УТВЗьРЖДАЮ

Главный Государственный санитарный врач пель Минисфа зл    жой Федерации

пг.онищенко

^[ятя R^fTPH?ijZ.’_c MrtyfrhTa утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методические указания по определению остаточных количеств Хлорлнрифоса в корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

1 .Вводная часть.

Фирма производитель: ДауАгроСаенсес.

Торговое название: Дурсбан.

Название действующего вещества по ИСО: Хлррпирифос.

Название по ИЮПАК: 0,0-диэтил 0-(3,5,6-трихлоро-2-пиридил) фосфоротиоат Структурная формула:

S

\\

Эмпирическая формула; С9Н] jCljNO^S.

Молекулярная масса: 350,6.

Химически чистый Хлорпирифос представляет собой белое кристаллическое вещество. Точка плавления: 42-43,5°С.

Давление паров: 2,7 мПа при 25°С.

Коэффициент перераспределения октанол/вода:    logP = 4,7 (20 °С).

30

Растворимость: в бензоле - 7900, ацетоне - 6500, хлороформе - 6300, днэтиловом эфире-51 00* ксилоле - 4000, этаноле - 630 в воде - 1,4 (при 25°С) мг/д.

Устой чин и нейтральной и кислой средах, относительно Gbicipo гидролизуется в щелочной среде. Период полураспада в почве: ДТдо - 60-120 дней.

Краткая токсикологическая характеристика: Хлорпирифос относится к веществам опасным по острой пероральной (ЛД50 крысы -135-1б3мг/кг), умеренно опасным по дермальной (ЛД50 крысы -2000 мг/кг) и опасным по ингаляционной токсичности (ЛДзо крысы - 4 часа - 0,2 мг/л). Следует предотвращать попадание препарата на открытые участки кожг; при попадании на кожу немедленно смыть водой с мылом н промыть кожу содовы t раствором.

ПДК в воздухе рабочей зоны - 0,3 мг/м³; в воде санитарно-бытового назначения - 0,002 мг/л; в почве 0,2 мг/кг. МДУ (в мг/кг) в сахарной свекле и кукурузе - 0,0006; в картофеле - 0,006; в яблоках - 0,01.

Токсичен для пчел и других полезных насекомых - LDs₀ для пчел - 0,114 мкг/особь. Умеренно спасен для диких животных, токсичен для птиц. CKjq для радужной форели - 0,003 ш/н.

Область применения: Хлорпирифос - инсектицид контактного в кишечного действия из группы ф’.'-сфороргашгческих соединений, обладающий длительным защитным эффектом. Он эффасглвно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, перепончатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки), а также почвообитающих вредителей в посевах зерновых и овощных культур, кукурузы, хлопчатника, на плантациях картофеля, технических и плодовых культур при норме расхода 0,5-1,5 кг/га.

Зарегистрирован в России под торговым названием Дурсбан, КЭ 480 г/л, для применения на сахарной свекле, картофеле, хмеле, многолетних бобовых и пастбищных травах, на яблоне и персике с нормой расхода препарата от 0,5-3,0 л/га (до 2-х обработок за сезон).

2. Методика определения остаточных количеств Хлорпирифоса в корнеплодах сахарной

свеклы.

2.1.    Основные положения.

2.1.1.    Принцип метода.

Методика основана на определении Хлорпирифоса методом газожидкостной громам oi рафии с использованием детектора по захвату электронов после его экстракции из растизадышх проб ацетонитрилом и очистки проб на колонках с Флориэилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2.    Избирательность метода.

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании выше упомянутых культур,

2.1.3. Метрологнческая характеристика метода.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1-2.

Таблица 1.

Метрологические параметры. р=0,95; n=20 “ I Анализируемый объект Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение S, % Доверитель- | 1 ный интер- I вал среднего | результата 1 Kti_ 1 2 3 4 5 6 | свекла 0,0006 0,0006-0,012 84,6 1,04 1,85 I

Таблица 2.

Доверительный интервал и полнота определения Хлорпирифоса в корнеплодах

сахарной свеклы.

Среда	Добавлено 1 Хлорпирифос! мг/кг	Обнаружено Хлорпирифос мг/кг	Доверительный интервал, +	Полнота определен*
свекла	0,012	0,010	0,001	82,6
	0,006	0,005	0,0002	86,8
	0,0012	0,001	0,00003	83,6
	0,0006	0,0005	0,00004	85,6

2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование.

2.2.1. Реактивы, материалы и растворы.

Хлорпирифос, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,8%. Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

3JU

Aucjoji_% ГОСТ 2603-79.

Ацетошпрнл, ЗУ 6-09-3534-87.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, ч,ТУ 2633-003-05807999-98,

Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ4J66-76.

Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Флоризил для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирмы Флюка.

2.2.2.Лрн боры, аппаратура, лосуда.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-] -1083 -73 или аналогичный.

Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, катТ&3120-0250,NALGENE, Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34I04-80E или аналогичные Воронки делительные на 250 и 500 мл, ГОСТ 23336-82.

Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные ва 10,25, 50 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические на шлифе на 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колонка газохроматографическая капиллярная кварцевая длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 мл НШ29 КГУ-100 (250), ГОСТ 10394-72. Микрошприц на 10 мхл, ТУ E-2.833.0_24.

Пипетки мерные на 1,0,2,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Испаритель ротационный, вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11 -917-74 или аналогичный.

Фильтры бумажные "Красная лента" ТУ 6-09-1678-86.

Хроматограф газовый с детектором по захвату электронов f⁶^!) "Кристалл 2000 М" с пределом детектирования по Линдану не выше 410'¹⁴ и капиллярной колонкой.

