по 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхиватслс. После центрифугирования и фильтрования экстракты объединяют в конической колбе с 10 г поваренной соли, перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Затем экстракт переносят в делительную вороню объемом 250 мл и выделившийся нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой пропускают в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30 °С.
К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 мл ацетона и тщательно обмывают его стенки, затем туда же добавляют 100 мл дистиллированной воды и 5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли. Полученную смесь переносят в делительную воронку
объемом 250 мл. концентратор обмывают 30 мл гексана, помещают в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают ее 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой сливают в коническу ю колбу объемом 250 мл, а верхний гексановый слой - в химический стакан объемом 100 мл. Затем водную фазу возвращают в делительную воронку и экстрагируют Пнраклостробин еще двумя порциями гексана объемом по 30 мл. Гексановые экстракты объединяют. переносят в делительную вороню, добавляют туда же 50 мл 5 %-ного водного раствора гидрокарбоната натрия и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой отбрасывают, а гексановый экстракт промывают еще раз 50 мл 5 %-ного водного раствора пирокарбоната натрия, интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. Гексановый экстракт переносят в концентратор объемом 250 мл, пропу ская через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 мл гексана, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30 °С.
2.5.2.2. Очистка на концентрирующем патроне Диапак-А.мин. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 10 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл воды, тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в чистый концентратор. В исходный концентратор добавляют еще раз 1 мл ацетонитрила, стенки колбы тщательно обмывают, добавляют 9 мл воды, тщательно перемешивают и полученный раствор вновь вносят на патрон. Элюаты объединяют и подвергают дальнейшей очистке.
2.5.2.3. Повторная очистка и очистка на патроне Днапак-С16. К объединенному элюату добавляют 100 мл дистиллированной воды. 5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли. Затем полу ченную смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл, концентратор обмывают 30 мл гексана, помещают смыв в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в коническу ю колбу объемом 250 мл. а верхний гексановый слой собирают в концентратор объемом 250 мл, пропу ская через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию Пираклостробина повторяют еще двумя порциями гексана по 30 мл. экстракты объединяют, осушитель обмывают 10 мл гексана, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температу ре нс выше 30 °С.
МУК 4.1.1921—04
Сухой остаток растворяют в I мл ацетонитрила, помещают на Юс в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл воды, тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат отбрасывают.
Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1 : 4 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают.
Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1 : 2 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают.
Пираклостробин элюируют 20 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
2.5.3. Яблоки
2.5.3.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец измельченных на терке яблок массой 10 г помещают в коническу ю колбу объемом 250 мл. прибавляют 30 мл ацетонитрила и экстрагируют 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхн-вателс. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли. Экстракцию повторяют еще 3 раза, используя по 30 мл ацетонитрила и экстрагируя по 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхиватслс. После фильтрования экстракты объединяют, перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре.
Затем экстракт переносят в делительную вороню объемом 250 мл и выделившийся нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой пропускают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30 °С.
К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 мл ацетона и тщательно обмывают его стенки, затем туда же добавляют 100 мл дистиллированной воды. 5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли. Полученную смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл. концентратор обмывают 30 мл гексана, который помещают в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают ее 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в коническую колбу объемом 250 мл, а верхний гексановый слой собирают в концентратор объемом 250 мл. протекая через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в делительную воронку и экстрагируют Пираклостробин еще дважды порциями гексана объемом по 30 мл. Водный слой отбрасывают, а гексановый экс-
тракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и объединяют в концентраторе объемом 250 мл. Осушитель обмывают 10 мл гексана, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30 °С.
К сухому остатку в концентраторе прибавляют 2 мл ацетона и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор прибавляют 50 мл гексана, тщательно перемешивают и переносят в сухую делительную воронку объемом 250 мл. Пираклостробин экстрагируют из ацетоново-гексановой смеси тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 мл. интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой пропускают в концентратор объемом 100 мл через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30 °С.
2.5.3.2. Очистка на патроне Диапак-С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, помещают на Юс в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Концентратор тщательно обмывают 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 9 : 1 и также вносят на патрон. Элюаты объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
2.5.4. Виноград (ягск)ы)
2.5.4.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец измельченных ягод винограда массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл. прибавляют 30 мл ацетонитрила и экстрагируют 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхн-вателе. Экстракт переносят через бумажный фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли. Экстракцию повторяют еще 3 раза, используя по 30 мл ацетонитрила и экстрагируя по 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин на механическом встряхиватслс. После фильтрования экстракты объединяют в конической колбе с 5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температу ре. Затем экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 мл и выделившийся нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой возвращают в делительную воронку, добавляют туда же 50 мл насыщенного раствора поваренной соли и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения <|>аз в делительной воронке нижний водный слой с выпавшими в осадок
МУК 4.1.1921—04
1. Вводная часть..........................................................................................................4
2. Методика определения остаточных количеств 11ираклостробина в воде,
почве, ягодах винограда, виноградном соке и яблоках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии....................................................5
2.1. Основные положения......................................................................................5
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование..........................................7
2.3. Подготовка к определению.............................................................................9
2.4. От<х>р проб.....................................................................................................12
2.5. Описание определения...................................................................................13
2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов...........................18
3. Требования техники безопасности......................................................................19
3
МУК 4.1.1921—04
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
11 августа 2004 г.
