Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКЕТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.1417 - 03; 4.1.1421 - 4.1.1425 -03; 4.1.1473 - 4.1.1477 - 03; 4.1.1785 - 4.1.1792 - 03

Выпуск 3 Част ь 9

Издание официальное

Москва • 2007

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации.

Первый заместитель Мкнистф здравоохранения Рос<*Аю*ой федерации

Г.Г. Онищенко

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по измерению концентрации дифлубен зурона в воздухе рабочей зоны методами высокоэффективной жидкостной и газожидкостной хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают методику количественного химического анализа воздуха рабочей зоны методами высокоэффективной жидкостной и газожидкостной хроматографии для определения в нем массовой концентрации дифлубензурона в диапазоне 0,3 - 3,0 мг/м\

Дифлубензурон - действующее вещество препарата ДИМИЛИН, СМ (250 г/кг), фирма производитель Юнирояль Кемикал Ко Лтд, Великобритания. 3-(2,6-Дифторбензоил)-1 -(4-хлорфенил)мочсвина (IUPAC)

С,₄Н, CIF2N2O2 Мол. масса 310.7

Белое кристаллическое вещество. Температура плавления: 239°С.

Давление паров при 20° С : менее 1,3x10'⁵ Па. Растворимость в органических растворителях (г/дм³): при 20°С: ацетон - 6,5; при 25°С: димстилформамид - 104,0; диметилсульфоксид - 120,0; диоксан - 24,0; метанол - 1,0; дихлорметан -0,6. Растворимость в воде при 25° С - 0,08 мг/дм¹.

Может присутствовать в воздухе рабочей зоны в виде аэрозоля.

$ЬоУг

Время выхода дифлубеизурона: 5,8 -6,0 мин Линейный диапазон детектирования: 2-20 нг

Градуировочный график проверяют ежедневно по 1-2 -м стандартным растворам различной концентрации. Если получаемые результаты отличаются более, чем на ±5% отданных, заложенных на графике, !радуировочный график строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

7.6.2. Метод ГЖХ

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных растворах дифлубеизурона. Она выражает зависимость высоты пика (мм) от концентрации дифлубеизурона в растворе (мкг/см³) и строится с использованием серии стандартных растворов № 2, состоящей из 5-ти растворов №№ 2-6, приготовленных по н. 7.3.2.3. В испаритель прибора вводят по 1 мм³ данных градуировочных растворов и анализируют в условиях хроматографирования по п.

7.6.2.1.

7.6.2.1. Условия хроматографирования Хроматограф газовый “Цвет - 560” с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов

Хроматографическая колонка длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная 5% OV-210 на Супелкопорте (0,16-0,20 мм)

Температура термостата колонки - 130°С детектора - 300°С испарителя - 150°С Скорость газа-носителя (азота) - 25 ± 1 мл/мин Рабочая шкала электрометра 64x10¹⁰ ом Скорость движения ленты самописца 200 мм/час Объем вводимой пробы - I мм³

Время удерживания производного дифлубеизурона - 2 мин 35 сек Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг

Градуировочный график проверяют ежедневно по 1-2 -м стандартным растворам различной концентрации. Если получаемые результаты отличаются более, чем на *11% от данных, заложенных на графике, градуировочный график строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

h)%

К. Выполнение измерений

8.1. Подготовка проб к анализу

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 см³, заливают 10 см³ ацетона, оставляют на 10 минут, периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 см³.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 40 - 45° С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха . Сухой остаток при проведении измерений методом ВЭЖХ ( по п. 7.6.1.1.) растворяют в 5 см³ подвижной фазы, центрифугируют (фильтруют через слой стекловаты, помещенный в конусную химическую воронку), хроматографируют. При проведении измерений методом ГЖХ (но п. 7.6.2.1.). сухой остаток подвергаю! 1идролизу и дериватизации в соответствии с пп. 8.2 и 8.3. и хроматографируют.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Измеряют площадь или высоту пика, при ручной обработке хроматограмм высоты пиков измеряют на хроматограмме с помощью линейки с точностью до 0,5 мм.

