Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования ______Российской    Федерации__

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указаний МУК 4.1.1802—4.1.1820—03;

4.1.1822—4.1.1826—03

Выпуск 5

Издание официальное

Москва • 2007

УТВЕРЖДАЮ Главный Государственный санитарный врач

>й Федерации

Первый заместит*    (воохранения

IBpi) fj\ 2003 г. МУК 4.1 .№( 0\

Дата введения - с / 1оэч,

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методические указания ю определению остаточных количеств Хизалофоп-П-э'Г ила и его основного метаболита Хизалофопа-П в воде, Хнзолофопа-П в почве, корнеплодах сахарной свеклы и моркови, семенах и масле льиа и сои методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии

1 ВВОДНАЯ ЧАСТЬ Фирма производитель: ООО Агроэксперт Труп, Россия Торговое название. Таргет

Название действующего вещества по ИСО: Хизалофоп-П-этил Название действующего вещества по ИЮПАК:

(Я)-2-(4-(6-1хлоро-2-хиноксзлинил)окси] фенокси] пропионовой кислоты этилошй эфир Структурная формула:

Хизалофоп-П-этил

Эмпирическая формула: C|9H|7C1N)Os Молекулярная масса: 472,8

Хизалофол-П-этил - биологически активный (R) -энантиомер Хизалофоо эти ла Химически чистый Хизалофоп-П-этил представляет собой белый кристаллический порошок без запаха.

Давление паров: 1 1 мПа (20° С).

2.3.5.    Построение калибровочною графика.

Для построения калибровочною графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого ич стандартных растворов, содержащих Хизалофон-П-эгил ( или Хичалофон-П) с концентрациями 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/мл, измеряют площади пикон, рассчигынают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят- график тависимости площади пика от концентрации Хизалофоп-II-Этила или Хизалофопа-Г! соответственно.

2.3.6.    Подготовка концентрирующего патрона Диалак-С (0,6 г) для очистки экстракта, содержащего Хизалофоп-П.

Псе процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон нс должна превышать 5 мл/мин

Патрон Диалак-С устанавливают на алоиж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 мл чтилацетата и 5 мл смеси гексан-этилацстат в соотношении 8:2. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!

2.3.6.1. Проверка хроматографического поведения Хизалофопа-П на концентрирующем патроне Диапак-С.

Из стандартною раствора Хизалофопа-П в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/мл отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацегата, помещают на 30 секунд в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 8 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Концентратор тщательно обмывают 5 мл смеси гексан-этилацстат в соотношении 8:2 и смесь также вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 30 секунд в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют. Картридж высушивают под вакуумом в течение 2 минут. Хизалофоп-П элюируют с картриджа 15 мл 0,2% уксусной кислоты ь этилацстатс порциями по 5 мл, элюат после внесения каждой упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помешают на 30 секунд в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют Определяют фракции, содержащие Хизалофоп-П и объединяют их.

2.3.6.2. Очистка экстракта.

Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацстата, помещают па 30 секунд и ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 8 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят па картридж. Концентратор тщательно обмывают 5 мл смеси !ексан-этилацстат в соотношении 8:2 и смесь также вносят на картридж. Элюат отбрасывают. Картридж высушивают под вакуумом в течение 2 минут. Хизалофоп-П элюируют с картриджа 10 мл 0,2% уксусной кислоты в этилацетатс, элюат упариваю! досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30°С. Сухой остаток растворяют в I мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.

2.4. Отбор проб.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичсств пестицидов” (N 2051-79 от 21.08.79

2.5. Описание определения

2.5.1. Вода.

Пробу воды объемом 1000 мл помещают в делительную воронку емкостью 2000 мл, добавляют 20 г NaCl и перемешивают до полного растворения соли. Затем в делительную воронку добавляют 150 мл гексана и интенсивно встряхивают делительную воронку в тсчеиие 5 минут. После полного разделения фаз верхний гексановый слой, содержащий Хизалофоп-П-этил, собирают в конической колбе объемом 500 мл, пропуская его через безводный сульфат натрия. Водный слой возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию Хизалофои-П-этила дважды порциями (ексана по 150 мл, интенсивно встряхивая каждый раз делительную воронку в течение 5 минут. Высушсниый гексановый экстракт перенося!' порциями в концентратор объемом 250 мл и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30*С. Сухой остаток растворяют в I мл ацетонитрила и аликво!у объемом 20 мкл вводят в хроматограф.

