4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение концентраций аверсектина С в воздухе и почве

Сборник методических указаний МУ К 4.1.1795а—4.1.17956—03

ББК51.21

060

060 Определение концентрации авсрссктина С в воздухе и почве: Методические указания.—М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России. 2004.—23 с.

1.    Подготовлены Российским государеI венным медицинским университетом (Е. Б. Гугля).

2.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онищенко 11 декабря 2003 г. и введены в действие с 1 марта 2004 г.

3.    Введены впервые.

ББК S1.21

< Минздрав России, 2004 <' Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004

МУК 4.1.1795а—03

10. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол №

количественного химического анализа авсрссктина в воздухе

1.    Дата проведения анализа_

2.    Место отбора пробы_

3.    Название лаборатории _

4.    Юридический адрес лаборатории _

Результаты химического анализа

Шифр или № пробы	()пределяемый компонент	Концен грация, мг/м3	1 Ьгрешиость измерения, %

Ответственный исполнитель: Научный руководитель:

11. Контроль погрешности измерений

//./. Метрологическая аттестация методики

Метрологическую аттестацию проводят в соответствии с ГОСТ Р 8.563-96. МИ 2336—95 и МИ 2335—95 (см. прилож. 2). Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 3 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С. Концентрацию определяют как среднеарифметическое результатов параллельных определений.

Таблица 3

Результаты метрологической аггестацип методики количественного химического анализа авермекшна В,,

Диапазон определяемых концентраций авермектина В,а, мг/м3	I Именование метро, ютческой характеристики
	характеристика погрешности А, мг/м5;? = 0,95	норматив онсра-швного коигро.тя точности К, мг/м ; Р = 0,90, т-2	норматив oiiqxmmuo-го кошроля военроиз-во;щмости D, мг/м3; Р = 0,95, т-2
от 0,001 до 0,02	0,20С +0,00005	ОД 1C+ 0,00006	0,12С+0,00014

11.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха из

МУК 4.1.1795a—03

одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики разными аналитиками, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, набора мерной посуды и т. д.. и получают два результата С/ и С₂ анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

\с,-с₂\ йО

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины. приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят нс реже, чем 1 раз в месяц.

11.3. Оперативный контроль точности

Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, делают добавку анализируемого компонента SC из раствора, нанося его на фильтр. Результаты анализа С/ без добавки и С₂ с добавкой полу чают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, с одним набором посуды и т. д. Величина добавки дС должна соответствовать 50—150% от содержания компонента в пробе, а величина С₂ нс должна выходить за верхнюю границу диапазона измерения.

Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

|С₂-С,-дС\ < К

Внутренний оперативный контроль точности проводят нс реже, чем 1 раз в месяц.

Методические указания разработаны: ООО НБЦ «Фармбномед» (В. Т. Тер-Симонян. Е. Б. Кругляк). Российский госу дарственный медицинский университет (Е. Б. Гугля).

МУК 4.1.17956—03

Список литературы

1. Discrcns Н.. Henzelin М. //Journal of Chromatography А.. 1999. V. 833. №1. Р. 13—18.

2.    Руководство по контролю загрязнения атмосферы. РД 52.04.186—96. М.. 1991. 693 с.

3.    Agency for Toxic Substances and Disease Registry. Atlanta. 1989 and 1990. 184 c.

4.    Дмитирисв M. T.. Казнина H. И.. Пинигина И. А. Санитарно-химический анализ загрязняющих веществ в окружающей среде. Справ, изд. М.: Химия, 1989. 368 с.

5.    ГОСТ 8.563-96. ГСИ. Методики выполнения измерений.

6.    ГОСТ 17.2.4.02-81. Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ. М.: Изд-во стандартов. 1981. 3 с.

7.    МИ 2336—95. Рекомендация ГСИ. Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания. Екатеринбург. 1995. 44 с.

8.    МИ 2335—95. Рекомендация ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа. Екатеринбург. 1995. 56 с.

23

Содержание

Определение аверсектана С (но авермектину В,_а) в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.1795а—03........................................................................4

Определение аверсектина С (но авермектину В|_а) в почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.17956—03.............13

Список литературы...................................................................................................23

3

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

11 декабря 2003 г.

Дата введения: 1 марта 2004 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение аверсектина С (но авермектину Bi„) в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.1795а—03

Настоящие методические указания устанавливают методику количественного химического анализа воздуха для определения в нем авер-мектина В(10Е, 14Т, 16E,2Z)-( 1 R,4S,S\6S,6'R,8R, 12S,20R,21 R,24S)-6'-[(S)]-sec-6y™n]-21,24-гидрокси-8', 11,13,22-тетраметил-2-оксо-3,7,19-три-оксатетрацикло=[ 16,61 ]-4,8О,22,24-пентакоза-0,14,16,22-тетраен-6-спиро-2'(5',6'-дигидро-2Н-пиран)-12-ил-2,6-дидеокси-4-2-(2,60-дидеокси-3-0-метил-а-1-арабино=гексапиранозил)-3=0-метил-а-а^абиногекса-пирано-зида) в диапазоне концентраций 0,001—0,02 мг/м методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

4

МУК 4.1.1795a—03

Авсрмсктин В)_а - один из восьми компонентов аверсектина С. про-тнвопаразитарного препарата, представляющего собой смесь близких в химическом отношении авсрмсктинов - природных 16-членных макро-циклических лактонов. продуктов жизнедеятельности культуры Strep-(omycis avermitilis (табл. 1). Компоненты Aj и В] имеют двойную связь в положении 22—23 (см. рисунок), у компонентов А_; и В₂ эта связь восстановлена. Содержание компонента В_1а в смеси составляет нс менее 40 %.

