Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования ____Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указании МУК 4.1.1802—4.1.1820—03; 4.1.1822—4.1.1826—03

Выпуск 5

Издание официальное

Москва • 2007

/гг.

«УТВЕРЖДАЮ»

Главный санитарный врач РФ Первый Зам.    1    Здравоохранения    РФ

Г.Г. Онищенко 2003 г.

МУК 4.1.//.#:'?...............

Дата введении: ^ f    Leo\    х

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХИЗАЛОФОП-Н-ЭТИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ, КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ САХАРНОЙ, СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ СОИ, СЕМЕНАХ И СОЛОМКЕ ЛЬНА ПО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ ХИЗАЛОФОП-Н КИСЛОТЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Вводная часть.

1.1. Краткая характеристика препарата.

Фирма производитель: ЗАО Фирма "Август".

Торгоиос название: МИУРА, КЭ.

Действующее вещество (д.в.): хизалофон-П-этил.

Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: (К)-2-[6-хлорхиноксалии-2-илокси)фе-нокси] нропионовой кислоты этиловый эфир.

Структурная формула д.в.:

Эмпирическая формула д.в.: C19H17CIN2O4.

Молекулярная масса д.в.: 372,8.

Химически чистое вещество: светло-коричневые кристаллы. Температура плавления д.в.: 76-77°С.

/3/

2.7.2. Почва и растительный материал (клубни картофеля, корнеплоды и ботва свеклы).

2.7.2.1. Экстрагирование и очистка экстракта.

Аналитическую пробу массой 25,0±0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон : этанол (80:20), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в У 3-бане в течение 10 минут. После этою экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-кон центратор.

При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон : этанол (80:20) и встряхивают в течение 60 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители экстракта почвы досуха, а экстрактов растительною материала до объема 10-20 мл при температуре +40°С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды и 5,0 мл 10% водною раствора гидроокиси калия. Содержимое колбы перемешивают встряхиванием и выдерживают при температуре +4-6°С в течение 2-х часов. После этою расгпюр фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку емкостью 500 мл. К содержимому воронки добавляют 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 75 мл дихлорметана и встряхивают воронку в течение 2-х минут. После 5-ти минутого отстаивания нижний дихлормстановый слой сливают и отбрасывают. В воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливакл' 75 мл н-гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-ги минутного слега и ван и я нижний водный слой собирают в химический списан емкостью 300 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси токсан : этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя - 1,0-1,5 см) в

/32,

колбу-юонцеитратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентршор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3-5 мл при температуре +40°С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концентратора во флакон (типа пенициллинового) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50°С.

2.7.2.2. Метилирование.

После охлаждения до комнатной температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленною эфирного раствора диазометана (по п.2.4.4.). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6-8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана и проводят количественное определение хизалофоп-11 кислоты по п.2.7.6.

2.73. Семена сои, льна.

2.7.3.1. Экстрагирование и очистка экстракта.

Аналитическую пробу семян массой 25,0±0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон : этанол : бидистилированная вола (70:20:10), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 минут. После этого экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентраггор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон : этанол : бидистилированная вода (70:20:10) и встряхивают в течение 60 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 10-20 мл при температуре +40°С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллярованной воды, 5,0 мл 10% водною раствора гидроокиси калия, перемешивают встряхиванием и помещают в холодильник с гемпературой +4-6°С на 2 часа. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку емкостью 500 мл.

/33

К содержимому воронки добавляют 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 75 мл дихлорметана и воронку встряхивают в течение 2-х минут. После 5-ти минутного отстаивания нижний дихлормстановый слой сливают и отбрасывают. Эту процедуру очистки экстракта повторяют с использованием 50 мл дихлорметана. Далее в воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливают 75 мл н-гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-ти минутного отстаивании нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 300 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрисывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концен-фиронанной соляной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20) и БСфяхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний юксано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0-1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентрагор с объединенным эксграктом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3-5 мл при температуре +40°С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концстратора во флакон (типа пенициллиновою) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50°С.

2.7.3.2. Метилирование.

После охлаждения до комнатиой температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленною эфирною расгвора диазометана (по п.2.4.4.). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6-8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана и проводят количественное определение хизалофоп-П кислоты по п.2.7.6.

2.7.4. Соломка льна.

2.7.4.1. Экстрагирование и очистка экстракта.

Аналитическую пробу соломки массой 5,0±0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон : этанол : бидисталированная вода (70:10:20), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в теме-

/3*

нис 10 минут. После этого экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон : этанол : бидистилированная вода (70:10:20) и встряхивают в течение 60 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 10-20 мл при температуре +40°С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 5,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия, перемешивают встряхиванием и помещают в холодильник с температурой +4-6°С на 2 часа. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 75 мл дихлорметона и встряхивают в течение 2-х минут. После 5-ти минутною отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. В воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливают 75 мл н-гсксана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-ти минутного отстаивания нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 300 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0-1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объели ценным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3-5 мл при температуре +40°С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-ко!щс>гтрогора во флакон

S3 S'

(типи пенициллинового) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50°С.