Водный слой после экстракции Хизалофоп-П-этила возвращают в делительную воронку. Пробу подкисляют концентрированной орто-фосфорной кислотой до pH 2.0 (около 2 мл кислоты). Хизалофон-П экстрагируют тремя порциями эфира по 150 мл, встряхивая воронку в течение 5 мин (Осторожно! Вспенивание!). Каждый раз после полного разделения слоев, нижний водный слой собирают в коническую колбу, а верхний эфирный слой в концентратор, пропуская через безводный сульфат натрия Пробу из конической колбы возвращают в воронку и повторяют экстракцию свежей порцией эфира. Объединенный

эфирный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарители при температуре бани не выше 30°С. Упаренный экстракт растворяют в 2 мл эгилацетата, добавляют 8 мл гексана и проводя! очистку экстракта на концентрирующем патроне Диапак С, как указано в и. 2.3.6.2. Очистка экстракта.

После очистки эяюат упаривают досуха растворяют в 1 мл ацетонитрила и аликвоту 061.СМОМ 20 мкл вводят в хроматограф.

2.5.2. Почва.

Воздушно-сухой образец почвы массой 10 г помешают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 10 мл 1 н соляной кислоты, встряхивают до полною смешивания, выдерживают 10 минут при комнатной температуре, затем добавляют 50 мл аиетона и экстрагируют в течение 10 минут на ультразвуковой ванне и дополнительно в течение 5 минут на механическом вегряхнвателе. Экстракт переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин при 2500 об/мин. Супернатант фильтруют в концентратор объемом 250 мл через фильтр “красная лента". Экстракцию повторяют ешс два раза, добавляя каждый раз по 50 мл смеси ацетон-1 и соляная кислота в соотношении 8:2 и экстршируя по 10 минут на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 минут на механическом встряхияателс. После центрифугирования экстракт фильтруют через бумажный фильтр “красная лента” в тот же концентратор. К объединенному экстракту в концентраторе добавляют 20 мл дистиллированной воды и упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водною остатка( до исчезновения запаха ацетона).

К водному остатку добавляют 20 мл насыщенною раствора поваренной соли, перемешивают и переносят содержимое концентратора в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор обмывают 30 мл хлороформа, переносят его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения фаз нижний слой хлороформа собирают в концентратор, фильтруя через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют сшс два раза, используя по 30 мл хлороформа и интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 минут. Экстракты (нижний слой) объединяют в концентраторе, осушитель обмывают 10 мл хлороформа, объединяют с основным и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30*С.

Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют в концентратор 50 мл гоксана, перемешивают и перенося! содержимое концентратора в сухую(!) делительную воронку. Туда же добавляют 20 мл ацетонитрила и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 100 мл. Экстракцию ацетонитрилом повторяют еще 2 раза порциями по 20 мл. Ацетонитрильные экстракты

s&o

объединяют и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре мс выше 30*С.

Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацетата (помешают на 30 секунд н ультразвуковую ванну), тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 8 мл гексана, перемешивают и очищают на концентрирующем патроне Диалак-С, как указано в п. 2.3.6.2. После очистки элюат упаривают досуха, растворяют в 10 мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.

2.5.3. Корнеплоды сахарной свеклы и моркови.

Образец измельченных корнеплодов массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 50 мл смеси ацетон-1 и соляная кислота в соотношении 8:2 и экстрагируют в течение 10 минут на ультразвуковой ванне и дополнительно в течение 5 минут на механическом встряхивателе. Экстракцию повторяют еще два раза, используя но 50 мл смеси ацетон-1 н соляная кислота в соотношении 8:2 и экстрагируя по 10 минут на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 минут на механическом встряхивателе.

