Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

16 страниц

Купить МУК 4.1.1919-04 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические указания по определению массовой концентрации авермектиновых комплексов (аверсектина С и аверсектина С1) в молоке и плазме животных предназначены для проведения лабораторных исследований безопасности пищевой продукции учреждениями Госсанэпидслужбы Российской Федерации, а также для предприятий и учреждений, осуществляющих контроль качества пищевых продуктов в соответствии с Санитарно-эпидемиологическими правилами и нормативами "Гигиенические требования к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", СанПиН 2.3.2.1078-01 и МДУ ГН 2.3.2.708-98 и МДУ ГН 2.3.2.708-98 и аккредитованных в установленном порядке.

 Скачать PDF

Оглавление

1. Область применения

2. Общие положения

3. Физико-химические свойства, токсикологическая характеристика

4. Погрешиость измерений

5. Метод измерений

6. Средства измерения, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

7. Требования безопасности

8. Требования к квалификации оператора

9. Условия измерений

10. Подготовка к выполнению измерений

11. Выполнение измерений

12. Обработка результатов

13. Оформление результатов измерений

14. Контроль погрешности измерений

15. Нормы затрат времени на анализ

Приложение 1. Таблица расчета характеристик случайной и систематической погрешностей

Приложение 2. Результаты метрологической аттестации методики КХА

Приложение 3. Таблица расчета систематической погрешности

 
Дата введения05.08.2004
Добавлен в базу01.01.2019
Актуализация01.01.2021

Этот документ находится в:

Организации:

05.08.2004УтвержденРуководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач РФ
РазработанООО НБЦ Фармбиомед
ИзданРоспотребнадзор2005 г.
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение массовой концентрации авермектиновых комплексов (аверсектина С и аверсектина Ci) в молоке и плазме животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием

Методические указания МУК 4.1.1919—04

ББК 51.23 060

060 Определение массовой концентрации авермектиновых комплексов (аверсектина С и аверсектина Ci) в молоке и плазме животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием: Методические указания.— М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005.—16 с.

1.    Разработчики: к. м. и. В. Г. Тер-Симонян, к. х. и. С. В. Авчук, к. б. и. Е. Б. Кругляк, д. б. и. Т. С. Новик (ООО НБЦ «Фармбиомед», Москва).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормирова-нию Минздрава России.

3.    Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 5 августа 2004 г.

4.    Введены в первые.

ББК 51.23

Редакторы Аванесова Л. И., Максакова Е. И. Технический редактор Ломанова Е. В.

Формат 60x88/16


Печ. л. 1,0 Заказ 1

Подписано в печать 27.01.05 Тираж 3000 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18/20

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован Издательским отделом Федерального центра госсанэпиднадзора Минздрава РФ 113105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел. 952-50-89

О Роспотребнадзор, 2005 О Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005

2

МУК 4.1.1919—04

с временем удерживания 10—13 мин, соответствует сумме авермекти-нов А! и Вь

По результатам анализа образцов строят два калибровочных графика для производных А] + В] и А2 + В2 - на оси абсцисс откладывают количества авермектинов, нанесенных на колонку, а на оси ординат -площадь пиков, соответствующих авермектинам А! + В! и А2 + В2.

Примечание: содержание авермектинов Aj + и А2 + В2 для каждого градуировочного раствора рассчитывают исходя из их процентного содержания в каждом стандартном образце.

10.4. Подготовка проб к определению

10.4.1. Отбор проб

Пробы молока до начала анализа хранят в замороженном виде при минус 18—20 °С.

Кровь отбирают в пробирки с гепарином, центрифугируют. Плазму переносят в чистые пробирки, до начала анализа замораживают и хранят в холодильнике при минус 18—20 °С.

Допускается хранение проб молока и плазмы в течение 2 месяцев.

