УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель ми»*#етра здрафохранения Российс>

^т. Онищенко

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по определению остаточных количеств ленацила в воде, корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом газожидкостной хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в воде, корнеплодах и ботве сахарной, столовой и хормовой свеклы массовой концентрации ленацила в диапазонах 0,0005 - 0,005 мг/дм³ (вода); 0,02 - 0,2 мг/кг (корнеплоды свеклы); 0,05 -0,5 мг/кг (ботва).

Ленацил - действующее вещество препарата ЛЕНАЦИЛ, СП (800 г/кг) фирма производитель Кеминова А/S, Дания.

3-Циклогексил-1,5.6.7-тетрагидроциклопентапиримидин-2,4(3//)*Дион (IUPAC)

C,jH„N₂02

Мол. масса 234,3

Кристаллическое вещество белого или бежевого цвета. Температура плавления 315,6 - 315,8°С. Давление паров при 25°С: 2*10"⁴ мПа. Растворимость в органических растворителях при 25°С (г/кг): диэтиловый эфир. - 0,3; гексан - 0,5; бензол - 0,7; ацетон, хлороформ - 0,9; ксилол -2; этанол - 2,4, диметилформамид - 8. Растворимость в воде при 25°С - 6 мг/ дм³.

Ленацил стабилен в водной кислой среде, разрушается в щелочной среде при нагревании. Скорость гидролитического распада (pH 5 - 9): DT$o > 30 дней (25°С). рКа 10.3.

Коэффициент распределения н-октанол/вода K^logP ^и 2,31.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD so) для крыс > 5000 мг/кг; Острая дермальная токсичность (LD so) для крыс > 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LKso) Д^я крыс >5120 мг/м³(4 часа).

Область применения препарата

Ленацил рекомендуется к применению в качестве селективного довсходового или послевсходового гербицида против однолетних двудольных и злаковых сорняков ив посевах свеклы сахарной, столовой, кормовой.

Гигиенические нормативы:

ПДК в воде водоемов - 0,001 мг/дм³.

ПДК в почве - 0,25 мг/кг

МДУ в свекле сахарной, столовой и кормовой - 0,1 мг/кг

1. Метрологические характеристики метода Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 Метрологические параметры

— Л и минируемый объект Метрологические параметры, Р - 0,95, п = 24 Предел обнару жения. мг/кг (дм5) Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (дм3) Среднее значение определения % Стандартное отклонение, S,% Доверительный интервал среднего результата, % Подл 0,0005 0,0005 - 0,005 94,26 1,66 3,5 |>«»1'иемлоды (♦мирной свеклы 0,02 0,02 - ОД 92,31 2,43 5,1 jjiMI'llcnnOAbl Нилиной свеклы 0,02 0,02-0,2 91,29 2,87 6.0 ИС|ЖГПЛОДЫ (нрмоиой свеклы 0,02 0,02-0,2 93,22 1,93 4,0 jfolnrt кормовой Вилы 0,05 0,05 - 0,5 91,34 2,31 4.8

Колонка капиллярная НР-50, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм Температура детектора: 350°С испарителя: 280°С колонки: 270°С

Скорость воздуха 200 см⁵ /мин; водорода 14,0 см³/мин, газа 3 (азот) 30 см³/мин Скорость газа 1 (азот): 35 см/сек, давление 174 кПа, поток 1,8535 см³/мин, деление потока 1 : 5,395, сброс 10 см³/мин Хроматографируемый объем; 2 мм³ Ориентировочное время выхода ленацила: 6 мин 43 сек;

Линейный диапазон детектирования 1 - 20 нг

Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор ленацила с концентрацией 10 мкг/см³, разбавляют ацетоном.

10. Обработка результатов анализа

Содержание ленацила в пробе рассчитывают по формуле:

А* V

X =--------- ,    где

ш

X - содержание ленацила в пробе, мг/кг(дм³);

А - концентрация ленацила, найденная по градуировочному графику, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; ш - масса (объем) анализируемого образца, г(см³);

11.    Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

12.    Разработчики.

Юдина Т В., Федорова Н.Е., Волчек С.И., Рогачева С К.

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (ФНЦГ им.Ф Ф.Эрисмана)

141000, г. Мытищи Московской обл., ул. Семашко, д. 2, лаборатория аналитических методов контроля.

