Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования _ Российской    Федерации__

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указаний МУК 4.1.1802—4.1.1820—03; 4.1.1822—4.1.1826—03

Выпуск 5

Издание официальное

Москва • 2007

УТВЕРЖДАЮ

Главный Государственный санитарный врач Российской Федерации Первый заместитель Министра

здрав*    Федерации

МИЩЕНКО 2003 г.

I    £»*    *    т.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Методические указания по определению остаточных количеств Хлорнрофама в иоде, почве и картофеле.

1 Вводная часть.

Фирма производитель: Aetna Кемикал.

Торговое название: Спад-Ник, Хлор-ИФК.

Название действующего влцсстоа по ИСО: Хлорпрофам.

Название по ИЮПАК: Изопропил 3-хлорокарбанилаг.

Структурная формула:

Cl

Эмпирическая формула: C10II12ONQ2.

Молекулярная масса: 213.7.

Химически чистый Хлорпрофам представляет собой бесцветный порошок.

Точка плавления: 41,4°С (чистый продукт); 38,5-40°С (технический продукт).

Растворимость в воде - 89 мг/л (при 25°С), хорошо растворим в большинстве органических растворителей: спиртах, г люках, эфирах, хлорированных и ароматических углеводородах. Стабилен к ультрафиолет оиому излучению. Разлагается при температуре около 150°С.

Хлорпрофам относится к стойким соединениям, слабо гидролизующимся II КЩТЮН II щелочной средах, с ДТ^ в почве до 65 дней.

Я Я*

Краткая токсиколошчсская характеристика: Хлорпрофам относится к малоонасным по острой оральной (ЛДя> для крыс состааляст 5000-7500 мг/кг) и дермальной (ЛД₅₀для кроликов составляет >5000 мг/кг) токсичности и чрезвычайно опасным по ингаляционной токсичности (пороговая концентрация для крыс 45 мг/м^{1 2 3 4}) веществам. Он обладает слабо выраженными кумулятивными свойствами.

В России гигиенические нормативы нс установлены.

Область применения препарата: Хлорпрофам - системный гербицид и регулятор роста растений из группы карбаматов, являющийся мтнбитором деления клеток (ингибитор формирования микротубул). Препарат Спад-Ник 50 на основе Хлорпрофама с содержанием действующего вещества 500 г/л проходит испытания с целью постоянной регистрации в России в качестве регулятора роста расгеннй для применения и клубнехранилищах картофеля с максимальной нормой расхода 24 мл/т с целые предотвращения прорастания клубней.

Таблица 1.

Мегрологичсскис параметры, р=0,95; п=20 Анализируемый объект Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых концен-1 раций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение S, % Доверительный интервал средней! результата %, ± 1 2 3 4 5 6 вода 0,01 0,01-0,1 83,28 1,31 2,28 почва 0,05 0,05-0,5 76,83 0,91 1.47 каргофель 0,04 0,04-0,4 79,45 1,40 2,32

Таблица 2. До перигсльиый шпсркал и полнота определения Хлорпрофама о воде, почис и картофеле.

Среда Добавлено Хлорпрофамг МГ/КГ Обнаружено Хлорпрофамг мг/кг Доверительный интервал, + Полнота определении. % вода 0,01 0,009 0.0030 85,9 0,025 0,021 0,0010 84.9 0,05 0,041 0,0010 82,9 0,10 0,079 0,0003 79,4 иочоа 0,05 0,038 0,0020 75,9 0,10 0,077 0,0040 77,0 0,25 0,195 0,0070 77,8 0.50 0,383 0,0270 76,7 каргофель 0,04 0,032 0,000 80,7 0.10 0.077 0,002 773 0,20 0.162 0,003 80.9 0,40 0,316 0,005 78.9

zzs

материалы и оборудование.

2.2J. Реактивы. материалы н растворы.

Хлорирофом, аналитическим стандарт с содержанием д.в. 98,5% фирмы Асита Кемикал. Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Вода дистиллированная, I ОСТ 7602-72.

Кислота соляния, ч., ГОСТ 3118-77 Метилен хлористый, ГОСТ 19433-88.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Мафий хлористый, х.ч.. ГОСТ4233-77.

2.2.2.Г1рнборы. аппаратура, посуда.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081 - 73 или аналогичный.

Ваня полянам, ТУ 46-22-603-75.

банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат.№3120-0250, NALGENE. Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-801: или аналогичные Воронки делительные на 250 и 500 мл, ГОСТ 23336-82.

Коронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Испаритель ротационный, вакуумный HIM М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный.

Колбы мерные на 10,25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические на шлгфе на 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колонки газохромптографмческис капиллярные кпарцепые длиной 15 и 30 м, с внутренним диаметром 0,32 и 0,25 мм соотосгствснно, толщина пленки 0,25 мкм.