Перед анализом испытываемой пробы проводят хроматографирование холостой пробы - экстракта неэкспонированного филыра.

Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³разбавляюг подвижной фазой для ВОЖХ или бензолом (ГЖХ).

8.2. Гидролиз дифлубензурона

В конический концентратор емкостью 100 см³ помещаю! стандартный раствор дифлубензурона или экстракт с фильтра, упаривают до влажного остатка, отдувают растворитель потоком воздуха, вносят 60 см³ 3,6 М раствора соляной кислоты и в течение 6-ти часов выдерживают на водяной бане при кипении с обратным холодильником. После охлаждения к реакционной массе добавляют 12,5 N раствор гидроксида натрия до pH 10, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³ и проводят экстракцию 50 см³ бензола при встряхивании в течение 1 мин. Процедуру экстракции повторяют грижды. Бензольные слои собирают, пропуская через обезвоженный сульфат натрия (весом около 20 г), помещенный на бумажный филыр. По окончании сульфат натрия промывают гремя порциями бензола по 4 см³.

cb9

Объединенный бензольный экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 20-30 см³ и подвергают дериватизации.

8.3. Дериватизация

К бензольному раствору в концентраторе добавляют 0,5 см³ ангидрида трифторуксусной кислоты и выдерживают с обратным холодильником в течение 3-х часов при темперагуре 50°С на водяной бане или в термостате. После охлаждения раствор упаривают до 5-7 см³, переносят в градуированную пробирку вместимостью 10 см³ и добавляют бензол до объема 10 см³.

9. Обработка результатов измерений

Массовую концентрацию дифлубензурона в пробе воздуха, X, мг/м³ рассчитывают по формуле:

X = С * W/V₂₀, где X - содержание дифлубензурона в пробе воздуха, мг/м³;

С - концентрация дифлубензурона в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см,

V20    -    объем    пробы    воздуха,    отобранный для анализа, приведенный к

стандартным условиям (давление 760 мм рт.ст., температура 20 ° С), дм ³.

V₂₀= 0,386    ut/(273+T), где

Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиразор), град.С,

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт.ст. и - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин, t - длительность отбора пробы, мин.

Если пробоотборное устройство фиксирует объем воздуха (V, дм³), в вышеприведенной формуле произведение ut заменяется на V.

Идентификация и расчет концентрации дифлубензурона в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, подключенного к хроматографу.

10. Оформление результатов измерений

Результат MiMM'iwf minimum fiMHMHt и ли» учини*, ii|»«iy»‘Miii|«ti»iiiomnx ем»

НСНОЛЫОПППИР, НрЩ^ГНИМИМ N »НМ*

• pwyitMut анализ X (мг/м⁴), мярикт^шитика иш рошиооти А. %. Р - 0,95 или Х± Л mi/m* , Н-0,95.1 да

Л *    ^    ,    мг/м¹

100

За результат uiiiuimn (X) принимается среднее арифметическое результатов пироддльных определений Х| и Х2 (X-(Xi + Хг)/2), расхождение между которыми не превосходит значений норматива оперативного контроля сходимости d. Значения норматива оперативного контроля сходимости приведены в таблице.

Результат измерений должен оканчиваться тем же десятичным разрядом, что и гклрешиость.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

12. Разработчики

Юдина Т.В., Волчек С.И.., Волкова В.Н. (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.)

m

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LDso) для крыс и мышей - более 4600 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - более 10000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LK$o) для крыс - более 35 мг/дм¹.

Область применения препарата

Дифлубензурон используется в качестве инсектицида гормонального действия, нарушающего процесс образования хитина в организме насекомых. Активен против большого числа насекомых, обладает, в основном, кишечным действием. Рекомендуется для борьбы с болезнями плодовых культур (яблоня), овощных (капуста), в лесопосадках для защиты грибов, борьбы с личинками комаров.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 3,0 мг/м\

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей ±25%, при доверительной вероятное™ 0,95.

2. Метод измерения

Измерения концентраций дифлубензурона выполняют методами высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором или газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором ноегоянной скорости рекомбинации ионов после кислотного гидролиза дифлубензурона с последующей обработкой трнфторуксусным ангидридом.