Экстракт фильтруют через ватный тампон в концентратор объемом 250 мл. добавляют туда же 20 мл дистиллированной воды и упаривают но ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С до исчезновения запаха ацетона. Затем к содержимому колбы добавляют 20 мл насыщенного раствора поваренной соли, перемешивают и переносят содержимое концешратора в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор обмывают 30 мл диэтилового эфира, помещают его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения фаз верхний слой (диэтиловый эфир) собирают в химический стакан объемом 100 мл, водный слой возвращают в делительную иоронку и экстрагируют Хизалафоп-Г) еще двумя порциями эфира по 20 мл. Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку, добавляют туда же 15 мл насыщенного раствора поварсниой соли, осторожно перемешивают и дают выстоя ться до в течение 5 минут. Затем водный слой с небольшим количеством эмульсии( объем эмульсии не более 2 мл) отбрасываю:, эфир оставляют в делительной воронке. Из эфира Хизалофогт-П экстрагируют тремя порциями 5% раствора соды (гидрокарбоната натрия), интенсивно встряхивая делительную воронку течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой собирают в химический стахан объемом ЮОмл, эфир отбрасывают. К водной фазе добавляют 10 мл насыщенного раствора поваренной соли, перемешивают, переносят в делительную воронку и выделившийся эфирный слой ( верхний) отбрасывают. К водному остатку в делительной воронке добавляют 50 мл хлороформа и интенсивно встряхивают смесь в течение 2 минут. После полного разделения фаз нижний слой (хлороформ) отбрасывают, а к водному слою осторожно( вспенивание!) добавляют 10

мп 4и серной кислоты (до pi 1 1) и перемешивают дня дс1азацим. Ия водной фазы Хизалофон-11 ткстрагируюз тремя порциями хлороформа по 20 мл. интенсивно встряхивая делительную норонку в течение 2 минут. Хлороформ собирают в концентратор через слой безводною сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30^иС

Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацетата (помещают на 30 секунд и ультразвуковую ванну), тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 8 мл гексана, перемешивают и очищают на концентрирующем патроне Диапак-С, как указано в и. 2.3.6 2. Очистка экстракта. После очистки элюат упаривают досуха, растворяют в 2 мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.

2.5.4. Семена льна и сои.

Образец семян весом 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 20 мл 1п соляной кислоты и оставляют на 15 минут при комнатной температуре. Затем прибавляют 50 мл ацетонитрила и экстрагируют в течение 10 минут на ультразвуковой ванне и дополнительно в течение 5 минут на механическом встряхиватслс.. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл смеси ацетонитрил-1 н соляная кислота в соотношении 9:1.

Экстракт фильтруют через бумажный фильтр “красная лента" в плоскодонную колбу объемом 250 мл с 5 г сухой поваренной соли , перемешивают и дают выстояться 10 минут. Затем переносят содержимое колбы в делительную воронку объемом 250 мл, нижний водный слой отбрасывают, добавляют к оставшемуся ацетонитрильному слою 50 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полною разделения слоев в делительной воронке отбрасывают вновь отделившийся нижний водный слой и верхний гексановый. Ацетонитрильный средний слой собирают в плоскодонную колбу объемом 100 мл, возвращают в делительную воронку и промывают еще двумя порциями гексана по 50 мл, гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор объемом 250 мл, пропуская через слой безного сульфата натрия, осушитель обмывают 10 мл ацетонитрила, объединяют с основным экстрактом и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30*С до объема 3-5 мл. К остатку в концентраторе добавляют 30 мл воды, 20 мл насыщенного раствора поваренной соли и 5 мл 4н серной кислоты, перемешивают и переносят содержимое концентратора в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор обмывают 30 мл диэтилового эфира, помещают его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения фаз верхний слой (диэтиловый эфир) собирают в химический стакан объемом 100 мл, водный слой возвращают в делительную воронку и экстрагируют Хизалафоп-П еще двумя порциями эфира по 20 мл. Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку,