Дата введения: с момента утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств Пира км остроб н на в воде, почве, ягодах винограда, виноградном соке и яблоках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.1921—04
1. Вводная часть
Фирма производитель: БАСФ. Германия.
Торговое название: Кабрно. Кабрио Топ.
Название действующего вещества по ИСО: Пираклостробин. Название действующего вещества по ИЮПАК: mcth.t-N-{2-[ 1-(4-хлорфенил)-1 Н-пиразол-3-илоксимстнл]фснил }(И-мстокси)карбамат. Структу рная формула:
Эмпирическая формула: CiyH^ClNjO,
Молекулярная масса: 387.8
Химически чистый Пираклостробин представляет собой белый или светло-бежевый кристаллический порошок без запаха.
Температу ра плавления: 63.7—65.2 °С.
4
Давление паров 2.6 х 10'5 мПа (при 20 °С).
Коэффициент распределения октанол-вода К^ logP - 3,99 (22 °С).
Растворимость в воде - 1.9 мг/л (при 20 °С).
Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): ацетон - более 200. ацетонитрил - более 980. июпропанол - 40. метанол - 140.
Сохраняется в водной среде более 30 дней при pH 5.7 и температуре 25 °С: подвержен фотолизу в воде - ДТ*. составляет менее 2 ч. В почве период полураспада составляет 2—37 дней.
Краткая токсикологическая характеристика. Пираклостробин относится к малоопасным по острой оральной (СД*, для крыс - более 5 000 мг/кг). дермальной токсичности (СД*> для крыс - более 2 000 мг/кг) и умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (СК50 4 ч для крыс 4 000—7 000 мг/м3). Он нс вы бывает раздражения слизистых оболочек глаз и кожи и не обладает мутагенным, тератогенным. эмбриотоксичсскнм. канцерогенным действием.
В России гигиенические нормативы не установлены.
Область применения препарата. Пираклостробин - фунгицид из группы стробилуринов контактного и глубинного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и мучнистой настоящей росы, в т. ч. против рас возбудителя, устойчивых к Мсталаксилу и производным трназола.
Рекомендуется для борьбы с фитопатогеннымн грибами на зерновых. овощных и плодовых культурах с нормой расхода 50—250 г д.в./га.
2. Методика определения остаточных количеств Пнраклостробина в воде, почве, ягодах винограда, виноградном соке и яблоках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении Пнраклостробина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя нссмсшнвающимися фазами и на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак С. Диапак-А.мин и Диапак С 16). Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.
5
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Таблица 1
Метрологическая характеристика метода определения
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Таблица 2 |
Полнота определения Пнраклостробнна в воде, почве, ягодах винограда, виноградном соке и яблоках (5 повторностей для каждой копнен границ)
Среда |
Внесено, мг/кг (мг/л) |
Обнаружено, мг/кг (мг/л) |
Доверительный интервал, ± |
11олнота определения. % |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Вода |
0,005 |
0,0048 |
0,00027 |
96,0 |
0,010 |
0,0098 |
0,00018 |
98,0 | |
0,020 |
0,0197 |
0,00074 |
98,5 | |
0,050 |
0,0499 |
0,00082 |
99,8 | |
Среднее |
98,1 | |||
Почва |
0,01 |
0,0076 |
0,00026 |
76,0 |
0,02 |
0,0154 |
0,00052 |
77,0 | |
0,05 |
0,0394 |
0,00112 |
78,8 | |
0,10 |
0,0754 |
0,00112 |
75,4 | |
Среднее |
76,8 | |||
Яш;ц>1 винограда |
0,02 |
0,0149 |
0,00038 |
74,5 |
0,04 |
0,02% |
0,00116 |
74,0 | |
1,0 |
0,0764 |
0,00227 |
76,4 | |
2,0 |
0,1525 |
0,00650 |
76,3 | |
Среднее |
75,3 | |||
Виноградный сок |
0,02 |
0,0166 |
0,00044 |
83,0 |
Продолжение табл. 2 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.1.3. Избирательность метода |
В предлагаемых условиях метод специфичен в прису тствии пестицидов. применяемых при выращивании яблок и винограда.