Телефон: (095) 586-1276

Таблиц» 2

Полнота извлечения ленацила из воды, корнеплодов сахарной, столовой и кормовой свеклы, ботвы кормовой свеклы __(6 повторностей для каждой концентрации)_

Среда Внесено ленацила мг/кг Обнаружено ленацила мг/кг Полнота извлечения, % Вода 0,0005 0,00047 ± 0.00002 94,25 0,001 0,00095 ± 0.00004 95,04 0,002 0,00188 + 0,00008 94,05 0,005 0,00468 ± 0,00028 93,71 Корнеплоды 0,02 0,01892 + 0,00099 94,60 сахарной свеклы 0,04 0,03602 + 0,00189 90,06 0,1 0,09298 + 0.00476 92,98 0,2 0,18318 ± 0,00915 91,59 Корнеплоды 0,02 0,01861 ±0,00125 93,06 столовой свеклы 0,04 0,03671 ±0,00192 91,78 0,1 0,08913 ±0,00476 89,13 0,2 0,18234 ±0,01007 91,17 Корнеплоды 0,02 0,01870 ±0,00103 93,49 кормовой свеклы 0,04 0,03711 ±0,00178 92,78 0,1 0,09379 ±0,00591 93,79 0,2 0,18661 ±0,01021 92,81 Ботва кормовой 0,05 0,04512 ±0,00331 90,25 свеклы 0,1 0,09108 ± 0,00608 91,08 0,25 0,23046 ±0,01370 92,18 0,5 0,45930 ± 0,02848 91,86

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором после экстракции из анализируемой пробы воды хлористым метиленом, растительного материала - смесью ацетон-вода, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешнвающимися фазами и на колонке с флорисилом

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 2 нг.

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания свеклы кормовой, столовой, сахарной.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту в азобензоле не более 5*10'¹³ г/с, предназначенный для работы с капиллярной колонкой Весы аналитические ВЛА-200

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 см³ Меры массы Микрошприц МИМОМ

Пипетки градуированные 2-го класса точности иместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 см³

11робирки градуированные (с пришлифованной пробкой) иместимостью 10 см³

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25. 100, 250, 500 и 1000 см³ Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими ||>актеристиками.

3.2. Реактивы Иснацил с содержанием действующего вещества 99,5% (Кеминова, Дания)

Ацетон, осч    ГОСТ 2306

Вола дистиллированная    ГОСТ 6709

и Гексан, хч    ТУ-6-09-3375

/6?

Метилен хлористый (дихлорметан), хч	ГОСТ 12794
Натрий сернокислый, безводный, хч	ГОСТ 4166
Натрий хлористый, хч	ГОСТ 4233

Допускается использование реаюгивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Азот газообразный из баллона, о.с.ч. Аппарат для встряхивания типа АВУ-бс Баня водяная	ТУ 64-1-2851-78
Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронки делительные вместимостью 250 и 1500 см1	ГОСТ 25336
Воронка Бюхнера	ГОСТ 25336
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм Генератор водорода Гомогенизатор Груша резиновая	ГОСТ 25336
Аквадистиллятор	ГОСТ 22340
Колба Бунзена	ГОСТ 25336
Колбы плоскодонные вместимостью 400 - 500 см3	ГОСТ 9737
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 150 и 500 см3 Колонка капиллярная НР-50, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм Компрессор	ГОСТ 9737
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi,	ТУ 25-11-917-74
Швейцария Стаканы химические, вместимостью 100 и 400 см3 Стекловата Стеклянная колонка длиной 25 см, внутренним диаметром	ГОСТ 25336

IS мм

(/геклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Флорисил, адсорбент для хроматографии L 60-100 меш

(фирмы «Флука», Швейцария)

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с реактивами по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции:    очистка

органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов.

кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с флорисилом для очистки экстрактов, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с флорисилом

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1.    Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшими количеством КМпО< и прокаленным карбонатом калия.