добавляют туда же 15 мл насыщенною растиора поваренной соли, осторожно перемешивают и дают выстояться до в течение 5 минут. Затем водный слой с небольшим количеством эмульсии( объем эмульсии не более 2 мл) отбрасывают, эфир оставляют в делительной воронке. Из эфира Хизалофоп-П экстрагируют тремя порциями 5% раствора соды (гндрокарбоната натрия), интенсивно встряхивая делительную воронку течение 2 ми ну г. После полною разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой собирают в химический стакан объемом 100 мл, эфир отбрасывают. К водной фазе добавляют 10 мл насыщенного раствора поваренной соли, перемешивают, переносят в делительную воронку и выделившийся эфирный слой ( верхний) отбрасывают. К водному остатку в делительной воронке добавляют 50 мл хлороформа и интенсивно встряхивают смесь в течение 2 минут. После полного разделения фаз нижний слой (хлороформ) отбрасывают , а к водному слою осторожно( вспенивание!) добавляют 10 мл 4н серной кислоты ( до pH 1) и перемешивают для дегазации . Из водной фазы Хизалофоп-П экстрагируют тремя порциями хлороформа по 20 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мииуг. Хлороформ собирают в концентратор через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30*С

Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацетата (помещают на 30 секунд в ультразвуковую ванну), тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 8 мл гексана, перемешивают и очищают на концентрирующем патроне Диапак-С, как указано в п. 2.3.6.2. Очистка экстракта. После очистки элюэт упаривают досуха, растворяют в 2 мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.

2.5.5. Масло льна и сои

Образец масла весом 10 г помешают в химический стакан объемом 100 мл, прибавляют 30 мл гексана, тщательно перемешивают и переносят в сухую делительную воронку объемом 250 мл. Стенки стакана обмывают еще 2 раза гексаном порциями по 20 мл и все смывы объединяют в делительной воронке. К гексановой фазе в делительной воронке прибавляют 30 мл ацетонитрила и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой помещают в химический стакан объемом 100 мл, гексановый слой оставляют в делительной воронке и экстрагируют из него Хнзалофоп-П еще два раза порциями ацетонитрила по 20 мл. Все ацетонитрильные экстракты объединяют и возвращают в делительную воронку. Туда же добавляют 30 мл гексана, интенсивно встряхивают в течение 2 минут и дают выстояться до полного разделения фаз. Затем нижний ацетонитрильный слой помещают в концентратор объемом 250 мл и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацетата (помещают на 30 секунд в ультразвуковую ванну), тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 8 мл

/39

Температура плавления: 76.1 - 77;1°С.

Коэффициент распределения в системе н-октанол - вола KuwlogP*⁶ 4,66три 20“С).

Растворимость в воле 0,6) мг/л (при 20"С) Растворимость в органических растворителях: аздетон. этилацетат и ксилол - более 250, 1,2-дихлорэтане - более 1000. метаноле - 34,87, н-гептане - 7,168 г/л при 20° С.

Хмзалофор-ГЬэтил стабилен при высоких температурах и в органических рас «верителях, но быстро разрушается вводной щелочной среде (ОТ» <1 d прирнэ). 3 растениях и почве быстро гидролизуется (ДТя> в почве менее 1 дня.)

Краткая токсикологическая характеристика:

Хмзаяофоп -Л-этил относится к малоопасным дли человека и теплохромых животных ьешествам по острой пероральной (ЛД» для крыс 1)82 - 1210 мг/кг) и мигал я хлионной токсичности (ЛКso (4 час) для крыс >5,8 мг/л воздуха (аэрозоль)).

Обладает слабым кожно-резорбтивным действием, но вызывает раздражение слизистых оболочек глаз.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД • 0,01 мг/кг/сутки; ОДК в почве - 0,8 мг/кг; ПДК в воде вольной — 0,0001 mi/дм'; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,2 мг/м³; в атмосферном воздухе — 0,01 нг/м³ .

МДУ в сельскохозяйственной продукции (мг/кг): свекла сахарна», морковь, лук. капуста, арбуз - 0,05; свекла столовая - 0,01; картофель, томаты, соя (сем снам масло) — 0,05.

Область применения препарата: Хизалофоп-П-этил - системный ясоевосодовый гербицид, эффективно подавляющий рост и развитие малолетних и многолетних злаковых сорных растений. Ингибирует синтез жирных кислот. Он быстро адсорбвруехся через поверхность листа, гидролизуется до Флуазифопа-П и переносится через флоэму и ксилему, накапливаясь в ризомах и столонах многолетних злаках, а так же в мери езема одно летних и многолетних злаковых растений.