10.4.2. Экстракция и очистка образцов Плазма

1,0 см3 плазмы крови помещают в гомогенизатор, туда же добавляют 3 см3 смеси этиловый спирт-вода в соотношении 1:1. Обработку ведут при 4 500 об./мин в течение 10 мин. Из полученной эмульсии аверсектин экстрагируют этилацетатом 3 раза порциями по 8 мл. Экстракцию ведут в центрифужных пробирках при встряхивании с последующим центрифугированием. Этилацетатные экстракты (верхний слой) отбирают пипеткой и переносят в кругло до иную колбу вместимостью 100 мл. Этилацетат отгоняют в вакууме на роторном испарителе при температуре не выше 50 °С. Остаток растворяют в 4 см3 ацетонитрила (растворение ведут на ультразвуковой бане). Раствор переносят в широкую пробирку с притертой пробкой. Колбу, в которой производилась отгонка этилацетата, обмывают 2 см3 ацетонитрила и промывную фракцию также переносят в пробирку. Ацетонитрильный раствор 3—5 раз промывают 3—4 см3 гексана. Гексановые экстракты (верхний слой) отбирают пипеткой и отбрасывают, а ацетонитрильный раствор упаривают досуха. Сухой остаток используют для получения флуоресцирующих производных.

11

МУК 4.1.1919—04

Молоко

1,0 см3 молока помещают в гомогенизатор, туда же добавляют 5 см3 смеси ацетон-вода в соотношении 1 : 1 и обрабатывают в течение 5 мин при 4500 об./мин. Из полученной эмульсии аверсектин экстрагируют изооктаном. Экстракцию проводят дважды, беря на каждую экстракцию по 5 см3 изооктана. Экстракцию ведут при встряхивании и последующем центрифугировании. Экстракты объединяют и упаривают на роторном испарителе досуха. Остаток растворяют в 8 см3 ацетонитрила. Ацетонитрильный раствор трижды экстрагируют 5—10 см3 гексана. Гексановые экстракты отбрасывают. Ацетонитрильный раствор переносят в пробирку и упаривают в вакууме досуха. Сухой остаток используют для проведения дериватизации.

10.4.3. Проведение дериватизации и очистка образцов

Дериватизацию исследуемых проб и их очистку проводят так, как это описано для стандартных образцов (раздел 10.3.2 и 10.3.3).

Дериватизацию авермектинов исследуемого образца проводят одновременно с дериватизацией рабочих стандартов. Допускается хранение дериватизированных проб в холодильнике в течение 2 недель.

11. Выполнение измерений

Анализ включает не более 6 испытуемых образцов. Перед началом и в конце работы проводят анализ стандартного образца, чтобы убедиться в стабильности работы системы.

Объем наносимой на колонку пробы для всех объектов составляет 0,05 см3.

Условия проведения процесса хроматографирования описаны в разделе 10.3.4 для стандартного образца.

12. Обработка результатов

Для обработки результатов хроматографирования используется программа «Мультихром». На хроматограммах исследуемых образцов определяют площадь пиков производных по времени удерживания соответствующих пикам стандарта аверсектина.

По калибровочным графикам находят содержание авермектинов А! + В! и А2 + В2 в объеме инжектированной пробы испытуемого образца.

Содержание аверсектина в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

(РахВх + Са2В2 ) У2

УхУ,К


*АВ =


где


МУК 4.1.1919—04

Х^в - концентрация аверсектина в образце, нг/см3;

СА В - содержание авермектинов А] + В! в объеме инжектированной пробы образца, определяют по графику, нг;

Са2в2 — содержание авермектинов А2 + В2 в объеме инжектированной пробы образца, определяют по графику, нг;

Vj - объем пробы, нанесенной на колонку, см3 (0,05 см3),

V2 - объем пробы, подготовленной для ВЭЖХ, см3 (0,1 см3);

V3 - объем пробы молока или плазмы, взятой для экстракции, см3;

К - коэффициент, учитывающий степень извлечения аверсектина для данного объекта (получен при постановке модельных опытов с внесением известных количеств аверсектина).

Для молока К = 0,90.

Для плазмы К = 0,7.

13. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол № количественного химического анализа

1.    Дата проведения анализа_

2.    Место отбора пробы__

3.    Название лаборатории_

4.    Юридический адрес организации_

Результаты химического анализа

Шифр или № пробы

Опре деляемый компонент

Концентрация,

мг/м3

Погрешность измерения, %

Ответственный исполнитель: Научный руководитель:

14.    Контроль погрешности измерений

Значения полученных метрологических характеристик погрешности, норматива оперативного контроля точности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в прилож. 1, 2, 3 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С, которую определяют как среднеарифметическое результатов параллельных определений.

