Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования ___ Российской    Федерации___

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указаний МУК 4.1.1802—4.1.1820—03;

4.1.1822—4.1.1826—03

Выпуск 5

Издание официальное

Москва • 2007

нтарный врач РФ, хранения РФ ГТ. Онищенко

2003 г.

МУК 4.1

Дата введения: ^с ^ ^См*+*+* 1<пмц

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЭСФЕНВАЛЕРАТА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА И СОИ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ.

1. Вводная часть

Фирма производитель: Август Торговое наименование: Сэмпай Действующее вещество: эсфенвалерат (ISO), Структурная формула:

($)-а-циано-3-феноксибензил-(8)-2-{4-хлорфенил)-3-метилбутират (IUPAC).

Брутто формула: C25H22CINO)

Мол. масса: 419.9.

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество (до 23°С). Температура плавления: 59.0-б0.2°С Давление паров при 25®С - 2Х10^-4 тРа

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K«w log Р - 6.22 (25°С)

Растворимость: в воде при 25°С - 0.002 мг/л; в к-гексане - 10-50, метаноле - 70-100,

в ксилоле, ацетоне, хлороформе, этмлацетате, DMSO, DMFA - > 600 (в г/кг при 25*С). Вещество относительно стабильно на свету, стабильно к гидролизу при pH 5.7 и 9 (25°С).

68

Класс токсичности по ВОЗ - И, ЕПА - II.

Острая пероральная токсичность (LD*)) Для крыс 75-88 мг/кг.

В России гигиенические нормативы для сои и подсолнечника не установлены.

Область применения: инсектицид широкого спектра действия (группа пиретроидов), применяется на зерновых, плодовых, горохе и др.

2. Методика определения эсфеквалератя в семенах и масле подсолнечника и сон методом газожидкостной хроматографии

2.1.    Основные положения

2.1.1.    Принцип метода

Методика основана на извлечении эсфенвалерата из семян и масла подсолнечника и сои водно-ацетоновым раствором или ацетонитрилом с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и на колонке с флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватиого детектора.

2.1.2. Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб и сочетанием условий хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

2.1J. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и 2.

Метрологическая характеристика метода

Таблица 1

Объект анализа Предел обнаруже ния мг/кг Диапазон определяемых концентраций мг/кг Среднее значение определения, %(для каждого объекта п=24) Относитель ное стандартное отклонение S,% Доверительный интервал среднего, пв24, Р=*0.95 Семена сои 0,01 0 Ъ 1 © 79.5 4.4 4.6 Семена подсолнечника 0.01 0.01 -0.1 77.2 5.3 5.9 Масло сои 0.02 0.02 - 0.2 77.4 4.9 5.6 Масло 0,02 0,02 - 0,2 78.2 5.3 5.8 подсолнечника

SB

Полнота определения эсфеавалервгга в семенах и масле подсолнечника и сои (N••5 для каждой конц «предки)

Таблица 2

Среда Внесено, мг/кг Найдено, мг/кг Стандартное отклонение, S, мг/кг Доверительный интервал, (P-0.95, n=6),% Полнота определения, % Семевя сои 0,01 0.0078 8.310* 4.01 78.3 0,02 0.0160 ~1.7-i0r 5.25 80.0 0,05 0.043 3.8 10J 4.10 80.6 0J 0.079 6.310" 5.11 79.0 Среднее 79.5 Семена подсолнечника 0.01 0.0075 в.МО^ 5.07 75.0 0.02 0.0152 2.2-10° 5.12 76.0 0.05 0.038 3.510° 6.06 77.4 0.1 0.080 6.6-10° 4.81 80.2 Среднее 77.2 Масло сои 0.02 0.0160 1.2-10° 4.71 80.0 0.05 0.038 3.4Ю1' 5.68 75.8 0.1 0.077 7.3-10 s 4.21 76.6 0.2 0.155 4. МО* 5.10 77.4 Среднее 77.4 Млело подсолнечника 0,02 0.0160 2.9 10" 5.11 80.0 0,05 0.038 4.0 10" 4.92 75.8 0,1 0.079 7.1 10" 5.04 79.0 0.2 0.156 6.02 78.2 Среднее 78.2

2.2. Реактивы и материалы.