2.7.4.2. Метилирование.

После охлаждения до комнатной тсмиерагуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленною эфирного раствора диазометана (по п.2.4.4.). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6-8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха о токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооюгана и проводят количественное определение хизалофоп-П кислоты но п.2.7.6.

2.7.5. Масло сои.

2.7.5.1. Экстрагирование и очистка экстракта.

Аналитическую пробу масла массой 10,0±0,1 г растворяют в 50 мл гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе емкостью 100 мл и после этого гексановый раствор масла переносят о делительную воронку емкостью 250 мл. Колбу промывают 50 мл ацетонитрила (насыщенного гексаном) и также переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После 5-ти минутного отстаивания нижний оцегонитрильный слой сливают в голбу-концентратор емкостью 250 мл. В делительную воронку добавляюг еще 50 мл ицетонитрила (насыщенного гоксаном). Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут, отстаивают и нижний ацетонитрильный слой объединяют я колбе-конпептрагоре с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.

Колбу-кон центратор с объединенным ацетонитрильным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10-20 мл при темперагуре +50°С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл дистиллированной воды, 5,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия, раствор перемешивают встряхиванием и выдерживают 2 часа в холодильнике с температурой +4-6°С. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. К содержимому воронки добавляют 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 75 мл дихлормстана и воронку встряхивают в течение 2-х минут. После 5-ти минутного отстаивания нижний дихлормстановый слой сливают и отбрасывают. Эту процедуру очистки экстракта повторяют с использованием 50 мл ди-хлорметана. Далее в воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливают 75 мл н-гсксана и встряхивают содержимое воронки в течение

УЗ 6^е

2-х минут. После 5-ти минутного отстаивания нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 300 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, и верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата нитрия (толщина слоя - 1,0-1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрширование н фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концснтрагор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3-5 мл при температуре +40°С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концентратора во флакон (типа пенициллинового) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50°С.

2.7.5.2. Метилирование.

После охлаждения до комнатной температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора лиазомстана (по п.2.4.4.). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6-8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана и проводят количественное определение хизалофоп-П кислоты по п.2.7.6.

2.7.6. Условия хроматографирования.

Газовый хромакнраф с ТИД.

Колонка хромотографическая капиллярная кварцевая длиной 10 м, внутренним диамезром 0,53 мм с неподвижной фазой HJM (типа SE -30), толщина слоя - 2,65 мкм.

Температура колонки: программирование от 180°С (1 мин) до 280°С (15 мин) со скоростью 10°С/мин.

Температура испарителя: 250°С.

Температура детектора: 290°С.

Расход газов: i-аза-носителя (гелий марки "А") - 5,0 см³/мин, водорода н воздуха к ТИД - 30 и 300 см³/мин соответственно, дополнительного газа (гелий марки "А") к ТИД - 30 см³/мин.

/гз

Давление паров д.в. при 20°С: 0.011 мПа.

Растворимость д.в. (г/л) при 20°С: в воде - 0.0004, в гексане - 5,0 , этаноле - 22, ксилоле - 360, ацетоне - 650.

Стабильность д.н.: устойчив к действию света, разлагается до хизалофол-П кислоты под действием разбавленных кислот и щелочей.

1.2.    Краткая токсикологическая характеристика д.в.

Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - 1180-1210 мг/кг, для мышей -1750-1800 мг/кг. Не окатывает раздражающая действия на кожу.

Гигиенические нормативы:    11ДК    в    воде    водоемов    санитарно-бьгговот

пользования - 0,0001 мг/дм\ ОДК в почве 0,8 мг/кг, МДУ в свекле сахарной, моркови, луке и капусте 0,05 мг/кг, МДУ d свекле столовой - 0,01 мг/кг, ВМДУ в картофеле, томатах, сое (семена, масло) - 0,05 мг/кг.

1.3.    Область применения нреиарага.

МИУРА, КЭ - послснсходовый гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями.

2. Метод определения хизалофоп-П-этила в воде, почве, клубнях картофеля, корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы, семенах и масле сои, семенах и соломке льна по основному мотаболиту хиэалофоп-П кислото с применением капиллярной газожидкостной хроматографии.

2.1.    Основные положении.

2.1.1.    Принцип метода.

Метод основан на количественном определении хизалофол-П кислоты, основного метаболита хизалофоп-П-ттила, и включает извлечение остаточных количеств хизалофоп-11 кислоты из анализируемого объекта органическими растворителями, очистку экстракта перераспределением в системе несмсшивающихся растворителей и метилирование хизалофоп-П кислоты диазометаном. Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора ( ГИД).

