УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации-Первый заместитель
ения
Дата введения: с. I
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методические указания по определению остаточных количеств цинндон-этила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом газожидкостной хроматографии.Методические указания МУК 4.1. ап -04
Цинидон-этил не стабилен в водных растворах при pH 3-5, 7 и 9,
Период полураспада вещества в почве 4-5,4 для.
Краткая токсикологическая характеристика: Цинидон-этил относится к
малоопасным для человека и теплокровных животных веществам по оральной (ЛДзо для крыс >2000 мг/кг) дермальной токсичности (ЛДзо для крыс >2000 мг/кг) и к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс 5,3 мг/л).
В России гигиенические нормативы не установлены. Предложенная фирмой ДСД -0,01 мг/кг в сутки.
Цинидон-этил - гербицид системного действия из группы производных изоиндолдно-на, эффективно подавляет развитие двудольных сорняков в посевах зерновых колосовых культур.
Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Лотус Д, к. э., (37,8% эфира 2,4-Д и 4,5% Цинидон-этила), на зерновых культурах в качестве гербицида с нормой расхода 1,0 л препарата на гектар.
2. Методика определения остаточных количеств Цинидон-этила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом газожидкостной хроматографии.
2.1. Основные положения.
2.1.1. Принцип метода.
Методика основана на определении Цинидон-этила с помощью газожидкостной хроматографии при использовании детектора с постоянной скоростью рекомбинации ионов на неподвижной фазе OV-1 после экстракции органическим растворителем и очистки экстракта перераспределением действующего вещества между несмешивающимися фазами. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода,
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании зерновых культур.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода.
Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 - 2.
Таблица К
|
f Метрологическая характеристика метода.
Метрологические параметры, р*0,95, п^20 |
|
Анализируем ый объект |
Предел
обнаружения,
мг/кг |
диапазон определяемых кон* центраций М1’/КГ |
среднее значе-ние определения, % |
стандарта ое отклонение, S, % |
довери
тельный
интервал
среднего
результата
%,+ |
|
вода |
0,001 |
0,001-0,1 |
93,9 |
1.14 |
2,25 |
|
почва |
0,01 |
0,01-0,1 |
76,6 |
1,40 |
2,24 |
|
зерно |
0,01 |
0,01-0,1 |
84,9 |
0,96 |
1,70 |
|
солома |
0,05 |
0,05-0,5 |
76,9 |
1,61 |
2,58 |
|
|
Таблица 2 |
|
Доверительный интервал и полнота определения Цинидон-этила в воде, почве, зерне и соломе колосовых культур. |
|
среда |
Добавлено Цшш дон-этила, мг/кг |
обнаружено Цинндон-этила, мг/кг |
доверительный интервал, + |
полнота
определения,
% |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
вода |
0,01 |
0,00915 |
0,004 |
91,5 |
|
|
0,005 |
0,0046 |
0,003 |
92,7 |
|
|
0,002 |
0,00193 ^ |
0,0008 |
96.5 |
|
|
0.C0I |
0,00095 |
0,00085 |
95,0 |
|
почва |
0,1 |
0,0759 |
0,002 |
75,9 |
|
|
0,05 |
0,387 |
0,003 |
77,4 |
|
|
0,02 |
0,0152 |
0,0009 |
76,0 |
|
|
о,г: |
0,0077 |
0,00097 |
77,1 |
|
зерно |
0,1 |
0,085 |
0,003 |
85,1 |
|
|
o.r.f. |
0,042 |
0,002 |
83,6 |
|
|
0/2 |
0,017 |
6.0009 |
85,0 |
|
|
О/4! |
0,009 |
Г 0,001
J_ |
86,0 |
|
|
Продолжение таблицы 2. |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
солома |
0,5 |
0,367 |
0,011 |
73,3 |
|
|
0,25 |
0,189 |
0,015 |
75,6 |
|
|
0,1 |
0,0788 |
0,0069 |
78,8 |
|
|
0,05 |
0,04 |
0,0043 |
80,0 |
|
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование.