Цилиндры мерные емкостью 25 н 50 мл, ГОСТ 1770-74.

2.3. Подготовка к определению,

2.3.1- Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии.

Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия пра температуре ва 20°С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8-10 часов.

з&

2.3,2. Пршттжлсние стандартны* растворов.

Взвешивают 50 мг Хлорпирифоса в мерной колбе на 50 мл, растворяют нансежу в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор XL> 1, концентрация 1 мг/мл). Стандартный раствор К»1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы Хлорпв-рнфоса в ацетоне с концентрацией 0,3; 0,05; 0,03; 0,005; м кг/м л да построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец и стандартный раствор аз гексане с концентрацией 0,3 мкг/toi для проверки хроматографического поведения Хлорпирифоса на колонке с Флоризидом,

2.33. Подготовка колонки с Флоризидом,

В пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно чистую стекловату а заполняют колонку 5 г Флоршила 60/100 меш, уплотняя его путем вибрации колонки. На слой Флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. За день до определения Флорнзил в колонке промывают 20 мл ацетона, а в день определения - 10 мл гексана.

2.3.4. Проверка хроматографического поведения Хлорпйрифоса.на колонке с Флоризидом.

Б подготовдензгую колонку вносят 1 мл стандартного раствора Хлорпирифоса в гексане с концентрацией ОД мкг/мл (раздел 2.3.2) и 4 мл гексана. Смыв отбрасывают. После этого последовательно пропускают¹ через колонку 3-4 порции смеси гексан;ацетон (10:1) по 5 мл каждая, собирая их в отдельные концентраторы. Собранные фракции выпаривают досуха, сукой остаток растворяют в 1 мл гексана и вводят в хроматограф 1 шел пробы. Фракции, содержащие Хлорпнрифос, объединяют, выпаривают досуха, сухой остаток вновь растворяют в 1 мл гексана и вводят з хроматограф 1 мхл пробы. Рассчитывают содержание вещества в эдюате, определяют полноту смыва с колонки н необходимый для очистки объем элюата.

2.4. Отбор проб.

Отбор проб производится в соответствия с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (№ 2051-79 от 21.08.79). Пробы корнеплодов сахарной свеклы хранят в запаянных пластиковых пакетах в замороженном виде. Перед анализом свеклу измельчают на терке.

2.5.    Описание определения.

Навеску измельченного материала - 25 г помещают и пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 50 мл ацетоназрила. Встряхивают 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фшплр в коническую колбу емкостью 250 мл, на дно которой предварительно насыпают 10 г хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, заливая пробу 50 мл ацетонитрила и встряхивая каждый раз по J5 минут. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку емкостью 250 мл, нижний водный слой отбрасывают. Ацетонитрил сливают через слой безводного сульфата натрия в концентратор и выпаривают при температуре не выше 40°С, Остаток в концентраторе разводят в 5 мл гексана, тщательно обмывают концентратор и наносят пробу на колонку с Флорнзилом. Смыв отбрасывают,

Хлорпирнфос элюируют 15 мл смеси гексангацетон-10; 3. Смыв выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, разводят в 3 мл ацетона и уводят в хроматограф 1 шел пробы.

2.6.    Условия хроматографирования и обработка результатов,

2.6.1. Условия хроматографирования.

Хроматограф «Кристалл 2000 ш детектором по захвату электронов (^Ni) с пределом детектирования но Ландану не выше 4x10"¹⁴.

Колонка кадишйрная кварцевая HP-5 (Dosslinked 5% фенил сшгоксаяз, 95 % метал силоксана); длиной 30 м с внутренним диаметром 0,25 мм; толщина пленки 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная.

Начальная температура - 140°С, выдержка 2 минуты; нагрев колонки но 10 градусов в минуту до температуры 190°С, выдержка 10 минут; нагрев колонки по 30 градусов в минуту до температуры 2бО^сС выдержка 5 минут.

Газовый реясим - Splitless.

Газ-Еоскхеяь - гелий: (П), Тип регулятора расхода гелия - РРГ 11, линейная скорость “17 см/сек, давление ва входе 72,52 кПа.

Газ 2 (Г2) - гелий (продувка испарителя), расход 0,5 мд/мин, сброс 1;$С, начало сброса -10 секунд длительность сброса - 2 минута

Газ 3 (ГЗ) - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 45 мл/мин.

Продувка системы после анализа при температуре 260°С в течение 2 мкауп продувка испарителя гелием - 50 ш/мшг, продувка детектора азотом - 50 мл/ъшн.

Абсолютное время удерживания Хлорпирнф оса - 18минут 22 секунда.

Температура испарителя - 250°С, детектора - 320°С.

Объем вводимой пробы -) мкл.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,005 - 0,1 иг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концетрациямн Хлорпирифоса 0,1 ы кг/мл, разбавляют,

2.6,2. Обработка результатов анализов.

Содержание Хлорпирифоса в пробах сахарной свеклы рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

H_rA-V

X*- -*Р

Но-ш-100

X - содержание Хлорпирифоса в пробе, мг/кг;

Щ - площадь пика образца, мВ;

Но * площадь пика стандарта, мВ;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/мд;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл); ш - масса шш объем анализируемого образца, г или мд.

Р - содержание Хлорпирифоса в аналитическом стандарте.

3. Требования техники безопасности.

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Калинин В .А., профессор, канд. с-х. наук, Калинина Т.С., стш. сотр., канд. с-х, наук, Фролова Н.С., ст. инж.

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов», 127550, Москва, Тимирязевская ул. д. 53, стр. 1,

Телефон/факс: 976-37-68 / 976-43-26.

и