Аналитический стандарт эсфенвалерата 99.8%

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-3534-87.

Азот газообразный в баллонах с редуктором, ТУ-6-16-40-1 4-88.

Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-79.

Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98.

Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.

Кальция хлорид. х.ч., ГОСТ 4161-77.

Насадка для колонки: хроматон N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SH-ЗОили ХЕ-бО(Чсхия) Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свсжспрокаленный.

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Стекловата.

Флорисил 150-250 цш (Merck, Германия), содержание воды <2 5%.

Фосфора пентокекд, ч., МРТУ 6-09-5759-69.

Хлороформ, ч.д.а., ТУ-2631-020-1J29J058-96.

40

Этиловый спирт, ректификат, х.ч., ГОСТ 18300-87 Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.дл., ГОСТ 22300-76.

Элюент для колоночной хроматографии М: гексан-этил ацетат (50.50 но объему). Элюент для колоночной хроматографии №2: гексан-этилацетат (20:80 по объему).

2.3.    Приборы и посуда.

Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с ДЭЗ (ДПР) и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1м; внутренним диаметром 3 мм.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е или аналогичные.

Весы технические ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.

Установка ультразвуковая «Серьга», ТУ 3.836.008.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-IM, ТУ 25-И-917-74 или аналогичный. Микрошприц МШ-10, МШ- ЮМ, ГУ 2-833-106.

Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25 336-82.

Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные на 100 см³, ГОСТ 1774-74.

Колбы мерные на 25,50,100 см³, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1,2, 5, 10 см³ , ГОСТ 22292-74.

Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.

Колонка стеклянная хроматографическая длиной 25 см, диаметром 10 мм.

2.4.    Отбор проб.

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (76 2051-79 от 21.08.79). Для длительного хранения пробы семян подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы семян подсолнечника и сои измельчают на лабораторной мельнице.

2.5. Подготовка к определению.

2.5.1.    Подготовка и очистка реактивов и растворителей.

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с общепринятыми методиками. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташем (на 1 л ацетона 10 г КМл0₄ и 2 г КгССЬ). Ацетонитрил сушат над пснтоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. Этилацстагг промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

2.5.2.    Кондиционирование колонки.

Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SE-30, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа

г/

(азот) при температуре 250°С в течение 8-10 часов.

2.53. Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

Берут точную навеску эсфенвалерата (50 мг), переносит в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят до метки (Стандартный раствор с концентрацией 1.0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0.1,0.2, 0.5, 1.0 и 2.0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему, используя для разбавления гексан. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4°С в течение 6 месяцев, градуировочные растворы - в течение недели.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют градуировочные растворы.

2.5.4. Построение градуировочного графика.

Для построения градуировочного графика (площадь пика концентрация эсфенвалерата в растворе) в хроматограф вводят по I мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации эсфенвалерата в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.5. Подготовка колонка с флорнсклом для очистки экстракта.

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 2S см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты и вносят суспензию 4.5 г флорненла в 20 мл смеси гексан:этилацетат (1:1, по объему), дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 25 мл этой же смеси со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографически о поведения эсфенвалерата на колонке с флорисилом.

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,5 мл стандартного раствора эсфенвалерата с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл элюента №1 и вносят в колонку. Колбу обмывают еще 2 мл элюекта №1 и также вносят в колонку. Затем промывают колонку 25 мл гексана и элюируют эсфенвалерат 60 мл элюента №2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют на содержание эсфенвалерат по п. 2.6.4. Фракции, содержащие эсфенвалерат, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют по п. 2.6.4. Рассчитывают содержание эсфенвалерата в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание:    профиль    вымывания    эсфенвалерата    может    меняться    при

использовании новой партии сорбента.