2.2.1. Реактивы .материалы и растворы.
Цинидон-этил, аналитический стандарт фирмы БАСФ с содержанием д.в. 99,6%.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Адетон, ГОСТ 2603-79.
Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
Насадка для колонки: OV-1 3% на йнертоне Супер, размер частиц 0,12-0,16 мм, Хемапол, Чехия.
Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ .4233-77.
Метилен хлористый, ГОСТ 19433-88.
Толуол, ГОСТ 5789-78.
Кислота ортофосфорная(85%), ГОСТ 6552-80.
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12 НдО, ГОСТ
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12 НгО 0,1 М раствор с pH =5 - фосфатный буфер. Фосфатный буфер готовят в мерной колбе емкостью 1 л, растворяя в дистиллированной воде 35,8 г натрия фосфорнокислого двузвмещенного 12 Н^О. В полученный раствор по каплям добавляют ортофосфорную кислоту (85%) до рН=5.
2.2.2. Приборы, аппаратура, посуда.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081 - 73 или аналогичный.
Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е или аналогичные Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.
Воронки делительные на 250 и 500 мл, ГОСТ 10054-75.
Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63.
Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 мл, КПШ-100, КГШ1-250, ГОСТ 10394-72.
Колбы мерные на 10,25,50,100 и 1000 мл, ГОСТ 1770-74.
Концентраторы грушевидные НШ29 КГУ-100 (250) ГОСТ 10394-72.
Микрошприц на 10 шел, ТУ 2.833.106.
Пипетки мерные на 1,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292-74. рН-метр-милливольтметр - рН-метр-673 м или аналогичный.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Стаканы стеклянные химические на 100 мл, ГОСТ 6236-72.
Стеклянные палочки.
Фильтры бумажные "Красная лента" ТУ 6-09-1678-86.
Хроматограф газовый с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов бЭ№’Цвет-600ис пределом детектирования по Линдану не выше 4 1G'14 или другой аналогичного типа. Центрифуга, МРТУ 42-219 - 69 или аналогичная.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 10 и 100мл.
2.3. Подготовка к определению.
2.3.1. Подготовка и кондиг.чонирование колонки для газожидкос гной хроматографии.
Готовую насадку (3% OV-1 на Инертоне Супер) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, голонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируйегг в токе азота при температуре 280° С в течение 8-10 часов.
2.3.2. Приготовление стандартных растворов.
Взвешивают 50 мг Цинидов-этнла в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/мл).
Стандартный раствор № 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев. Методом последов? 1ельного разбавления готовят стандартные растворы Цннидон-этила в ацетоне с кондентг ?дией 0,5; 0,25 0,10 и 0,05 мкг/мл длл построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец.
2.3.3. Построение калибровочного графика.
Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно по 3 мкл каждого из получении четырех растворов (для каждой концентрации делают не менее 3-х вводов), измеряют высот/ или площадь пиков, рассчитывают среднее значение высоты пика или его площади для каж. ой концентрации и строят график зависимости высоты пика или площади от концентрации Тннидон-этила в мкг/мл.
Л*<2
2.4. Отбор проб.
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции* пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микро ко л нчеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна и соломы подсушгвают до стандартной влажности н хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образны могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 0,1 мм. Зерно и солому измельчают на лабораторной мельнице.
2.5. Описание определения.
2.5 Л.Вода.
Образец воды объегом 200 мл помещают в делительную воронку на 500 мл и экстрагируют метилен хлоридом порцией 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 минут. После полк гго разделения слоев нижний метилен хлоридный слой собирают в концентратор, пропуская <:?рез слой безводного сульфата натрия. Водный слой оставляют в делительной воронке. Экс: ^акцию повторяют еще два раза, используя 30 мл метилен хлорида каждый раз и пропуская е: э через слой безводного сульфата натрия. Объединенный метилен хлоридный экстракт выпе швают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С досуха, остаток раств ряют в 4 мл ацетона н вводят в хроматограф 3 шел пробы.
