/ Российской Федерации Петый заместитель Министра tooxu^^ut РоссНйской Федерации ОНИЩЕНКО ¹ ХИУу (\ \    2004    г.

VgwiM.i.&fjj -04

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методические указания по определению остаточных количеств Пиримифос-мстила в ягодах и масле

облепихи.

1 Вводная часть.

Фирма производитель: ООО «Сингента».

Торговое название: Актеллик.

Название действующего вещества по ИСО: Пиримифос-метил.

Название по ИЮПАК:    0-2-диэтил амино-6-метил пиримидин-4-ил-О, О-диметил-

фосфоротиоат.

Эмпирическая формула: CnHajNjOjPS.

Структурная формула:

Молекулярная масса: 305,3.

Химически чистый Пиримифос-метил представляет собой жидкость соломенного цвета. Давление паров: 2 мПа при 20°С, 15 мПа при 30°С.

Растворимость в воде: 9,9 (pH 5,2), 8,6 (pH 7,3), 9,3 (pH 9,3) мг/л при 30°С. Хорошо растворим в большинстве органических растворителей: спиртах, кетонах, эфирах, хлорированных углеводородах.

logP = 4.2 (20°С, не ионизированная форма).

Константа диссоциации рКа * 4.30.

Стабильность в водной среде зависит от pH (ДТ^ - 2 - 117 дней), наиболее стоек при pH -7,0. Фотолитически не стабилен, ДТ₅о в воде при солнечном свете менее 1 часа.

s?

Краткая токсикологическая характеристика: Пнримифос-мстил относится к веществам малоопасным по острой оральной (ЛД50 крысы -1414 мг/кг) и дермальной (ЛД$о кролики - более 2000 мг/кг) токсичности и умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛДм крысы - 4 часа - более 5040 мг/м³). Оказывает слабое раздражающее действие на глаза и кожу (для кроликов).

Высоко токсичен для пчел и других полезных насекомых. СКзс для различных пород рыб: 0,64-1,4 мг/л.

В России установлены следующие гигиенические нормативы ДСД для человека - 0,01 мг/кг/сут.

ПДК в воде водоема    -    0,01 мг/дмЗ

ПДХ в почве    -    0,5 мг/кг

МДУ (мг/кг):

зерно хлебных злаков    -    0,1

томаты, огурцы - ОД;

ВМДУ (мг/кг):

горох, зерно хлебных злаков в момент обработки- 5,0

дыня, перец, баклажаны, свекла сахарная -    -    ОД

брюква, турнепс, капуста, сельдерей (зелень), персики, виноград, чай - 0,5

картофель, редис, сельдерей (корень), морковь - 0,05

цитрусовые (мякоть)    -0,1

рис, табак    -1,0

В ягодах и шампиньонах остаточные количества Пиримифос-метила не допускается.

Область применения препарата: Пиримифос-метил - инсектицид и акарицид контактного и фумигационного действия из группы эфиров тиофосфорной кислоты, ингибиторов ацетилхолинэстеразы, обладающий глубинным эффектом и непродолжительным защитным действием. Высокоэффективен против сосущих, минирующих и грызущих насекомых, а также подвижных стадий клещей.

Зарегистрирован в России под торговым названием Актеллик, к.э. (500 г/л), для применения на пшенице и рисе, горохе, сахарной свекле, картофеле, кормовых бобовых, овощных и бахчевых культурах открытого и защищенного грунта, на плантациях винограда, ягодных, лекарственных и декоративных культур с нормой расхода препарата от 0,3 - 5,0 л/га (до 3-х обработок за сезон).

2. Методика оппелелсния остаточных количеств ПиримжЬос-мстнло в я голах и масле облепихи.

?■!■ рендашле шшкат

2.1.1.    Принцип метода.

Методика основана на определении Пиримифос-метила методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его экстракции из растительных проб ацетонитрилом, переэкстракции в гексан и очистки на колонках с Флоризилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2.    Избирательность метода.

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании вьчче упомянутых культур.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1-3.

Таблица 1.

Метрологические параметры, р - 0,95; п ■ 20 Анализируемый объект Предел обнаружения, м~/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение S, % Доверительный интервал среднего результата %, + 1 2 3 4 5 6 ягоды 0,05 0,05-0,5 80,63 U3 2,24 масло С.Ю 0,10-1,0 75,1, 1,29 2,03

Таблица 2. Довсритслыи/Л интервал и полнота определения Пиримифос-мстила в ягодах и масле облепихи.