Регистрационный номер по CAS    73989-17-0

Аверсектин С - порошок белого или желтовато-белого цвета, легко растворим в хлорированных углеводородах, ацетоне, бензоле, растворим в низших спиртах, практически нс растворим в воде, петролейном эфире. Температуры плавления авермектинов (с разложением) составляют около 150 °С.

Таблица 1

Строение авермектинов

Тип анермекпша Эмпирическая формула Молекулярная масса Заместители Rs R20 А|а С4^Н?40|4 886 ОСН3 С2Н5 А2а С48Н7бО|5 904 ОСН, С2Н5 В,а С48Н72014 872 ОН С2Н5 В2а С48Н74015 890 ОН с2н5 А|ь С49Н720,4 872 осн3 СН3 А2ь С49Н74О15 890 ОСНз СНз Bib С47Н7оО|4 858 он СНз в2Ь C47I 17qO|5 876 он СНз

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

Аверсектин С обладает общетоксическим действием. Класс опасности - первый. Предельно допу стимая среднесуточная концентрация авср-ссктина С (по авсрмсктину Bi„) в атмосферном возду хе - 0.002 мг/м³.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, нс превышающей ± 25 %. при доверительной вероятности 0.95.

2. Метод измерений

Измерение массовой концентрации авсрмсктина Bj_a основано на улавливании препарата аверсектина С из возду ха и концентрировании на фильтре, экстракции с фильтра этиловым спиртом, упаривании досу-

5

ха, получении флуоресцирующих производных авермектинов путем их дериватизации 1 -метилимидазолом и трифторуксусным ангидридом в ацетонитриле, с последующим количественным определением производного авсрмсктнна В_)а методом обращенно-фазовой ВЭЖХ путем элюирования водно-органическим элюентом с аналитической колонки Диасорб С-16Т и детектирования флуоресцентным детектором при длинах волн возбуждения и испускания 365 и 470 нм соответственно.

Нижний предел измерения авсрмсктнна В_]а в объеме элюируемой пробы - 2.0 нг. Определению нс мешают другие авермектины.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений. вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

3.1. Средства измерений Хроматограф жидкостный с флуоресцентным детектором (Du Pont 8800. США)

Компьютерная программа Мультихром 1.5х Весы аналитические Меры массы

Автоматические пипетки ГН Пипетки, вместимостью 1. 5 и 10 см³ Колбы мерные, вместимостью 25 и 100 см³

3.2. Вспомогательные устройства Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм и внутренним диаметром 4 мм. заполненная сорбентом Диасорб-130-С 16Т с размером частиц 6 мкм (БиоХимМак. Россия)

Пробоотборнос устройство АПВ-4-220В-40 Фнльтродержатель Воронка фильтровальная ВФ-20/16 Набор для фильтрации жидкостей (НПФ Биохром. Россия)

Пробирки с пришлифованными пробками Бюксы 50/30

Центрифуга низкоскоростная Центрифужные пробирки стеклянные, вместимостью 5 см³ с полиэтиленовыми пробками Ультразвуковой диспергатор УЗДН-1М Морозильная камера или холодильник

Вакуумный испаритель ротационный ИР-1М    ТУ 25-11-917—76

МУК 4.1.1795а—03

3.3. Материалы

Фильтры АФА-ВП-20

3.4. Реактивы

Авсрмсктин В], содержание авермектина В_)а 88.88 %

Авсрссктин С. содержание авермектина В_)а нс менее 40 %

Спирт метиловый, хч Спирт этиловый, хч 1-Мстилимидаэол импортный (Mcrk. Германия)

Трифторуксусный ангидрид импортный (Mcrk.

Германия)

Ацетонитрил «для жидкостной хроматографии» ТУ 6-09-14-2167—84 Вода дистиллированная    ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

4. Требования безопасности

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005-88.

При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасностн в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к' квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 10) °С. атмосферном давлении 84—106 кПа и влажности воздуха нс более 80 %.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят приготовление растворов, подготовку прибора, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7

7.1. Приготова ение растворов

Стандартный раствор ЛЬ 1 авермектина В, для градуировки. Раствор авермектина В] с концентрацией 100 мкг/см³ готовят путем растворения точной навески 5.0 мг рабочего стандартного образца в этиловом спирте в мерной колбе объемом 50 см³. Раствор хранят не более 2 месяцев в холодильнике.