2.5.2. Почва.
Образец воздушно ?ухой почвы массой 20 г заливают 25 мл фосфатного буфера, добавляют 75 мл толуола встряхивают смесь на аппарате для встряхивания 1,5 часа. Затем пробу центрифугируют в г чтение 2 минут при 5000 обУмин. Экстракт осторожно сливают по стеклянной палочке в дед тельную воронку емкостью 250 мл. После разделения водного и толуольного слоев, нижн Ti водный слой сливают в стакан и отбрасывают. Толуольный экстракт собирают в конц :.тратор, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на рот "ионном вакуумном испарителе при температуре 40° С. Сухой остаток в концентраторе j.вводят в 50 мл ацетонитрила и переносят в чистую делительную воронку. Ацетонитрил пр >1ывают 10 мл гексана, встряхивая воронку 1-2 минуты . Нижний слой ацетонитрила сливг от в концентратор и упаривают на ротационном вакуумном испарителе до объема 10 мл. В концентратор добавляют 100 мл дистиллированной воды. Содержимое в концент горе перемешивают и переносят в делительную воронку. Концентратор ополаскива: 30 мл гексана. Гексан также переносят в делительную воронку и
J*3
встряхивают ее в течение I -2 минут. После разделения слоев нижний водный слой сливают в стакан, а гексан собираю ', в концентратор, пропуская через безводный сульфат натрия. Водный слой возвращают з делительную воронку. Экстракцию повторяют еще 2 раза, исш-льзуя каждый раз по 30 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С.
Внимание! В случае образования эмульсии в гексане, гексановые фракции объединяют в стакане, переносят в делительную воронку, добавляют туда 0,1 г хлористого натрия и встряхивают содержимое воронки. Отделившуюся воду отбрасывают, а гексан собирают в концентратор, пропустив с го через безводный сульфат натрия, и выпаривают досуха. Сухой остаток разводят в 4 мл ацетона и вводят в хроматограф 3 мкл пробы.
Внимание] Анализ проводится в течение одного дня, так как Цинидон-этил разрушается в экстрактах почвенных проб даже при хранении в холодильнике.
2.5.3. Зерно.
Навеску размолотсго зерна массой 20 г заливают 75 мл ацетонитрила и гомогенизируют в течение 2 минут. Экстракт отфильтровывают в делительную воронку емкостью 250 мд через б; ггажный фильтр. Пробу гомогенизируют еще 2 минуты с 50 мл ацетонитрила и отфнльтро: ывают вторую порцию ацетонитрильного экстракта в делительную воронку. Затем навеску в голбе промывают 25 мл ацетонитрила и отфильтровывают его в ту же делительную воронку. Объединенный экстракт очищают 20 мл гексана, встряхивая воронку в течение 1-2 к -’цуг. Нижний слой ацетонитрила сливают в стакан, а гексан отбрасывают. Ацегонитри; возвращают в воронку я промывают его еще раз 20 мл гексана. После этого ацетонитрил ■■ обирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия, и выпаривают досу :х
Сухой остаток в :энцентраторе разводят в 10 мл ацетонитрила. Добавляют в концентратор 100 мл охгхжденной дистиллированной воды (Держать в холодильнике!), перемешивают и отфиль уювывают содержимое концентратора в чистую делительную воронку через бумажный г.тльтр. Затем в воронку приливают 3G мл гексана и встряхивают ее содержимое в течение 1 минут. После разделения фаз нижний водный слой сливают в стакан, а гексан собирают' в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Водный слой возвращают : делительную воронку и повторяют экстракцию еще 2 раза, ист-льзуя каждый раз по 30 - л гексана. Объединенные гексанозие экстракты выпаривают на ротационном вакуумном и; парителе досуха. Сухой остаток разводят в 4 мл ацетона и вводят в хроматограф 3 мкл пробы.
