4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение концентраций аверсектина С в воздухе и почве

Сборник методических указаний МУ К 4.1.1795а—4.1.17956—03

ББК51.21

060

060 Определение концентрации авсрссктина С в воздухе и почве: Методические указания.—М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России. 2004.—23 с.

1.    Подготовлены Российским государеI венным медицинским университетом (Е. Б. Гугля).

2.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онищенко 11 декабря 2003 г. и введены в действие с 1 марта 2004 г.

3.    Введены впервые.

ББК S1.21

< Минздрав России, 2004 <' Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004

МУК 4.1.17956—03

просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, после чего растирают в ступке до состояния пудры. Навеску массой 2 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 100 см³, заливают 20 см³ этилацетата и оставляют на сутки или же встряхивают колбу в течение часа. Экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия и фильтровальную бумаг) в колбу емкостью 50 см³. Пробу почвы повторно экстрагируют таким же способом, экстракты объединяют. Отбирают с помощью мерного цилиндра 28 см³ экстракта, переносят в круглодонную колбу емкостью 50 см³ и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 10 см³ ацетонитрила и переносят в делительную воронку. Экстракт промывают 5 раз порциями гексана по 10 см³. Гексановые фракции отбрасывают.

Ацетонитрильную фракцию упаривают и снова растворяют в 5 ем³ ацетонитрила и добавляют к этому раствору 10 см³ дистиллированной воды. Раствор пропускают через предварительно активированный патрон ДиапакОб. Сорбированную пробу элюируют с патрона ДиапакС16 20 см³ ацетонитрила через присоединенный патрон Днапак NH. Элюат собирают в пробирку и упаривают досуха. Проводят дериватизацию аналогично том)’, как описано в п. 7.3 для градуировочных растворов.

Количественное определение содержания анализируемого компонента В_1а в растворе проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

9. Вычисление результатов измерений

Концентрацию авермектина В_)а «С» (мг/кг) в почве вычисляют по формуле:

-_ а-в-г ~ б-М-д

а - содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг:

б - объем пробы, взятой для хроматографирования, см³; в - общий объем раствора пробы после проведения химической реакции. см³;

г - объем растворителя при экстракции из почвы, см³; д - объем экстракта, отобранного для упаривания, см³;

М- навеска пробы почвы, подготовленная для анализа, г. Концентрацию аверсектина С «С/» (мг/кг) в почве вычисляют по формуле:

^ ^с С,=- где

20

МУК 4.1.17956—03

С - концентрация авсрмсктина B_ta. мг/м ,

К - массовая доля авсрмсктина В,., в авсрссктинс С согласно ТУ 9383-009-17266133—97.

10. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме:

Протокол Х®

количественного химического анализа авсрссктина в почве

1.    Дата проведения анализа_

2.    Место отбора пробы_

3.    Название лаборатории _

4.    Юридический адрес лаборатории_

Результаты химического анализа

Шифр или № пробы	()нрсделяемый компонент	Концентрация. мг/м5	1 Тогрешностъ измерения, %

Ответственный исполнитель: Научный руководитель:

11. Контроль погрешности измерений

11.1. Метрологическая аттестация методики

Метрологическую аттестацию проводят в соответствии с ГОСТ Р 8.563-96, МИ 2336—95 и МИ 2335—95. Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 3 в Blue зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С. Концентрацию определяют как среднеарифметическое результатов параллельных определений.

Таблица 3

Резуль таты метрологической аттестации методики количественного химического анализа

Диапазон опрс-делаемых концентраций авермектина В|а, мг/кг	Наименование метрологической характеристики
	характеристика iioipeiiiHo- сти А, мг/м3; Р = 0,95	норматив оперативного контроля точно-сти К, мг/м3; Р = 0,90, т-2	норматив оперативного контроля воспроизводимости D, мг/м3; Р = 0,95, т-2
от 0,05 до 1,0	ОД1С + 0,(Ю1	0,25С + 0,002	0,15С +0,002

21

МУК 4.1.17956—03

11.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают две реальные пробы почвы из одного традиционного места отбора одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, набора мерной посуды и т. д.. и получают два результата С, и С₂ анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

\c,-c₂\<d

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины. приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в месяц.