Проходит регистрационные испытания в России под торговым нюынием : Таргст, концентрат эмульсии (51,6 г/л), в качестве гербицида для подавленк» елнол етиих и многолетних злаковых сорных растений в посевах сои, сахарной свекле, мсрхови и льна-долгуниа при норме расхода I - 3 л/га.

Основной метаболит • Хизалофоп-П (кислота)

Эмпирическая формула. CpHuClNjO*

/*0

Молекулярная масса: 344,8

Химически чистгл Хизалофои-П (кислота) представляет собой белый кристаллический порошок.

Давление паров: 8,7 х 10'⁷ мГ 1а (20° С).

Коэффициент распределения в системе н-октанол - вода: K<,_w logP= 4,4 (при 20°С).

Растворимость в воде 3 мг/л (при 20°С). Хорошо растворима в метаноле, этаноле, ацетоне, ксилоле и умеренно в ацетонитриле.

Относительно стабильна в кислой среде, период полураспада в почве до 60 дней.

Краткая токсикологическая характеристика: Хизапофоп-П (кислота) относится к умеренно опасным веществам по острой и ингаляционной токсичности. Обладает слабым кожно-резорбтивным действием, но вызывает раздражение слизистых оболочек глаз.

Хизалофоп -П является основным биологически активным метаболитом, определяемым в растениях и почве.

2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХИЗАЛОФОП-11-ЭТИЛА И ЕГО ОСНОВНОГО МЕТАБОЛИТА ХИЗАЛОФОПЛ-П В ВОДЕ, ХИЗАЛОФОПА-П В ПОЧВЕ, КОРНЕПЛОДАХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ И МОРКОВИ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ЛЬНА И СОИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ.

2.1. Основные положения 2.1.1 Принцип метода

Методика основана на определении Хизалофоп-П-этила и Хизалофопа-П методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после их экстракции из образцов органическим растворителем и очистки экстракта на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак-С). Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

Мет рологическая характеристика метода представлена в таблицах 1-3.

/У/

Метрологическая характеристика метода

Таблица 1

Метрологические параметры, р-0,95, п~20 Анализируемый объект IJ редел обнаружения , мг/кг(мг/л) Диапазон определяемых концентраций мг/кг (мг/л) Среднее значение определения % Стандартное отклонение, S Доверительный интервал среднею результата, %. ± 5 ± X юп-П-этил Вода 0,0001 0,0001-0,001 96,5 3,0 | 96.5 ±.1,40 Хизапофоп-П Почва 0,1 0,1-1,0 87,5 4,51 87,5+2,11 Корнеплоды сахарной свеклы 0,02 0.02-0.2 83.6 3,55 83.6 ± 1,66 Корнеплоды моркови 0.02 0,02-0,2 84.5 3,66 84,5 ±1,71 Семена льна 0,02 0,02-0,2 82,5 2,17 82,5 ±1,01 Масло льна 0,02 0,02-0,2 86,8 2,53 86,8 ± 1,18 Семена сои 0,02 0,02-0,2 83.1 3,39 83,1 +1,59 Масло сои 0,02 0.02-0,2 80,2 2,27 80,2 +.1,06

Таблица 2 Полнота определения Хизалофоп-П-этила в воде (5 повторностей для каждой концентрации)

Среда Внесено, мг/кг обнаружено, доверительный Полнота (мг/л) мг/кг (мг/л) интервал,+ определения, % 1 2 3 4 5 Вода 0,0001 0,0001 0,000007 100,6 0,0002 0.000194 0,00000-1 97.0 0,0005 0,00048 0,000007 96,4 0,0010 0,00093 0,000024 93,1

Таблица 3 Полнота определения Хизалофопа-П в почве, корнеплодах сахарной свеклы и моркови, семенах и масле льна и сои (5 повторностей для каждой концентрации)