Стандартный раствор ЛЬ 2 авермектина В! с концентрацией авср-мектина Bj_a 0,889 мкг/см³ (авермектина В| 1.0 мкг/см³) готовят путем разведения 1 см³ стандартного раствора № 1 этиловым спиртом в мерных колбе объемом 100 см³. Раствор хранят нс более 2 недель в холодильнике.

Реакционную смесь готовят из трифторуксусного ангидрида и ацетонитрила в соотношении 1 : 2. Смесь готовят в день работы, помещают в холодильник при 0 °С и нс хранят.

Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 98 см³ метилового спирта и 2 см³ воды. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью устройства для фильтрации и фильтров «Дюрапор» и дегазируют под вакуумом.

Градуировочные растворы готовят разбавлением стандартного раствора № 2 этиловым спиртом в мерных колбах объемом 25 см³ согласно табл. 2. Вносят пипеткой рабочий раствор в мерные колбы вместимостью 25 см³ в соответствии с табл. 2. доводят уровень этиловым спиртом до метки и перемешивают. Градуировочные растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

Таблица 2

Гра в ировочные растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации авермектина Bj_a в воздухе

11омср раствора	1	2	3	4	5	6	7
Объем стандартного рас-твора № 2, см3	0	1,0	1,5	2,5	5,0	10,0	20,0
Ко* п ici rrpai щя авермектш m В la, МКГ/СМ3	0	0,0352	0,0528	0,0889	0,176	0,352	0,711
Содержание авермектина В,а в хроматографируемом объеме пробы, иг	0	2,01	3,02	5,08	10,06	20,11	40,2

7.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

МУК 4.1.1795а—03

7.3. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристик), выражающую зависимость площади пика авермсктина B_!a (в условных единицах) от количества массы (мкг) авермсктина Bi_a в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием градуировочных растворов авермсктина В|.

Для построения градуировочной характеристики отбирают по 2.0 см³ каждого градуировочного раствора, помещают в центрифужные пробирки и упаривают досуха на вакуумном испарителе. В каждую пробирку с сухим остатком вносят по 0.5 см³ ацетонитрила, пробирку энергично встряхивают и обрабатывают ультразвуком в течение 30 с. Затем пробирку повторно встряхивают и повторно обрабатывают ультразвуком. В каждую пробирку вносят по 0.05 см³ 1-мстилимидазола. Пробирку закрывают, тщательно перемешивают содержимое в течение 5—Юс. обрабатывают ультразвуком, центрифугируют и помещают в холодильник при 0 °С на 10 мин. После охлаждения в пробирку с образцом вносят 0,15 см³ охлажденной реакционной смеси. Пробирку закрывают и выдерживают в холодильнике в течение 1 часа. Общий объем раствора пробы после проведения реакции - 0.7 см³.

Растворы помещают в пробоотборнос устройство хроматографа. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента:    метиловый спирт-вода. 98:    2

скорость потока элюента    2.0 см³/мин

объем вводимой пробы    20 мм³

длины волн флуоресцентного детектора 365/470 нм время удерживания авермсктина В_)в 9.7 мин

В\_Л 12,2 мин

На полученных хроматограммах измеряют площадь пика авермек-тина В|_а с помощью компьютерной программы (в условных единицах). Анализируют 6 растворов разных концентраций, проводя нс менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную характеристику.

Проверю градуировочной характеристики проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

7.4. Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят согласно ГОСТ 17.2.3.01-86. Воздух с обл>емным расходом 20 дм³/мин аспирнруют через фильтр АФА ВП-20. Для измерения '/г ПДК достаточно отобрать 350 дм³. Пробы можно хранить не более десяти суток в защищенном от света месте.

МУК 4.1.1795а—03

Отбор проб сопровождается составлением акта отбора с указанием, при какой температу ре и давлении он проводился.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку и приливают пипеткой 10 см³ этилового спирта. Периодически встряхивая, выдерживают в течение 10 мин. Экстракт фильтруют через воронку с пористой пластинкой № 1 или № 2 и сливают в пробирку с притертой пробкой. Степень экстракции с фильтра 93 %. Отбирают 2 см³ экстракта, помещают в центрифужную пробирку и упаривают досуха. Датее проводят химическую трансформацию и хроматографический анализ, аналогично тому, как описано в п. 7.3 для градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого компонента В,., в растворе проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

9. Вычисление результатов измерений

Концентрацию авсрмсктина В_1а «С» (мг/м³) в воздухе вычисляют по формуле:

а-в-г б-V-d'

а - содержание авсрмсктина В_1а в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг; б - объем пробы, взятый для хроматографирования, см³: в - общий объем раствора пробы после проведения химической реакции. см³:

г - объем жидкой пробы после экстракции с фильтра, см³; д - объем жидкой пробы, взятой для упаривания, см³:

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, дм³ (см. прилож. 2).

Концентрацию авсрссктина С «С;» (мг/м³) в воздухе вычисляют по формуле:

С - концентрация авсрмсктина Bi_a. мг/м³;

К - массовая доля авсрмсктина В_1а в авсрссктинс С согласно ТУ 93834)09-17266133—97.

10