15.    Нормы затрат времени на анализ

Для проведения анализов 3 образцов требуется 6 ч.

13

Приложение 1

Таблица расчета характеристик случайной и систематической погрешностей

Характеристики

погрешностей

измерения

Концентрации, мг/л

Молоко

1

0,00045

0,00095

0,00182

0,00270

2

0,00052

0,00102

0,00185

0,00265

3

0,00048

0,00100

0,00192

0,00268

4

0,00044

0,00098

0,00203

0,00275

5

0,00046

0,00090

0,00192

0,00280

6

0,00052

0,00094

0,00180

0,00264

среднее

0,000478

0,000965

0,00189

0,00273

Среднеквадратичное

отклонение

0,0000035

0,0000044

0,000085

0,0000062

Характеристика

случайной

погрешности

0,0000037

0,0000047

0,00090

0,0000066

Систематическая

погрешность

0,0000031

0,0000062

0,000122

0,000174

Г раница

систематической

погрешности

0,0000034

0,0000068

0,000134

0,000191

Молоко

Концентрации, мг/л

0,000478

0,000965

0,00189

0,00273

Характеристика погрешности, мг/л

0,0000080

0,0001130

0,000221

0,000230

Коэффициенты

регрессии

а = 0,000005 • 0,072С + 0,0000051 в = 0,07237

Норматив воспроизводимости, мг/л

0,000103

0,000129

0,000250

0,000181

Коэффициенты

регрессии

а = 0,00001 • 0,045С + 0,00001 в = 0,04522

МУК 4.1.1919—04

Характеристики

погрешностей

измерения

Концентрации, мг/л

Плазма

1

0,00072

0,00144

0,00216

0,00360

2

0,00068

0,00140

0,00220

0,00315

3

0,00070

0,00145

0,00200

0,00364

4

0,00075

0,00140

0,00240

0,00335

5

0,00069

0,00148

0,00198

0,00400

6

0,00078

0,00150

0,00214

0,00330

среднее

0,00072

0,001445

0,00215

0,00351

Среднеквадратичное

отклонение

0,000039

0,000041

0,000153

0,000305

Характеристика

случайной

погрешности

0,000041

0,000044

0,000162

0,000324

Систематическая

погрешность

0,0000463

0,0000930

0,000138

0,000226

Г раница

систематической

погрешности

0,000051

0,000102

0,000152

0,000248

Плазма

Концентрации, мг/л

0,00072

0,001445

0,00215

0,00351

Характеристика погрешности, мг/л

0,000095

0,000133

0,000350

0,000678

Коэффициенты

регрессии

а = 0,03Q78 • 0,22С + 0,03078 в = 0,22

Норматив

воспроизводимости,

мг/л

0,000113

0,000120

0,000450

0,000898

Коэффициенты

регрессии

а = 0,0001 • 96 • 0,30С + 0,0001 • 96 в — 0,302

15

Приложение 2

Результаты метрологической аттестации методики КХА

Диапазон определяемых концентраций аверсектина С, мг/л

Наименование метрологической характеристики

характеристика погрешности, мг/л Р = 0,95

норматив оперативного контроля воспроизводимости, Д мг/л Р = 0,95; т-2

молоко 0,0004 до 0,0050

0,072 + 0,00005

0,045 +0,00010

Диапазон определяемых концентраций аверсектина С, мг/л

Наименование метрологической характеристики

характеристика погрешности, мг/л Р = 0,95

норматив оперативного контроля воспроизводимости, Д мг/л Р - 0,95; т-2

плазма 0,0005 до 0,010

0,22 + 0,0308

0,30+0,0002

Приложение 3 Таблица расчета систематической погрешности

Погрешности

%

реактивов

13

навески

0,08

объема раствора

0,24

пипетки

1,00

градуировочного графика

3,0

предварительных операций

5,40

химической реакции

0,00

сопутствующих веществ

0,00

систематическая погрешность

6,436

МУК 4.1.1919—04

Содержание

1.    Область применения...............................................................................................4

2.    Общие положения...................................................................................................4

3.    Физико-химические свойства, токсикологическая характеристика..................5

4.    Погрешность измерений........................................................................................6