2.1.2.    Избирательность метода.

Метод специфичен в присутствии других применяемых в сельском хозяйстве пестицидов. Способ очистки экстрактов, а также применение селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.

/2,*/

2.13. Мстролошческая характеристика метода.

Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица I.

Метрологическая характеристика метода.

Анализируемые объекты Предел обнару жения, мг/дм3, мг/кг Диапазон опреде ляемых концент раций, мг/дм3, мг/кг Среднее значение опреде ления, % Стандартное отклонение S, % Довери тельный интервал среднего, % Вола 0,0001 0,0001- 0,0008 76,2 9,5 8,8 Почва 0,01 0,01-0,08 81,2 4,7 4Д Клубни картофеля 0,01 0,01-0,08 82,6 4,5 3.9 Корнеплоды свеклы 0,01 0,01-0,08 79,7 5,8 5,1 Ботва свеклы 0,01 0,01-0,08 75,8 4,6 3,7 Семена сои, льна 0,01 0,01-0,08 74,8 6,3 5,2 Соломка льна 0,05 0,05-0,4 81,5 4,5 3,2 Масло сои 0,025 0,025-0,2 79,8 7,3 6,0

Таблица 2.

Полнота определения хизалофоп-П кислоты в молельных пробах (п=6)

Анализируемые объекты Внесено, мг/дм3, мг/кг Извлечено, % Доверительный интервал среднего результата, % Вода 0,0001 713 ± 11,4 0,0002 74,3 ±9.6 0,0004 76,6 ±7,5 0,0008 82,5

Почва	0,01 0,02 0,04 0,08	74,1 81,3 83,5 85,7	±5,3 ±4,5 ±3,7 ±3,4
Клубни картофеля	0,01	76,3	±4,8
	0,02	82,7	±4,1
	0,04	83,8	±3,7
	0,08	87,4	±3,1
Корнеплоды свеклы	0,01	73,3	±5,8
	0,02	78,5	±5,3
	0,04	81,5	±4,9
	0,08	85,7	±4,4
Ботва свеклы	0,01	71,8	±4,3
	0,02	73,4	±3,8
	0,04	76,7	±3,5
	0,08	81,3	±3,1
Семена сои, льна	0,01	69,3	±6,3
	0,02	73,8	±5,4
	0,04	76,6	±4,7
	0,08	79,4	±4,2
Соломка льна	0,05	76,1	±3,7
	0,1	80,7	±3,3
	0,2	83,8	±3,1
	0,4	85,4	±2,8
Масло сои	0,025	74,3	±6,8
	0,05	77,6	±6,3
	0,1	81.8	±5,7
	0,2	85,7	±5,2

2.2. Реактивы, растворы, материалы.

Аналитический стандарт хизалофоп-П кислоты.

Азот газообразный нысокой чистоты, ТУ 301-07-25-89.

Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.

Ацетонитрил для хроматографии, хч, ТУ 6-09-4326-76.

Вата медицинская, ТУ 9393-001-00302238-97.

Вода дистиллированная и перегнанная над KMg(>4 и щелочью.

/г 6

Водород газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-27-90. п-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Гелий газообразный (сжатый) очищенный марки "Л", ТУ 51-940-80.

Дихлорметан, хч, ТУ 6-09-2662-77.

Изооктан эталонный, ГОСТ 12433-83.

Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.

Кислота хлористоводородная (соляная), хч, ГОСТ 3118-77.

Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.

У-Нитрозомстилмочсвина, хч, ТУ 6-09-11-1643-82.

Спирт этиловый ректификат (этанол), ГОСТ 17299-78.

Фильтры бумажные, красная лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, белая лепта, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Эфир этиловый (серный), ОСТ 84-2006-88.

23. Приборы, аппаратура, посуда.

Хроматограф газовый с ТИД.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 10 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30), толщина слоя - 2,65 мкм. Аппарат для встряхивания. ТУ 64-1-1081-73 или аналогичный.

Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.

Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Воронки делительные емкостью 2000,500 и 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-76.

Инструментарий для подготовки проб (пинцет анатомический, скальпель, ножницы и др.).

Колбы-концентраторы емкостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы плоскодонные емкостью 100,300 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50,100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колпачки алюминиевые для 1ермегизации флаконов, ГОСТ Р.51314-99.

Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79 или аналогичная. Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

/г *

Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.

Пипетки мерные емкостью 1,2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.

Сито с диаметром отверстий 1,0 мм.

Стаканы химические емкостью 300,1500 мл, ГОСТ 25336-82.

Флаконы стеклянные (тина пенициллиновых) емкостью 5,0 мл, ТУ 64-2-10-87.

Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.

Установка для упаривания растворителей в токе азота.

Установка ультразвуковая "Серьга" УЗМ002 или аналогачная.

Электроплитка, ГОСТ 14919-83 Е.

2.4. Подготовка к определению.