2.2. Реактивы, растворы, матершиы и оборудование
2.2.1. Реактивы, материалы и растворы
ТУ 2633-004-11291058—94 ТУ 6-09-3534—87 ГОСТ 7602-72 ТУ 6-09-33—75 ГОСТ 20490-75 ГОСТ 4161-76 ГОСТ 4204-77 ГОСТ 857-88 ГОСТ 61-75 ТУ 6-09-2662—77 ГОСТ 2156-76 ГОСТ 4166-76 ГОСТ 4233-77 МРТУ 6-09-5759—69 ГОСТ 223000-76 ТУ 4215-002-05451931—94 ТУ 4215-0024)5451931—94 ТУ 4215-0024)5451931—94 ТУ 6-09-1678—86
Пираклостробин. аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9 %. фирма БАСФ Ацетон, осч. 9-5 Ацетонитрил
Вода бидистиллированная, деионизированная Гексан, ч
Калий марганцово-кислый, чда
Кальций хлористый, хч
Кислота серная концентрированная, ч
Кислота соляная, концентрированная
Кислота уксусная, ледяная
Метилен хлористый, хч
Натрия гидрокарбонат, хч
Натрий серно-кислый, безводный, хч
Натрий хлористый, хч
Фосфора пентоксид. ч
Этиловый эфир уксусной кислоты, чда
Концентрирующие пггтроны Диапак-Амин (0.6 г)
Концентрирующие патроны Днапак-С (0.6 г)
Концентрирующие патроны Диапак-С 16 (0.6 г)
Фильтры бумажные, «красная лента»
7
МУК 4.1.1921—04
Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм. с отверстиями пор 20 мкм. фирма Уотерс или аналогичные
Перед началом эксперимента проверяют чистоту ацетонитрила, ацетона, гексана и хлористого метилена. Для этого досуха выпаривают на ротационном вакуумном испарителе 200 мл растворителя, добавляют в концентратор 1 мл ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют при 270 нм. При недостаточной чистоте растворителей проводят их очистку .
Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцово-кислым калием, добавленным из расчета 1 г/л. и затем перегоняют.
Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия (Гордон А.. Форд Р. Спутник химика. М.. 1976. С. 438—439).
Ацетонитрил перегоняют.
Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор. пока раствор нс перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (Гордон А.. Форд Р. Спутник химика. М.. 1976. С. 441).
Хлористый метилен встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают водным раствором карбоната натрия, водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют над оксидом (V) фосфора (Гордон А.. Форд Р. Спутник химика. М.. 1976. С. 440).
2.2.2. Приборы и оборудование
Хроматограф жидкостный Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью нс ниже 0.005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм. внутренним диаметром 4.6 мм. Symmetry Shield RP18. зернение 5 мкм. фирма Уотерс Предколонка хроматографическая стальная.
Symmetry С 18. длиной 20 мм. внутренним диаметром 3,9 мм. зернение 5 мкм. фирма Уотерс Ванна ультразвуковая
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 34104—80Е
или аналогичные
8
МУК 4.1.1921—04
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г Воронки делительные на 250 и 500 мл Воронки конические стеклянные, диаметром 50—60 мм
Колбы конические плоскодонные на 500 и 1 000 мл
ГОСТ 10696-75 ГОСТ 20292-74 ТУ 25-11-917—74
ГОСТ 25366—80Е
Колбы мерные на 25. 50 и 100 мл Концентраторы грушевидные и круглодонные, объемом 50. 100 и 250 мл. КТУ-100-14/19 Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50—100 мкл Насос водоструйный Пипетки мерные на 1.0; 2.0; и 5.0 мл Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или аналогичный
Стаканы стеклянные на 100—500 мл Аллонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Днапак-Амин. Диапак-С. Диапак-С16.
2.3. Подготовка к определению
2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонки
для жидкостной хроматографии Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин 3—4 ч.
2.3.2. Приготовление стандартных растворов Взвешивают 100 мг Пираклостробина в мерной колбе объемом
100 мл. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный раствор с концентрацией Пираклостробина 1,0мг/мл). Затем 1,0 мл стандартного раствора с концентрацией 1.0 мг/мл отбирают пипеткой в мерную колбу объемом 100 мл и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор с концентрацией Пираклостробина 10.0 мкг/мл). Стандартные растворы можно хранить в холодильнике в течение трех месяцев. Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 5.0; 2.0; 1,0; 0,5; 0.2 и 0.1 мкг/мл. и используют их для хроматографического поведения и внесения в контрольные образцы.
9
2.3.3. Приготовление растворов для ж идкостной хроматографии Для приготовления подвижной фаты используют свсжспсрсгнан-ные ацетонитрил и очищенную воду.
Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 600 мл ацетонитрила. 300 мл очищенной воды и 1 мл ледяной уксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин в течение 5 мин. после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.
2.3.4. Построение ка пи бровочного графика Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из стандартных растворов, содержащих Пнраклостробнн с концентрациями 1.0; 0.5; 0.2 и 0.1 мкг/мл, измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации Пнраклостробина.
2.3.5. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-С для очистки экстракта Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон нс должна превышать 5 мл/мин.
Патрон Днапак-С устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом нс менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1 : 1 и 10 мл гексана. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!
2.3.5.1. Проверка хроматографического поведения Пнраклостробн-на на концентрирующем патроне Диапак-С.
Из стандартного раствора Пнраклостробина в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/мл. отбирают 1 мл. помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре нс выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, помещают на 10 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки ко н центр это ра. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полу ченный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Концентратор тщательно обмывают двумя порциями по 10 мл смеси гсксан-