11.3. Оперативный контро й, точности

Опергггивный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы почвы из одного традиционного места отбора одновременно. Подготавливают пробы в соответствии с методикой. Перед этапом экстракции к одной пробе делают добавку анализируемого компонента дС из ргютвора. Величина добавки до.тжна соотвстствовгггь 50—150 % от содержания компонента в пробе. Результаты анализа C_t без добавки и С₂ с добавкой получгиот по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, с одним набором посуды и т. д. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

\С₂-С₁-0С\ <, К

Внутренний оперативный контроль точности проводят нс реже, чем 1 раз в месяц.

Методические указания разработаны: ООО НБЦ «Фармбиомед» (В. Т. Тер-Симонян. Е. Б. Кругляк). Российский государственный медицинский университет (Е. Б. Гугля).

22

МУК 4.1.17956—03

Список литературы

1. Discrcns Н.. Henzelin М. //Journal of Chromatography А.. 1999. V. 833. №1. Р. 13—18.

2.    Руководство по контролю загрязнения атмосферы. РД 52.04.186—96. М.. 1991. 693 с.

3.    Agency for Toxic Substances and Disease Registry. Atlanta. 1989 and 1990. 184 c.

4.    Дмитирисв M. T.. Казнина H. И.. Пинигина И. А. Санитарно-химический анализ загрязняющих веществ в окружающей среде. Справ, изд. М.: Химия, 1989. 368 с.

5.    ГОСТ 8.563-96. ГСИ. Методики выполнения измерений.

6.    ГОСТ 17.2.4.02-81. Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ. М.: Изд-во стандартов. 1981. 3 с.

7.    МИ 2336—95. Рекомендация ГСИ. Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания. Екатеринбург. 1995. 44 с.

8.    МИ 2335—95. Рекомендация ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа. Екатеринбург. 1995. 56 с.

23

Содержание

Определение аверсектана С (но авермектину В,_а) в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.1795а—03........................................................................4

Определение аверсектина С (но авермектину В|_а) в почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.17956—03.............13

Список литературы...................................................................................................23

3

МУК 4 1.17956—03

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г. Г Онищенко

11 декабря 2003 г.

Дата введения: 1 марта 2004 г.

4 1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение аверсекггина С (по авермектину B_ia) в почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК 4.1.17956—03_

Настоящие методические указания устанавливают методику количественного химического анализа почвы для определения в ней авер-мектина В,„ (10Е, 14Т, 16E,2Z)-( 1 R,4S,S\6S,6'R,8R, 12S,20R,21 R,24S)-6'-[(8)]-5ес-бутил]-21,24-гидрокси-5\ 11,13,22-тетраметил-2-оксо-3,7,19-триоксатетрацикло=[ 16,61 ]-4,8О,22,24-пентакоза-0,14,16,22-тетраен-6-спиро-2'(5',6'-дигидро-2Н-пиран)-12-ил-2,6-дидеокси-4-2-(2,60-дидеокси-3-0-метил-а-1-арабино=гексапиранозил)-3=0-метил-а-арабиногекса-пира-нозида) в диапазоне концентраций 0,05—1,0 мг/кг методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

13

Авермектин В_1а- один из восьми компонентов аверсектина С. про-тиво паразитарного препарата, представляющего собой смесь близких в химическом отношении авермектинов - природных 16-членных макро* циклических лаптопов, продуктов жизнедеятельности культу ры Strep-tomycis avermitilis (табл. 1). Компоненты Aj и В] имеют двойную связь в положении 22—23 (см. рисунок), у компонентов А_: и В_: эта связь восстановлена. Содержание компонента В_1а в смеси составляет нс менее 40 %. Регистрационный номер по CAS    73989-17-0

Авсрссктин С - порошок белого или желтовато-белого цвета, легко растворим в хлорированных углеводородах, ацетоне, бензоле, растворим в низших спиртах, практически не растворим в воде, петролеft-ном эфире. Температу ры плавления авермектинов (с разложением) составляют около 150 °С.

Таблица 1

Строение авермектинов

Тип авермектина Эмпирическая формула Молекулярная масса Заместители R5 R20 А|а С49Н74О14 886 ОСН3 С2н5 А2а С48Н70О15 904 ОСН3 С2Н5 в,а С48Н720|4 872 ОН С2н5 В2а С48Н74О15 890 ОН С2Н5 А,ь С4<)Н720|4 872 ОСН3 СНз Л2Ь С49Н74015 890 ОС И з СНз В,ь C4711700,4 858 ОН СНз В2Ь С47Н700,5 876 он СНз

Авсрссктин С обладает общетоксическим действием. Класс опасности - первый. Ориентировочный допустимый уровень (ОДУ) авер-ссктина С (по авсрмсктину В_]а) в почве - 0.1 мг/кг.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, нс превышающей ± 23 %. при доверительной вероятности 0.95.