2.4.1.    Подготовка и очистка растворителей.

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.4.2.    Приготовление стандартных растворов.

Основной раствор хизалофоп-П кислоты с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в смеси ацетон : этанол (80:20) 0,01 г аналитического стандарта о мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4-6°С не более трех месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 4,0,2,0 , 1,0 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора хизалофоп-П кислоты соответствующим последовательным разбавлением ацетоном.

Для приготовления калибровочных растворов во флаконы (тина пенициллиновых) емкостью 5,0 мл вносят по 1,0 мл рабочих растворов хизалофоп-П кислоты с концентрациями 0,5 , 1,0,2,0 и 4,0 мкг/мл. Растворители во флаконах упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование хизалофоп-П кислоты.

Во флаконы добавляют по 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора диа-зомстана (п.2.4.4.), закрывают пробками и ставят па 6-8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого этиловый эфир во флаконах уиаривиют досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл изооктана и хроматографируют по п.2.7.6.

■/ZZ

2.43. Построение калибровочного графика.

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 мкл приготовленных по п.2.4.2, растворов, содержащих хизалофоп-П кислоту (в виде хнзалофоп-П-метила) в концентрациях 0,5 , 1,0,2,0 и 4,0 мкг/мл. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный |рафик зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм²) от концентрации хизалофоп-П кислоты в рабочем растворе в мкг/мл.

2.4.4. Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования экстрактов 2-х проб).

W-Иитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0-3,0 мл и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир объемом 4,0 мл вносят в другой флакон емкостью 5,0 мл, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 минут.

После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр.диам. - 1,5-2,0 мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир па всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стснкс 50% водный раствор гидроокиси калия (~ ОД мл) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко желтый цвет.

Внимание ! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо обязательно проводить в работающем вытяжном шкафу.

2.5. Orifop, первичная обработ ка и хранение проб.

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичсств пестицидов", утвержденными 21.08.1979г., № 2051-79.

Пробы воды при наличии озвсси фильтруют через бумажный фильтр красная ленча, подщелачивают 50% водным раствором гидроокиси калия до pH 9-10 и хранят в закрытой стеклянной таре при температуре +4-6°С не более 3 дней.

/&3

Пробы почвы просушивают до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечною света и хранят при комнатной температуре в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Клубни картофеля после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой и из каждого клубня по осевой линии вырезают 1/4 часть. Полученную среднюю пробу измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Для длительного хранения аналитические пробы клубней картофеля помещают в морозильную камеру с температурой -18°С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Корнеплоды свеклы после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой и из каждого корнеплода по осевой линии вырезают 1/8 часть. Полученную среднюю пробу измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Ботву свеклы измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Для длительного хранения аналитические пробы корнеплодов и ботвы свеклы помещают в морозильную камеру с температурой -18°С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой чаре.

Пробы семян сои и льна просушивают до стандартной влажности и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Пробы соломки льна просушивают до воздушно-сухого состояния при комнач ной температуре и отсутствии прямого солнечного свеча и храпят в закрытой полиэтиленовой таре.

Пробы масла сои хранят при +4-6°С в закрытой стеклянной таре.

2.6. Подготовка проб к определению.

Пробы почвы перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пестиком разминаю! крупные комки, из проб пинцетом удаляют включения: корни растений, иисско-мых, камни, стекло, кости, уголь и другие- После этого пробы почвы растирают в ступке пестиком, просеивают через сито с диаметром отверстий 1,0 мм и после перемешивания отбирают усредненную аналитическую пробу.

Пробы семян сои и льна перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пинцетом удаляют включения. Семена измельчают на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.

Пробы соломки льна перед анализом измельчают ножницами и на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.

/3 0

2.7. Проведение определения.

2.7.1.    Вод».

2.7.1.1.    Экстрагирование и очистка экстракта.

Аналитическую пробу воды, подготовленную по п.2.5. (pH 9-10), объемом 1,0 дм³ помещают ы делительную воронку емкостью 2,0 л, добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 100 мл дихлорметаиа и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-ти минутного отстаивания нижний дихлорметано-вый слой сливают и отбрасывают. В воронку добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлорисюю натрия, приливают 100 мл н-гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-ти минутного отстаивания нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 1,5 л, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водную пробу, находящуюся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 2,0 л. В воронку добавляют 100 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лепта со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя - 1,0-1,5 см) в юолбу-концентратор емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 100 мл смеси гексан : этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3-5 мл при температуре +40°С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концентратора во флакон (типа пенициллинового) емкос!ъю 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50°С.

2.7.1.2.    Метилирование.

После охлаждения до комнатной температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (по п.2.4.4.). Флакон закрывают пробкой н ставят на 6-8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 02 мл изооктана и проводят количественное определение хизолофон-П кислоты по н.2.7.6.