2.5.4. Солома.
Навеску измельчен*: эй соломы 5 г смачивают 10 мл дистиллированной воды, запивают 100 мл ацетонитрила и гомогенизируют в течение 2 минут. Ацетонитрил сливают в концентратор через бумажный фильтр. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 75 мл ацетонитргла и встряхивая в течение 2 минут. Объединенный экстракт упаривают досуха, затем разводят в 10 мл ацетонитрила и далее проводят анализ по схеме, описанной в п.2.5.3. Перед вводом в хроматограф сухой остаток в концентраторе разводят в 5 мл ацетона и вводят 3 мкл пробы.
2.6.1. Условия хроматографирования.
Хроматограф "Цвет 600" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов с пределом детектирования го Линдану не выше 4*10"^ г/см^.
Рабочая шкала электрометр а 32хЮ10. Скорость движения ленты самописца 0,5 см/мин. Колонка стеклянная, спиральная, длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм. Носитель Ияертон Супер, размер частиц 0,12- ',16 мм, неподвижная фаза 3% OV-1.
Температура испарителя * '.90°С, термостата колонки 280°С, детектора - 340°С.
Газовый режим: азот - 40 ь i/мин.
Абсолютное время удерживания Цинндон-этила - 5 мин 45 сек.
Линейность детектирование сохраняется в пределах 0,15 - 1,5 нг.
Каждую анализируемую п зобу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
Образцы, дающие пики f эльшие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют.
Объем вводимой пробы - 3 нкл.
Альтернативные условия:
Хроматограф "Кристалл 2С ,Ч0М" с электронно-захватным детектором;
Колонка капиллярная квар ::вая DB-I7Q1, длина 15 м, вкутрен:шй диаметр 0,32 мм, жидкая фаза OV-17.
Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 235°С, выдержка 2 минуты; натре ? колонки по 15°С в минуту до температуры 280°С, выдержка 12 минут.
Температура ncnapi • геля - 290 °С, детектора - 340 °С.
Регулятор расхода *елия: тип регулятора - РРГ-11; рсянм - Splitless; минимальный расход гелия - 20 мл/мин; 'стельность сброса - 5 мин.
Гвз 1~ гелий, расхс - 0,5 шс/мик, линейная скорость - 30 см/сек, давление не входе 41
кПа.
Газ 2 - гелий (продувка испарителя), сброс 1:100, начало сброса - 10 сек, расход - 50 мл/мин.
Газ 3 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 45 мл/мин.
Продувка системы после анализа при температуре 280 °С в течение 5 минут: продувка детектора азотом - 75 мл/мнн; гфодувка испарителя гелием - 60 мл/мин.
Абсолютное время удерживания Цинидон-этила 11 мин 24 сек. Объем вводимой пробы -1 мкл.
2.6.2. Обработка результатов анализов.
Содержание Цинидон-этила в пробах воды, почвы, зерна и соломы рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
HrA-V
Х=*-------------Р
Hq' ш-100
X - содержание Цинндон-эгила в пробе, мг/кг;
Н] - высота пика образца, мм;
Но - высота пика стандарта, мМ;
А - концентрация стандартного раствора, шег/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл); m - масса или объем анализируемого образца, г или мл.
Р - содержание Цинидов-э? ила в аналитическом стандарте.
3. Требования техники безг пасности.
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителям::, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
4. Разработчики.
Калинин В.А., профессор, канд. с-х. наук, Калинина Т.С., ст.н. сотр., канд. с-х, наук, Довгилевич А.В., ст.н.сотр., каНД.хим.наук, Довгилевнч Е.В., ст.и.сотр., канд. биол.наук,
Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов»,
127550, Москва, ТюлфЯзевская ул. д. 53, стр. 1,
Тслефон/факс: 976-37-68 / 976-43-26.
4*6