2. Метод измерений

Для измерения массовой концентрации авермектина B_lit проводят экстракцию вещества из пробы почвы этилацетатом и подготавливают пробу путем осушивания. фильтрации, промывания экстракта гексаном, двукратного упаривания с растворением сухого остатка в ацетонитриле и очистки на патронах Диапак С 16 и Диапак NH. Количественное

МУК 4.1.17956—03

определение авсрмсктина В_!а. одного из компонентов авсрсектина С. проводят методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением флуоресцентного детектора при длинах волн возбуждения и испускания 365 и 470 нм соответственно, предварительно получая флуоресцирующие производные авсрмсктинов путем их дериватизации 1-мстилимидазолом и трифторуксусным ангидридом.

Нижний предел измерения авсрмсктина Bj_a в объеме элюируемой пробы - 2.0 нг. Определению нс мешают другие авсрмсктины.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений. вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

3.1. Средства ишерении

Хроматограф жидкостный с флуоресцентным детектором (Du Pont 8800. США)

Компьютерная программа Мультихром 1.5х Весы аналитические Меры массы

Автоматические пипетки ГН

Колбы мерные, вместимостью 25. 100 и 250 см³

Цилиндр мерный, вместимостью 500 см³

3.2. Вспомогательные устройства Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм и внутренним диаметром 4 мм. заполненная сорбентом Диасорб-130-С16Т с размером частиц 5 мкм (БиоХимМак. Россия)

Патроны концентрирующие Диапак С16 и Диапак NH (БиоХимМак. Россия)

Набор для фильтрации жидкостей (НПФ Биохром. Россия)

Бюксы 50/30

Колбы круглодонные, вместимостью 50 см³ Воронка фильтровальная ВФ-20/16 Воронка делительная Центрифуга низкоскоростная ЦДК-1 Центрифужные пробирки стеклянные, вместимостью 5 см³, с полиэтиленовыми пробками    ГОСТ    17700—74

Ультразвуковой диспергатор УЗДН-1М

15

Морозильная камера или холодильник Вакуумный испаритель ротационный ИР-1М Лопата Бур

Набор сит

Пакеты полиэтиленовые из светозащитной пленки Фарфоровые ступка и пестик

3.3. Материалы Фильтры бумажные «синяя лента»

3.-4. Реактивы

Авсрмсктин В], содержание авсрмсктнна В_1;1

88.88 %    РСО 9340-201 -00-494189—99

ТУ 9383-009-17266133—97 ГОСТ 2230-76 ГОСТ 4166-76

Гексан. чда Спирт метиловый, хч

Ацетонитрил «хтя жидкостной хроматографии»

Вода дистиллированная

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

4. Требования безопасности

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные хзя работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005-88.

При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасностн в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

МУК 4.1.17956—03

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С. атмосферном давлении 84—106 кПа и влажности воздуха нс более 80 %.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят приготовление растворов, подготовку прибора, установление градуировочной характеристики, подготовку концентрирующих патронов, отбор проб.

7.1. Приготовление растворов

Стандартный раствор № 1 авсрмсктнна В] для градуировки. Раствор авсрмсктина В\ с концентрацией 100 мкг/см³ готовят путем растворения 25 мг авсрмсктина В| в ацетонитриле в колбе вместимостью 250 см³. Раствор хранят нс более 2 месяцев в холодильнике.

Стандартный раствор №2 авсрмсктина Bi с концентрацией авсрмсктина В_]а 0.889 мкг/см³ (авсрмсктина В! 10 мкг/см³) готовят путем разведения 1 см³ стандартного раствора № 1 в колбе вместимостью 100 см³ ацетонитрилом. Раствор хранят нс более 2 недель в холодильнике.