Концентраторы грушспидтыс на 250 мп ИШ29 КГУ 100 (250), ГОСТ 10394-72. Микроишриц на 10 мкл, ТУ Г-2.833.0.24.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Пипегки мерные на 1,0,2,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Фильтры бумажные "Красная лента" ТУ 6-09-1678-86.

Хроматофаф газовый "Кристалл 2000 М" с термомоммым детектором с пределом дстсктиро виним но итоту п азобензоле - 5х10'¹³.

Центрифуга, М1*ТУ 42-219- 69 или аналогичная.

Цилиндры мерный емкос1..и> 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

2.3.11одгото»ка к определению.

2.3.1.    Подготовка и кондиционирование колонок для газожи л костной хроматографии.

Колонку устанавливают в термостате хромателрафа, нс подсоединяя к детектору, и

стабилизируют в токе гелия при температуре на 20°С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8-10 часов.

2.3.2.    Приготовление стандартных растворов.

Взвешивают 50 мг Хлорирофама в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до мегки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/мл). Стандартный раствор Iff I можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разбавления готовят епшдаршые растворы Хлорпрофа-мп в ацетоне с концентрацией 1; 2; 2,5; 5; 10; 20 мкг/мл для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец.

2.4.    Отбор проб.

Отбор проб производится н соответствии с "Унифицированными правилами озбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов м объектов окружающей среды для определения микроколнчссто пестицидов" (№ 2051-79 от 21.08.79). Пробы воды хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильной камере, пробы картофеля - в заниянпых пластиковых пикетах в замороженном виде. Пробы почвы подсушиваю!' до стан-даргной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой заре при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образны могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 0,1 мм; картофель измельчают на терке.

2.5.    Описание определения.

Образец воды 200 мл помещают в делительную во|юнку емкостью 500 мл, добавляют 10 г (2 чайных ложки) хлористого натрия, встряхивают до полного растворения соли. Добавляют в делительную воронку 50 мл хлористого метилена и экстрагируют Хлорнрофам, встряхивая дели тельную воронку 1-2 минуты. После разделения слоен нижнюю фракцию метилен хлорида сливают в концентратор через воронку с безводным сульфатом натрия. Экстракцию повторяют еще два раза порциями по 50 мл, собирая метилен хлорид о концентратор. Объединенные фракции выпаривают па розационпом вакуумном испарителе при земно-

лз/

ратуре ис выше 40°С. Сухой остаток ристворяют н 2 мл ацетона и вводят в хроматограф I мкл пробы.

2.S.2. Почва.

Навеску помпы 40 г смачивают 20 мл 0,05 н раствором хлористоводородной кислоты, залипают 70 мл смеси ацетонитрил и 0,05 и раствора хлористоводородной кислоты (9:1) и встряхивают п течение 30 минут. По окончании вс1ряхипаиия пробу центрифугируют 10 минут со скоростью 2000 об/мии. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу емкостью 250 мл. на дно которой предвари !елыю помещают 10 г хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя 50 мл экстрагирующей смеси, и, встряхивая пробу о течение 15 минут, центрифугируют и отфильтровывают экстракт в ту же коническую колбу.

Объединенный экстракт переносят н делительную воронку. После разделения фаз нижний водный слой острожно слипают и отбрасывают.

Ацетонитрил из воронки слипают через слой безводного сульфата натрия в концентратор и выпаривают при температуре не выше 40°С. Остаток в концентраторе разводят и 5 мл ацегома, добавляют 50 мл дистиллированной поды, обмывают стенки коицеюратора и переносят его содержимое и чистую делительную воронку емкостью 250 мл. Концентрат]) ополаскивают еще раз 50 мл дистиллированной воды и помещают сс в ту же делительную воронку.

Добавляют в делительную норонку 5 г хлористою натрия, перемешивают содержимое дли растворения соли и приливают 30 мл метилен хлорида. Экстрагируют Хлорнрофам, встряхивая воронку 1-2 минуты. После разделения слоев нижний слой метилен хлорида сливают в концентратор, пропуская через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, собирая мет илен хлорид d тот же концентратор. Объединенные экс тракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 40°С. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф I мкл пробы.

^З..Кщцфсдь.

Навеску измельченного материала - 50 г помещают в пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 70 мл ацетонитрила. Встряхивают 30 минут. Экстракт фильтруют- через бумажный фильтр в коническую колбу емкостью 250 мл. на дно которой предварительно насыпают 5 г хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще два рта. заливая пробу 50 мд ацетонитрила, и, встряхивая каждый раз но 15 минут. Объединенный фильтрат переносят в делительную зоронку емкостью 250 мл, нижний водный слой отбрасывают.

Ацетонитрил сливают через слой безводного сульфата натрия в концентратор и выпаривают при температуре нс выше 40°С. Остаток в концентра юре разводят и 5 мл ацетона, добавляют 50 мл дистиллированной воды, обмывают стенки концентратора и переносят его содержимое в чистую делительную воронку емкостью 250 мл. Концентратор ополаскивают еще раз 50 мл дистиллированной воды и помещают сс в ту же делительную воронку.