7&

2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения.

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция эсфеявалсрита из семян соя н подсолнечника

Навеску измельченных на лабораторной мельнице семян массой 10 г помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 50-100 мл смеси растворителей ацетон - вода (в соотношении 1:1) и экстрагируют эсфенвалерат в ультразвуковой ванне в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр («красная лента»). Экстракцию повторяют дважды 30 мл той же смеси. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку и переэкстрагируют эсфенвалерат гексаном трижды порциями по 30 мл. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия. Полученный раствор выпаривают на ротационном испарителе при температуре бани 50°С до полного удаления гексана. Далее проводят очистку экстрактов по п.2.6.3.

2.6.2.    Экстракция эсфенвалерат* из масла подсолнечника

Навеску масла 10 г растворяют в 60 мл гексана и экстрагируют эсфенвалерат 50 мл ацетонитрила в УЗ-ваинс в течение 15 мин. Полученную смесь помещают в делительную воронку объемом 250 мл. После расслоения* нижний ацетонитрильный слой сливают, из верхнего гексанового слоя экстрагируют эсфенвалерат ацетонитрилом еще дважды порциями по 30 мл. К объединенному ацетонитрильному экстракту добавляют воду в соотношении ацетонитрид:вода - 1:4 н переэкстрагируют эсфенвалерат хлороформом трижды порциями по 30 мл. Объединенные хлороформные экстракты сушат над безводным сернокислым натрием и выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 50°С. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и помещают в морозильную камеру с температурой -18°С на 2 часа. Охлажденный ацетоновый раствор декантируют в круглодонную колбу на 10 мл через фильтр «красная лента», после чего фильтр промывают 2 мл ацетона. Полученный раствор упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40°С до полного удаления ацетона. Далее очистку проводят по п.2.6.3.

•В случае образования сравнительно стойких эмульсий можно добавить несколько мл насыщенного раствора хлористого натрия или этилового спирта.

2.6.3.    Очистка экстрактов на колонке с флорисилом

Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.п. 2.6.1 и 2.6.2. экстрактов семян или масла, количественно переносят двумя порциями по 2 мл смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5.). Промывают колонку 25 мл гексана, которые отбрасывают. Эсфенвалерат элюируют 60 мл элюента №2 (гексан-этилацетат ³ 2:8). Весь элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50°С. Сухой остаток растворяют в 1-2 мл гексана и 1 мкл раствора вводят в хроматограф.

2.6.4. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвст-550М» с ДПР (ДЭЗ) или аналогичный.

1. Колонка стеклянная I м х 3 мм, заполненная хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5%

SE-30.

Температура колонки 250°С, испарителя 250°С, детектора 320°С Скорость газа-носителя (азот) через колонку 41 см³/мин.

Шкала электрометра 8x10¹⁰.

Объем вводимой пробы 1 мкл.

Время удерживания эсфенвалерата 3 мин 15 сек.

Линейный диапазон детектирования 0.1-2 нг.

2.6.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание эсфенвалерата в образце семян или масла (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

HjxCxV

X --

HixP

где Hj- высота (площадь) пика эсфенвалерата в стандартном растворе; мм;

Hj- высота (площадь) пика эсфенвалерата в анализируемой пробе, мм;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

Р - навеска анализируемого образца, г;

С - концентрация эсфенвалерата в стандартном растворе, мкг/мл.

Содержание остаточных количеств эсфенвалерата в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор эсфенвалерата 2 мкг/мл, разбавляют.

3.    Требования техники безопасности.

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции «Основные правила безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.

4.    Контроль погрешности измерений.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5.    Разработчики.

Цибульская И.А., Копытова Ф.И.

Всероссийский научно-исследовательский институт зашиты растений (ВИЗР).