Градуировочные растворы готовят разбавлением стандартного раствора № 2 в мерных колбах объемом 25 см³ согласно табл. 2. Вносят пипеткой рабочий раствор в мерные колбы вместимостью 25 см³ в соответствии с табл. 2. доводят уровень ацетонитрилом до метки и перемешивают. Градуировочные растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

Реакционную смесь готовят из трифторуксусного ангидрида и ацетонитрила в соотношении 1 : 2. Смесь готовят в день работы, помещают в холодильник при 0 °С и нс хранят.

Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 490 см³ метилового спирта и 10 см³ воды. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью набора хзя фильтрации.

17

Таблица 2 Градуировочные растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации авермектпна В,, в почве

11омер раствора 1 2 3 4 5 6 7 Объем стандартного раствора № 2, см3 0 1,0 1,5 2,5 5,0 10,0 20,0 Копией 1 рация авермектина 11 |а, мкг/см3 0 0.0352 0,0528 0,0889 0,176 0,352 0,711 С одержи ше авермектш ia В|а в хрома парафируемом объеме пробы, иг 0 2,01 3,02 5,08 10,06 20,11 402

7.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

7.3. Установление градуировочной хара кт ер и cm и ки Градуировочную характеристик), выражающую зависимость площади пика авермектина В|_а (в условных единицах) от количества массы (мкг) авермектина В_!а в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием градуировочных растворов авермектина Bj_a.

Для построения градуировочной характеристики отбирают по 2.0 см каждого градуировочного раствора, помещают в центрифужные пробирки и упаривают досуха на вакуумном испарителе. В каждую пробирку с сухим остатком вносят по 0.5 см³ ацетонитрила, пробирку энергично встряхивают и обрабатывают ультразвуком в течение 30 с. Затем пробирку повторно встряхивают и повторно обрабатывают ультразвуком. В каждую пробирку вносят по 0.05 см³ 1-метилимидазола. Пробирку закрывают, тщательно перемешивают содержимое в течение 5—Юс. обрабатывают ультразвуком, центрифугируют и помещают в холодильник при 0 °С на 10 минут. После охлаждения в пробирку с образцом вносят 0.15 см³ охлажденной реакционной смеси. Пробирку закрывают и выдерживают в холодильнике в течение 1 часа. Общий объем раствора пробы после проведения реакции - 0.7 см³.

Растворы помещают в пробоотборнос устройство хроматографа. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента:    метиловый спирт-вода. 98:2

скорость потока элюента    2.0 см³/мин

объем вводимой пробы    20 мм³

МУК 4.1.17956—03

длины волн флуоресцентного детектора 365/470 нм время удерживания авермсктина Bi„ 9.7 мин

В_]а 12.2 мин

Измеряют площади пика авсрмсктина В_1а с помощью компьютерной программы (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную характеристику.

Проверю градуировочной характеристики проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

7.4. Отбор проб

Пробы почвы отбирают с 2—3 площадок размером 25 м² каждая. С каждой площадки отбирают смешанный образец почвы, состоящий из 5 проб, взятых но методу конверта (по углам и в центре). Пробы отбирают лопатой на глубину пахотного слоя 20—25 см или. при изучении распространения химических загрязнений в глубину, буром на уровнях 0.25—0.5—0.75 и так до 2 м. Почву обрезают лопатой в виде прямоугольной пластины и следят за тем. чтобы в каждый образец попало примерно равное количество почвы верхнего и нижнего слоев. Отобранные пробы помещают в полиэтиленовые мешочки. Пробы пронумеровывают. на схематическом чертеже изучаемой территории делают соответствующие обозначения. Отобранные пробы следует защищать от нагрева и освещения солнечными лучами и срочно направлять в лабораторию с сопроводительным бланком.

Поступившие в лабораторию образцы почвы из одного изучаемого участка взвешивают, затем тщательно перемешивают все вместе и освобождают от посторонних примесей (камни, шлак, растения и т. д.). После перемешивания почву пропускают через сито с отверстиями 3 мм. Из общей массы методом квартования (деления на 4 части и отбора одной или двух противоположных частей) берут 1.0—1.5 кг почвы для исследования.

7.5. Подготовка патронов Непосредственно перед проведением измерения активируют патроны. Для чего снимают заглушки с патронов; через патрон Диа-пак С16 пропускают последовательно 5 см³ ацетонитрила и 5 см³ воды, через патрон Диапак CN - 5 см³ ацетонитрила.

$. Выполнение измерений

Приготовленные соответствующим образом образцы почвы высушивают до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре.

19