5.    Метод измерений....................................................................................................6

6.    Средства измерения, вспомогательные устройства, материалы,

реактивы, растворы................................................................................................7

7.    Требования безопасности.......................................................................................8

8.    Требования к квалификации оператора................................................................9

9.    Условия измерений.................................................................................................9

10.    Подготовка к выполнению измерений................................................................9

11.    Выполнение измерений......................................................................................12

12.    Обработка результатов.......................................................................................12

13.    Оформление результатов измерений................................................................13

14.    Контроль погрешности измерений....................................................................13

15.    Нормы затрат времени на анализ......................................................................13

Приложение 1. Таблица расчета характеристик случайной и

систематической погрешностей....................................................14

Приложение 2. Результаты метрологической аттестации методики КХА..........16

Приложение 3. Таблица расчета систематической погрешности.........................16

3

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Г лавный государственный санитарный врач

Г. Г. Онищенко

5 августа 2004 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение массовой концентрации авермектиновых комплексов (аверсектина С и аверсектина Ci) в молоке и плазме животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием

Методические указания МУК 4.1.1919—04

1. Область применения

Методические указания по определению массовой концентрации авермектиновых комплексов (аверсектина С и аверсектина СД в молоке и плазме животных предназначены для проведения лабораторных исследований безопасности пищевой продукции учреждениями Госсанэпидслужбы Российской Федерации, а также для предприятий и учреждений, осуществляющих контроль качества пищевых продуктов в соответствии с Санитарно-эпидемиологическими правилами и нормативами «Гигиенические требования к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов», СанПиН 2.3.2.1078—01 и МДУ ГН 2.3.2.708—98 и аккредитованных в установленном порядке.

2. Общие положения

Аеерсектин С кАверсектин Cj - противопаразитарные препараты, представляющие собой комплексы близких в химическом отношении веществ - авермектинов, образуемых культурой Str. avermitilis. Отличия между ними заключаются в соотношении отдельных авермектиновых компонентов: так, основным компонентом аверсектина С является авермектин Вь тогда как основные компоненты аверсектина Q - авер-мектины А2 и В2.

4

МУК 4.1.1919—04

Аверсектины С и С\ являются действующими веществами ряда противопаразитарных лекарственных средств, используемых в ветеринарии (1 и 20 % аверсекта-2, аверсекта-3, мази аверсектиновой и др.).

Настоящие методические указания устанавливают хроматографическую методику количественного анализа молока и плазмы на содержание авермектинов после применения аверсектинсодержащих препаратов с нижним пределом измерения 0,001 мг/кг.

3. Физико-химические свойства, токсикологическая характеристика

Аверсектины С и Ci включают 4 гомологичных пары авермектинов: Аь А2; В]: В:. каждая из которых состоит из основного компонента, обозначаемого «а» и минорного - «в».

Авермектины представляют собой 16-ти членные макроцикличе-ские лактоны, содержащие по два остатка олеандрозы, соединенных гликозидной связью. Авермектиновые компоненты различаются между собой алкильными заместителями у 5-го и 26-го углеродных атомов и связью между 22 и 23 углеродными атомами (см. формулу).

Авермектины с индексом «в» (содержащие у 26-го углеродного атома радикал СН3) являются минорными соединениями, их содержание в сумме не превышает 10 % всего авермектинового комплекса.

Структурная формула

5

Эмпирическая формула и молекулярная масса авермектиновых компонентов

Труп-

па

Тип

авер-

мектина

Регистрационные номера по CAS (1994 г.)

Эмпири

ческая

формула

Молеку-

лярная

масса

Заместители

22X23

r5

В26

Ai

Aia

-65195-51-9

С49Н74О14

886

СН3

С2Н5

сн=сн

Aib

-65195-53-1

C48H72Oi4

872

СН3

СН3

сн=сн

Bi

Bia

-65195-55-33

872

Н

С2Н5

сн=сн

Bib

-65195-57-2

С47Н70О14

890

Н

СН3

сн=сн

А2

Ага

-65195-52-0

C48H760i5

904

СН3

с2н5

СН-СНОН

Агь

-65195-54-2

С48Н74О15

890

СН3

СН3

СН-СНОН

в2

в

-65195-56-4

C48H74Oi5

890

Н

С2Н5

СН-СНОН

В2ь

-65195-58-6

C47H72Oi5

876

Н

СН3

СН-СНОН

Все авермектины хорошо растворяются в низших спиртах: метиловом, этиловом и изопропиловом, бензиловом спирте, ацетоне, хлороформе, этилацетате, изооктане и практически не растворяются в петро-лейном эфире и воде.