Среда Внесено, mi /кг (мг/л) обнаружено, мг/кг (мг/л) доверительный интервал, + Полнота определения. % 1 2 3 4 5 Вода 0,0001 0,000101 0,000007 101,4 0,0002 0,000196 0,000004 98,0 0,0005 0.00047 0,000007 93,4 0,0010 0,00093 0,000024 93,1 Почва 0,02 0,0163 0,0004 81,6 0,04 0,0409 0,0022 81,8 0,1 0,0807 0,0018 80,7 0.2 0,1592 0,0054 79.6 Корнеплоды сахарной свеклы 0,02 0,0163 0,0005 81,7 0,04 0,0412 0,0006 82,4 0,1 0,0781 0,0011 78,1 0,2 0,1569 0,0007 78,5 Корнеплоды моркови 0,02 0,0181 0,0003 90,6 0,04 0,0324 0,0006 91,1 0,1 0,0835 0,0027 83.5 0,2 0,1696 0,0035 84,8 Семена льна 0,02 0,0168 0,0002 83,4 0,04 0,01698 0,0004 84,9 0,1 0,0869 0,0013 86,9 0.2 0,1772 0,0018 88,6 Масло льна 0,02 0,0158 0,0005 79,2 0,04 0,0416 0,0011 83.3 0,1 0,0845 0,0019 84,5 0,2 0,1692 0,0038 84,7 Семена сои 0,02 0,0166 0,0005 81,2 0,04 0,0345 0,0003 86,1 0,1 0,078 0,0018 77,7 0,2 0,172 0,0015 86,5

Продолжение Таблицы .1

1	2	3	4	5
Масло сои	0,02	0,017	0.0009	83,9
	0,04	0,041	0,0026	81,2
	0,1	0,085	0,0025	85,6
	0,2	0,163	0,0033	81.4

2.1.2.    Избирательность метода.

В предлагаемых условиях метод специфичен н присутствии пестицидов, применяемых при выращивании сахарной свеклы, моркови, льна и сои.

2.2.    Реактивы, растворы, материалы и оборудование.

2.2.1. Реактивы, материалы и растворы.

Хизалофон-П-этил , аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9%, фирма Агро эксперт Труп. Россия.

Хиэамофоп-П, аналитический стандарт, фирма Агроэксперт Труп, Россия.

Ацетон*, осч. 9-5, ТУ 2633-00-4-11291058-94 Ацетонитрил, ТУ 6-09-353•’.-87.

Вода бидистиллированная* *, деионизированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, ч., ТУ 6-09-3375.

Калий марганцовокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75.

Нагрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, х.ч., Г ОСТ 4233-77.

Кислота орто-фосформая, х.ч., ГОСТ 6552-80

Кислота серная концентрированная, ч., ГОСТ 4204-77

Кислота соляная, концентрированная, ГОСТ 857-88

Кислота уксусная, ледяная, ГОСТ 61-75

Хлороформ ч. ГОСТ 20015-74

Эфир диэтиловый ,х.ч. ГОСТ 6262-79

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а.., ГОСТ 223000-76

Подвижная фаза для ВЭЖХ:

1.    Подвижная фаза для определения Хизалофола-П:

ацетонитрил - 450 мл, 0,3% водный раствор орто-фосфорной кислоты - 500 мл

2.    Подвижная фаза для определения Хязалофоп-П-Этила: ацетонитрил - 700 мл, вода - 300 мл

Концентрирующие патроны Диапак-С (0,6 г) ТУ 4215-002-05451931-94

/44

Фильтры бумажные, ' красная лента” ТУ-6-09-1678-86.

Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма

Уотерс.

2.2.2. Приборы и оборудование.

Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или друшй аналогичною типа.

Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, Spherisorb ODS, зернение 5 мкм или аналогичная.

Банна ультразвуковая

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80 Е или аналогичные

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой noipeniHOCTH + 0,038 г, ГОСТ 19491-74.

Воронки делительные на 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Воронки конические, стеклянные диаметром 50-60 мм, ГОСТ 25336-082Е.

Колбы конические, плоскодонные на 500 и 1000 мл, ГОСТ 9737-70.

Колбы мерные на 25,50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Концентраторы грушевидные и круглодонные, объемом 50, 100 и 250 мл, КТУ-100-14/19, ГОСТ 10394-75.

Микрошнриц для жидкостного хроматографа типа Гамильтон на 50-100 мкл.

Насос водоструйный, ГОСГ 10696-75.

11инет ки мерные на 1,0; 2,0; и 5,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналоптчный Стаканы стеклянные на 100-500 мл, ГОСТ 25366-80Е.

Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диалак - С.

2.3. Подготовка к определению.