7.1.2.    Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Приготовление смеси растворителей для экстракции

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 900 см³ ацетона и 100 см³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.3.1.    Исходный раствор пенаципа для градуировки (концентрация 100 мкг/см³)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,01 г ленацила, растворяют в

50-70 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Растворы № 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.3.2.    Рабочие растворы №№ 1-5 ленацила для градуировки (концентрация 0,5 -

10мкг/см³) В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 и 10.0 см³ исходного раствора с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.3 1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы    1    -    5    с

концентрацией ленацила 0.5,10, 2.5, 5.0 и 10.0 мкг/см³, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более 10-ти дней

Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения ленацила из исследуемых образцов.

7.4. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации ленацила в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки №№ 1 - 5.

В испаритель хроматографа вводят по 2 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

7.5. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстрактов

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г флорисила в 20 - 25 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 25 см³ смеси гексан-ацетон (8:2 по объему), затем 25 см³ гексана со скоростью 1-2 капли в сек. После этого колонка готова к работе.

7.6. Проверка хроматографического поведения ленацила на колонке с флорисилом

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2 см³ стандартного раствора № 5 в концентрации 10 мкг/см³. Упаривают растворитель досуха, остаток растворяют в 5-ти см³ смеси гексан-ацетон (9:1, по объему) и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.5. Промывают колонку 30 см³ смеси гексан-ацетон (9:1, по объему), затем 30 см³ смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек. Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1-м jm³ ацетона, анализируют на содержание ленацила по п. 9.4.

Фракции, содержащие ленацил, объединяют вместе и вновь анализируют по

п 9 4

Рассчитывают содержание вещества в элюатах, определяют полноту смывания ; колонки и необходимый для очистки объем элюента.

ПРИМЕЧАНИЕ: Проверку хроматографического поведения ленацила следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичсств пестицидов" (№ 2051-79 от 21.08.79 г).

Отобранные пробы воды анализируют в день отбора или хранят при 4°С в течение 10-ти дней.

Пробы ботвы и корнеплодов свеклы, хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5-ти дней Для длительного хранения пробы растительного материала замораживают и хранят при температуре -18°С

Перед анализом воду фильтруют через неплотный фильтр, образцы корнеплодов и ботвы свеклы измельчают.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция

9.1.1.    Вода

1000 см³ анализируемого образца воды помешают в делительную воронку вместимостью 1500 см³, добавляют 150 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин После полного разделения фаз нижний органический слой сливают в коническую колбу вместимостью 500 см³. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 75 см³ хлористого метилена. Объединенную органическую фазу фильтруют через хлопковую вату, помещенную в конусную химическую воронку, в круглодонную колбу вместимостью 500 см³ И упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35°С. Сухой остаток в колбе растворяют в 5-ти см³ смеси растворителей гексан-ацетон (9:1) и подвергают очистке по п. 9.3.

9.1.2.    Корнеплоды и ботва свеклы

Образец измельченных корнеплодов свеклы массой 50 г или ботвы массой 20 г помещают в коническую колбу (или химический стакан) вместимостью 400 см³, вносят 75 см³ смеси ацетон-вода (9:1, по объему), гомогенизируют в течение 1 мин, затем добавляют 75 см³ смеси ацетон-вода (9:1, по объему) и помешают на встряхиватель на 30 мин

Раствор (с осадком корнеплодов, ботвы свеклы) фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр «красная лента» под вакуумом Осадок на фильтрг

*72

промывают 50 см³ смеси ацетон-вода (9:1, по объему). Экстракт и промывку объединяют, помещая в круглодонную колбу. Далее проводят очистку по п. 9.2.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмемивающихся растворителей

Экстракт, полученный по п. 9.1. и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (-20 см³) при температуре не выше 35°С, внимательно следя за процессом и не допуская переброса жидкости при вспенивании. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 20 см³ насыщенного раствора хлорида натрия, 50 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 см³. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 20 см³ хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, и помещенную в круглодонную колбу, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.

9.3 Очистка экстракта на колонке с флорисилом

Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2. или 9.1.1. растворяют в 5-ти см³ смеси гексан-ааетон (9:1, по объему) и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 см³, которые также наносят на колонку Промывают колонку 20 см³ гексана, затем 20 см³ смеси гексан-ацетон (9:1, по объему), элюат отбрасывают. Ленацил элюируют с колонки 30 см³ смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35°С. Остаток в колбе, растворяют 1 см³ ацетона и анализируют на содержание ленацила по п. 9.4.

9.4. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Газовый хроматограф «Кристалл-2000М», снабженный термоионным

детектором

/73