Добавляют в делительную воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают содержимое для растворения соли и приливают 30 мл метилен хлорида. Экстрагируют Хлорпрофам, встряхивая воронку 1-2 минуты. После разделения слоев нижний слой метилен хлорида сливают в концентратор, пропуская через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, собирая метилен хлорид в тог же концентратор. Обьсдннспныс экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре нс выше 40°С. Сухой остаток растворяют в 2 мл ицстопа и вводит в хромат ограф I мкл пробы.

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов.

2.6,1.Условия хроматографирования.

Х|к>матограф «Кристалл 2000 м» с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования но азоту в азобензоле 5'10‘^п г/см¹.

Колонки капиллярные кварцевые HP-5 (Crosslinked 5% РП МГ Siloxanc); длиной 15 м с внутренним диаметром 0,32 мм и 30 м с внутренним диаметром 0,25 мм; толщина пленки 0,25 мкм.

Режим раСкны для колонки длиной 15 м.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура -I !0^иС, выдержка I минута; нагрев колонки но 30 градусов и минуту до температуры 180°С, выдержки 5 минут; naipcn колонки но 30 градусов в минуту до температуры 250"С, выдержка 5 минут.

Газовый режим - Splitless.

Газ-носитель - гелий (Г1). Тип регулятора расхода юлил - РРГ 11, линейная скорость -21 см/сек, давление на входе 25,35 кМа.

Газ 2 (Г2) - гелий (продувка испари геля), расход 1,0 мл/мин, сброс 1:40.

Газ 3 (ГЗ) - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 40 мл/мин.

Продувка системы после ииалнза при температуре 250°С в течение 5 минус: продувка испарителя гелием - 50 мл/мин; продувка детектора азотом 50 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Хлорпрофама - 4 мин 32 сек - 4 мин 35 сок.

£53

Режим работы для колонки длиной 30 м.

Температура гсрмостата колонки программированная. Начальная температура -110^WC, выдержка 1 минута; нагрев колонки по 30 1радусов в минуту до температуры 190°С, выдержка 6 минут; iiarpci: колонки но 30 градусов в минуту до температуры 250°С, выдержка 5 минут.

Газовый режим - Splitless.

Газ-носнтсль - гелий (Г1). Тип регулятора расхода гелия - РРГ 11. линейная скорость - 19 см/сск, давление на сходе 75,16 к11а.

Газ 2 (Г2) - гелий (продувка испарителя), расход 0,5 мл/мии. сброс 1:80.

Газ 3 (ГЗ) - азот (п.»ддув в детектор), расход во время анализ - ⁴⁰ мл/мин. Абсолютное время удерживания Хлорпрофама - 6 мин 33 сек - 6 мин 34 сек.

Продувка системы после анализа при температуре 250°С в течение 5 минут: продувка испарителя гелием - 50 м:7мин; продувка детектора азотом 50 мл/мин.

Температура испарителя * 2(КРС, детектора - 350°С Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Линейность дстектироваг ih сохраняется в пределах 1,0-10 иг.

Содержание Хлоргрофама в пробах воды, почвы и картофеля рассчитывают методом абсолютной калибровки »: > формуле:

Н|*А V

Х~---I»

Н₀- in- 100

где

X - содержание Хлорнро<} зма п пробе, мг/кг или мг/л;

111 - площадь инка образ .'а, мВ;

I [q - площадь инка стандарт, мВ;

Л - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V •• объем экстракт, подготовлен нот для х|Юматографирования (мл); ш - масса или объем анализируемого образца, г или мл.

Р • содержание Хлорпрофзма в аналитическом стандарте.

lL

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми гитами.

Калинин В.Л., профессор, кинл. с-х. наук, Калинина Т.С., ст.н. сотр., каид. с-х. наук, Фролова Н.С., ст. ннж.

Московски сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевская уд., 53, стр. 1. У НКЦ «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов», гелсфои/факс 976-43-26. li-mail: ilmaa@onlinc.nj.

1

Методика определения остаточных количеств Хлорпрофама н ноле, почве и кшжнЬелс.

2

2.1. Основные положения.

2.1.1.    Принцип метода.

Методика основами на определении Хлорпрофама методом 1азожидкостной хроматографии с использованием термоноииого детектора после его экстракции из растительных проб ацетонитрилом, из сочим - ацетонитрилом с добавлением 0,05н хлористоводородном кислоты и очистки псре:н;-;тракцнсй в хлористый метилен.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2.    Избиратель!»'кгь метола.

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов. применяемых при возделывании ке тюфеля.

3

2.1.3.    Метрологнч<у:кая характеристика метода.

4

Метрологическая характеристика метода представлена к таблицах I - 2.