2.3.1.    Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии. Колонку Spherisorb ODS устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют

при температуре 25*С и скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин в течение 3-4 часов.

2.3.2.    Приготовление стандартных растворов.

Взвешивают 100 мг Хизалофоп-П-Этила в мерной колбе объемом 100 мл. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный растворе концентрацией Хизалофоп-П-Этила 1,0 мг/мл). Затем 1,0 мл стандартного раствора с концентрацией 1,0 мг/мл отбирают пипеткой в мерную колбу объемом 100 мл и доводи

объем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор с концентрацией Хнзалофом-1 Ютила 10,0 мкг/мл). Стандартные растворы можно хранить в холодильнике в течение трех месяцев. Методом последовательного разведения ацетонитрилом ютовяз растворы, содержащие по 5.0; 2.0; 1.0; 0,5 и 0,2 мкг/мл Хизалофоп-11-Этила и используют эти растворы для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы.

Взвешивают 100 мг Хизалофопа-Г1 в мерной колбе объемом 100 мл. Навеску растворяют в очищенном ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор с концентрацией Хизалофола-П 1,0 мг/мл). Затем 1,0 мл стандартного раствора с концентрацией 1,0 мг/мл отбирают пипеткой в мервую колбу объемом 100мл и доводят обьем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор с концентрацией Хизалофона-П 10,0 мкг/мл). Стандартные растворы можно хранить в холодильнике в течение трех месяцев. Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/мл и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы и хроматографического исследования. Для внесения в образцы масличных культур и масла готовят стандартные растворы в гексане методом последовательного разведения из основного раствора н ацетоне. Растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0.1 мкг/мл Хизалофопа П, хранят в холодильнике не более одной недели.

2.3.3. Приготовление растворов для проведения анализа.

2.3.3.1.    Приготовление 0,2% раствора уксусной кислоты в этилацетате

В мерную колбу объемом 100 мл помещают 50 мл этилового эфира уксусной кислоты, туда же добавляют 0,2 мл ледяной уксусной кислоты и доводят до метки этиловым эфиром уксусной кислоты, тщательно перемешивая. Раствор используют для элюцки Хизалофопа-П с картриджа Диапак С.

2.3.3.2.    Подготовка растворителей.

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия (А.Гордон.

Р.Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с.438-439)

Водный бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л и затем перегоняют.

Перед началом эксперимента проверяют чистоту гексана, этилового эфира уксусной кислоты и диэтилового эфира. Для этого досуха упаривают на ротационном вакуумном испарителе 200 мл растворителя , добавляют в концентратор 1 мл ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматшрафируют при 240 нм. При недостаточной чистоте растворителей проводят их очистку.

Гексан встряхивают с копией фироваиной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор нс перестанет обесцвечиваться водой, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А.Гордон, РФорд Спутник химика, Москва. 1976 г., с.441).

Диэтиловый эфир перегоняют.

Этиловый эфир уксусной кислоты промывают равным объемом 5% раствора соды, сушат над безводным хлоридом кальция (Беккер Г.И др. Органикум, Москва 1979 г., с.372) , кипятят в течение 1 часа с прокаленным сульфатом магния и затем перегоняют.

Хлороформ перегоняют.

Перед началом определения всю посуду, необходимую для проведения пробоподготовки, тщательно ополаскивают перегнанным диэтиловым эфиром для удаления следовых количеств органических соединений и высушивают.

2.3.4. Приготовление растворов для жидкостной хроматографии.

Для приготовления подвижной фазы используют свсжеиерегнаиные ацетонитрил и очищенную воду.

1.    О, 3% раствор орто-фосфорной кислоты

В мерную колбу объемом 1000 мл наливают 500 мл очищенной воды, добавляют туда 3,0 мл концентрированной орто-фосфорной кислоты, перемешивают, доводят до метки очищенной водой и тщательно перемешивают.

2.    Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ для определения Хизалофоп-11-этила

В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 700 мл ацетонитрила и 300 мл очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных «азов на 1 минуту. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.

3.    Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ для определения Хизалофопа-П

В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 450 ми ацетонитрила и 500 мл 0.3% раствора орто-фосфорной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин в течение 5 минут, после чего помешают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 5 минут. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.