Среда Добавлено Пиртмифос-метила, мг/кг. Обнаружено Лиримифос-метила, мг/кг Доверительный интервал,+ Полнота определения, % ягоды 0,05 0,041 0,004 81,6 0,1 0,080 0,005 80,1 ОД 0,159 0,017 79,3 0,5 0,407 0,021 81,5 масло 0,1 0,076 0,008 76,2 од 0,146 0,006 72,9 0,4 0,304 0,026 76,1 1,0 0,751 0,036 75,1

2 2 JtaKTBPM, paerpopHJ дЪВИШй-У.еборудование

Пиримифос-метил, анали! нческий стандарт с содержанием д.в. 99,6%.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72. н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ .4233-77.

Натрий сернокислый, безродный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Флоризил для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирмы Флюка Эфир диэтиловый, х.ч., ГОСТ 6225-74.

2.2.2.При6оры. аппаратура, сосуда.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081 - 73 или аналогичный.

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.

Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, каг.№3120-0250, NALGENE. Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е или аналогичные Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 23336-82.

IfD

Воронки для фильтровангд, стеклянные, ГОС)' 8613-75.

Испаритель ротационный, вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917*74 или аналогичный.

Колбы конические плоскодонные на 250 мл, КПШ-250 ГОС!' 10394-72.

Колбы мерные на 10,25,50,100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колонки пластиковые для адсорбционной хроматографии длиной 15 см, диаметр 1,5 см. Колонка гатохроматогрэфпческая капиллярная кварцевая DB-1701 длиной 15 м, с внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 мл НШ29КГУ-100 (250), ГОСТ 10394-72. Микрошприц на 10 мкл, ТУ Е-2.833.0.24.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Пипетки мерные на 1,0,2,0 й 5,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Стаканы химические на 100 мл, ГОСТ 25336-82 Е.

Фильтры бумажные "Красная лента" ТУ 6-09-1678-86.

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с термоиенным детектором с пределом детектирования по азоту в азобензоле - 5х10¹³ или аналогичный.

Цилиндры мерные емкостью 25,50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

2.3. Подготовка к определению.

2.3.1.    Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и

стабилизируют в токе гелия при температуре на 20°С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8-10 часов.

2.3.2.    Приготовление стандартных расшит

Взвешивают 50 мг Пиримифос-метила в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/мл). Стандартный раствор № 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы Пиримифос-метила в ацетоне с концентрацией 0,25; 0,5; 1,0; 2,5 мкг/мл для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец.

Подобным образом готовят раствор Пиримифос-метила в гексане с концентрацией 1,0 мкг/мл для проверки хроматографического поведения аналитического стандарта на колонке с Флоризилом.

2.3.3. ^Подготовка колонки с Флоризилом.

W

В пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно чистую стекловату и заполняют колонку 5 г Флоризила 60/100 меш, уплотняя его путем вибрации колонки. На слой Флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. За день до определения Флоризил в колонке промывают 20 мл смеси гексашэфир - 1:1, а в день определения - 10 мл гексана.

2.3.4. Проверка хроматографического поведения ПиримиФос-метнла на колонке.

В подготовленную колонку вносят 1 мл стандартного раствора Пиримифос-метила в гексане с концентрацией 1,0 мкг/мл (раздел 2.3.2) и 4 мл гексана. Колонку промывают 5 мл гексана. Смыв отбрасывают. После этого пропускают через колонку 4-5 порций смеси гек-сан:эфир (1:1) по 5 мл каждая, собирая их в отдельные концентраторы. Собранные фракции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Фракции, содержащие Пиримифос-метнл, объединяют, выпаривают досуха. Сухой остаток вновь растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Рассчитывают содержание вещества г: элюате, определяют полноту смыва с колонки и необходимый для очистки объем элюата.

2.4. Отбор проб.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (№2051-79 от 21.08.79). Пробы ягод облепихи хранят в запаянных пластиковых пакетах в замороженном виде, пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или пластиковой таре в холодильнике.

2,5 Описание определен^!.

2.5.1 .Ягоды.

Навеску измельченного материала - 10 г помещают в пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще два раза, заливая пробу 30 мл ацетонитрила, и, встряхивая каждый раз по 15 минут. Экстракты отфильтровывают в тот же концентратор. Объединенный фильтрат упаривают до объема 5-10 мл при температуре ь*е выше 40°С.

Остаток разводят 100 мл 2% водного раствора хлористого натрия, обмывают стенки концентратора и перенос: г его содержимое в делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют в делительную вор', нку 30 мл гексана и экстрагируют Пкримифос-метил, встряхивая

воронку 1-2 минуты. После разделения слоев нижний водный аюй слинакп в стакан, а верхний гексановый слой соб! рают в чистый концентратор, пропуская через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еше два раза, используя каждый раз 30 мл гексана, и собирая гексан в тот- же концентратор. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 40*'С. Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл гексана н проводят очистку пробы на колонке с Флоризнлом.