В сухом виде авермектины являются мало устойчивыми соединениями.

Токсикологическая характеристика: все авермектины обладают нервно-паралитическим действием. По параметрам острой токсичности при введении в желудок аверсектин С и аверсектин Ci относятся к соединениям 2-го класса опасности. По острой кожной токсичности авер-сектины относятся к соединениям со слабо выраженной кожно-резорбтивной токсичностью.

Аверсектины С и Ci не обладают мутагенным, тератогенным и алергенным действием.

4. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью не превышающей 20 % при доверительной вероятности 0,95.

5. Метод измерений

Измерения массовой концентрации авермектинов основаны на использовании ВЭЖХ с применением флуоресцентного детектора на колонке с обращенной фазой после экстракции их органическими растворителями из молока и плазмы с последующей очисткой экстрактов и получения флуоресцирующих производных. Флуоресцирующие производные авермектинов получают путем обработки их уксусным ангидри-

МУК 4.1.1919—04

дом в присутствии N-метилимидазола на кипящей бане в течение часа. Указанные условия обеспечивают образование флуоресцирующих производных всех авермектинов, при этом в процессе реакции авермектины группы А! и В! дают производные, имеющие одинаковое строение, а так же как и авермектины группы А2 и В2. Хроматографическое разделение производных ведут на колонке с обращенной фазой, детекцию производных осуществляют по интенсивности флуоресценции при длинах волн возбуждения и эмиссии 365 и 470 нм соответственно.

При хроматографировании производные авермектинов элюируют из колонки двумя пиками: 1-й по времени удерживания пик соответствует сумме производных А2 и В22 + В2), второй - сумме производных группы А] и В] (Ai+Bi).

Примечание: в подобранных условиях хроматографирования производные минорных авермектинов имеют то же время удерживания, что и производные основных компонентов.

Таким образом, общее содержание авермектинового комплекса определяется суммой двух указанных пиков.

Минимальная определяемая концентрация производного, наносимая на колонку составляет 0,35 иг.

6. Средства измерения, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

6.1. Средства измерения Аналитический хроматограф, Waters или аналогичный с флуоресцентным детектором, инжектором с объемом дозирующей петли -0,050 мл, с компьютерной системой обработки хроматографических данных (или с интегратором)

Весы аналитические 2-го класса точности    ГОСТ 24104-88

Весы микроаналитические, точность взвешивания до 4-го десятичного знака, Chan (США) или аналогичные

Автоматические пипетки    ТУ 64-1-3329—81

Колбы мерные, вместимостью 100 мл    ГОСТ 1770-74

Цилиндры градуированные, вместимостью 100 мл ГОСТ 1770-74 Шприц Гамильтона (Швейцария)

6.2. Вспомогательные устройства

Центрифуга

Ультразвуковой диспергатор УЗДН-1М или аналогичный

7

МУК 4.1.1919—04

Миксер или гомогенизатор Холодильник

Колонка аналитическая Диасорб-130-С16Т 250 х 4, с размером частиц 6 мкм (фирма БиоХимМак, Россия) или аналогичная Гомогенизатор (Super-Mixer)

Патроны Диапак С1 (фирма БиоХимМак, Россия) Аппарат для упаривания - Vortex, Evaporater и др. Роторный испаритель с колбами Сушильный шкаф

Сцинтиляционные флаконы («Сигма», каталог 2001—2002 №....)