2.5.1. ). Очистка на колонках с Флоризнлом.

В подготовленную (как указано в разделе 2.3.3) колонку с Флоризнлом переносят содержимое концентратора. Концентратор ополаскивают 5 мл гексана и пропускают гексан через колонку. Смыв отбрасывают. Пиримифос-метил элюируют 15 мл смеси гексан:эфнр -1:1. Экстракт собирают в чистый концентратор и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе. Сухой остаток разводят в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.5.2.    Масло.

Навеску масла 5 г помешают в стеклянный стакан емкостью 100 мл и разводят в 50 мл гексана. Содержимое лакана переносят в делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют в воронку 100 мл ацетонитрила, подогретого до температуры 40°С, и встряхивают 2 минуты. После разделен и фаз нижний ацетонитрильный слой сливают в коническую колбу, а верхний слой оставляют з делительной воронке. Добавляют з уда 50 мл подогретого ацетонитрила и встряхивают 2 минуты. Ацетонитрильный экстракт сливают в ту же колбу. Экстракцию повторяют еще \ п с тем же объемом ацетонитрила.

Объединенный ацг гонитрильный экстракт переносят в чистую делительную воронку, добавляют туда 30 мл рехана и промывают ацетонитрил, встряхивая воронку 1-2 минуты. После разделения фаз ни :иий ацетонитрильный слой отфильтровывают в концентратор через безводный сульфат н трия. Гексановую фракцию промывают 25 мл ацетонитрила, ацетонитрил сливают в тот те концентратор. Гексан отбрасывают. Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха.

Сухой остаток в концентраторе разводят в 5 мл гексана и переносят на колонку с Флоризнлом. Далее проверит очистку пробы на колонке, как указано в разделе 2.5.1.1. Очищенную пробу растворяю¹' в 2 мл ацетона и вводят в хроматогр \ф 1 мкл пробы.

&

2.6. Условия хромг»тогпа(1)нпования и обработка результатов.

2.6.1. Условия хроуатогра^Ьирования.

Хроматограф «Кристалл 2000 м» с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по азоту в азобензоле 510'¹³ г/см³ или аналогичный.

Колонка капиллярная кварцевая DB-1701; длиной 15 м с внутренним диаметром 0,32 мм; толщина пленки 0,25 мкм.

Режим работы.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура -160°С, выдержка 2 минуты; нагрев колонки по 15 градусов в минуту до температуры 230°С, выдержка 5 минут; нагрег колонки по 30 градусов в минуту до температуры 250°С.

Газовый режим - Split less.

Газ-носитель - гел <й (Г1). Тип регулятора расхода гелия - РРГ 11, линейная скорость -21 см/сск, давление на входе 28,66 кПа.

Газ 2 (Г2) - гелий (продувка испарителя), расход 1,0 мл/мин, сброс 1:30.

Газ 3 (ГЗ) - азот (поддув в детектор), расход во время анхшза - 35 мл/мин.

Продувка системы после анализа при температуре 250°С в течение 3 минут: продувка испарителя гелием —55 м.’*/мии; продувка детектора азотом - 55 мл/мин.

Абсолютное время удерж «вания Пиримифос-.метила - 6 мин 41 сск.

Температура испарителя - 260°С, детектора - 350°С.

Расход водорода - 15 мл/.» чш; расход воздуха - 180 мл/мин.

Объем вводимой пробы - ! мкл.

Линейность детектировав ля сохраняется в пределах 0,25-2,5 нг.

2 Д2 .Обработка р??ультатов анализов.

Содержание Пирн? мфос-метила в пробах ягод и масла облепихи рассчитывают методом абсолютной калгбровки по формуле:

Hr АО-/

Х=--Р

Н₀* ш-100

X - содержание Пиримифзс-метила в пробе, мг/кг; Hj - площадь пика образ’ л, мВ;

Hq - площадь пика станд: рта, мВ;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматстрафирования (мл); m - масса или объем анализируемого образца, г или мл.

Р - содержание Лиримифос-метила в аналитическом стандарте.

3.    Требования техники безопасности.

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4.    Разработчики.

Калинин В.А., профессор, канд. с-х. наук, Калинина Т.С., ст.н. сотр., канд. с-х. наук, Фролова Н.С., ст. инж.

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов». 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (095) 976-37-68, факс: (095) 976- 43-26.