Баня водяная

ГОСТ 5964-84 ГОСТ 6995-67 ТУ ИРЕА 22—66

63. Реактивы

Спирт этиловый Спирт метиловый

Ацетонитрил, хроматографически чистый или аналогичный 1-метилимидазол импортный;

ГОСТ 1770-74 ТУ 6-09-33-75—78

Уксусный ангидрид, импортный;

Ацетон, чда Гексан, ч

Изооктан импортный

Стандартные образцы:

Аверсектин С:    СОП    (НБЦ «Фармбиомед») 20 %-ный раствор; содержа

ние аверсектина С и содержание авермектинов. Содержание авермектинов: (А^В^ и (А22) в % по отношению к общему содержанию авермектинов (указано в паспорте)

Аверсектин Ср СОП (НБЦ «Фармбиомед») 20 %-ный раствор; содержание аверсектина Сх и содержание авермектинов. Содержание авермектинов: (Ai+Bi) и (А22) в % по отношению к общему содержанию авермектинов (указано в паспорте)

7. Требования безопасности

7.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88

7.2.    При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76

МУК 4.1.1919—04

7.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

8. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы на жидкостном хроматографе.

9. Условия измерений

9.1.    Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 84—106 кПа и влажности воздуха не более 80 %.

9.2.    Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

10. Подготовка к выполнению измерений

10.1. Приготовление растворов

10.1.1.    Готовят основной раствор стандартного образца Аверсек-тин С в этиловом спирте, таким образом, чтобы в 100 см3 раствора содержалось 10 мкг аверсектина (раствор № 1). Раствор хранят (в герметичной упаковке) в холодильнике 2 недели.

Так же поступают при использовании стандартного образца Авер-сектин Ci.

Примечание: использование того или другого стандартного образца обусловлено видом субстанции, содержащейся в препарате.

10.1.2.    Раствор элюента готовят путем смешивания метилового спирта с водой в соотношении 98 : 2.

10.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

10.3. Установление градуировочной характеристики

10.3.1. Приготовление градуировочных растворов

Градуировочную характеристику, включающую взаимосвязь величины хроматографического сигнала и массу анализируемого вещества в хроматографируемом объекте, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием серии градуировочных растворов.

МУК 4.1.1919—04

Из основного раствора № 1 готовят следующие разведения: в стеклянные пробирки с 0,5 см3 этилового спирта микрошприцем вносят по 0,005; 0,01; 0,02; 0,03; 0,05 и 0,1 см3 основного раствора, тщательно промывая микрошприц.

10.3.2. Получение флуоресцирующих производных (дериватизация)

Приготовленные растворы упаривают досуха в вакуумном сушильном шкафу при температуре 55 °С.

В пробирки с сухим остатком вносят при помощи градуированной микропипетки или микрошприца 0,005 см3 1-метилимидазола и 0,01 смуксусного ангидрида. Пробирки плотно закрывают, тщательно перемешивают, обрабатывают ультразвуком в течение 30 с.

Необходимо следить, чтобы в образцы перед проведением дерива-тизации не попала влага.

Пробирки с образцами помещают в кипящую водяную баню и выдерживают в течение 1 ч. По истечении этого времени образцы извлекают из водяной бани, охлаждают и доводят объем каждого образца до 0,5 см3, добавляя 0,485 см3 ацетонитрила.

10.3.3. Проведение твердофазной экстракции

Патрон Диапак С1 промывают смесью, содержащей 5,0 см3 ацетонитрила и 0,2 см3 ледяной уксусной кислоты, после чего на патрон наносят дериватизированную пробу. Пробирку, содержащую пробу, промывают 5,0 см3 ацетонитрила, промывку также наносят на патрон, далее патрон промывают 5,0 см3 ацетонитрила. Ацетонитрильный раствор упаривают в вакууме при 30—40 °С. Остаток растворяют в 0,1 смацетонитрила. Подготовленную пробу используют для хроматографического анализа.

10.3.4. Проведение анализа ВЭЖХ и построение калибровочного графика

На колонку наносят по 0,05 см3 подготовленных дериватизирован-ных и очищенных стандартных образцов, содержащих 0,25; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 5 аверсектина.

Условия хроматографирования

Подвижная фаза - метиловый спирт-вода 98 : 2.

Скорость потока - 0,8 см3/мин. Давление - 120—160 атм.

Чувствительность детектора Range = 0,02.

Детектирование ведут по интенсивности флуоресценции при длинах волн возбуждения и эмиссии соответственно 365 и 470 нм.

На хроматограмме отмечают два пика: 1-й пик, с временем удерживания 8—10 мин соответствует сумме авермектинов А2 и В2; 2-й пик,