Концстрнронапис дифлубензурона из воздуха осуществляют на бумажные фильтры “синяя лента”.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 0,1 нг (ГЖХ) и 2 нг (ВЭЖХ).

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

нации ионов (ДПР) с пределом детектирования но линдану 4 х 10 *14 г/см3	ТУ 2.722.150
Жидкостной хроматограф Perkin-Elmer (США) с ультрафиолетовым детектором Микрошприцы типа МШ-1	Номер Госреестра 15945-97
вместимостью 1мм3	ТУ 5Е2-833-024
Аспирационное устройство ЭА-1	ТУ 25-11-1414-78
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104-80Е
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0 - 55°С	ТУ 215-73Е
Мерные колбы вместимостью 50, 100 и 1000 см3	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки вместимостью 1,2,5 и 10 см3	ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные со шлифом вместимостью 10 см3	ГОСТ 1770-74Е

Цилиндры мерные вместимостью 100 и 250 см³    ГОСТ    1770-74Е

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характсристи кам и.

3.2. Реактивы

Дифлубензурон с содержанием действующего вещества 99,0% (Юнироял Кемикал Лтд, Великобритания)

Азот особой чистоты, из баллона    ГОСТ    9293-79

Ангидрид трифторуксусной кислоты (Ricdcl-de Haen А6) Ацетон, ч.д.а.	ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч. Вода бидисгиллироьаннам или деионизованная Вода дистиллированная	ТУ 6-09-4326-76
Бензол, х.ч.	ГОСТ 5955-75
н-Гексан, х.ч.	ТУ 6-09-4521-77
Натрий гидроксид, х.ч.	ГОСТ 4221-76

JboS

Метиловый спирт, х.ч.

Натрий сернокислый безводный, х.ч.

Соляная кислота, х.ч.

Супелкопорт с 5% OV-210 (0,16 - 0,20 мм), Хемалол, Чехия

3.3. Вспомогательные устройтва Бумажные фильтры “синяя лента”, обеззоленные, предварительно промытые ацетоном или этанолом Воронки химические, конусные, диаметром 34-40 мм Воронка Бюхнера, диаметром 20 мм Водяная баня Груша резиновая Колба Бунзена

Колбы грушевидные со шлифом, вместимостью 100 см³ Колба плоскодонная со шлифом вместимостью 300 см³ Насос водосгруймый 11робирки центрифужные Ректификационная стационарная установка РУ Г Ротационный вакуумный испаритель

ИР-1М

Стаканы химические, вместимостью 100 см³    ГОСТ    25336-82Е

(Стекловата Стеклянные палочки

Термостат сухопоздушный    ТУ    64-1-1411-76F

Установка для перегонки ра<яверителей при атмосферном лав лен и и

Филыродсржатели пластмассовые, диаметром 18-20 мм

Холодильник водяной обратный    ГОСТ 9737-70

Хроматографическая колонка стеклянная,

длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм

Хромато1рафическая колонка стальная,

длиной 25 см, внутренним диаметром

4    мм, содержащая Zorbax ODS, зернением

5    мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 мм³

Допускается применение другого оборудования и хроматографических колонок с техническими характеристиками, обеспечивающими аналогичное разделение.

4. Требования безопасности

4.1. При работе с реактивами соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, лекговоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием газового и жидкостного хроматографов соблюдаю! правила электробсзопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

5. Требовании к квалификации операторов

К выполнению измерений допускаю! лиц, имеющих квалификацию нс ниже инжснсра-химика, с опытом работы на газовом и жидкостном хроматографах.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях согласно ГОСТу 15150-69 при температуре воздуха 20±5 °С, атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст. и влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на газовом и жидкостном хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к приборам.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений осуществляют следующие работы: подготовка органических растворителей, приготовление растворов, подготовка хроматографических колонок и установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7. У. Метод ВЭЖХ

7.1.1.    Подготовка органических раствориелей

7.1.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.1.2. Очистка ацетона

Растворитель сушат над молекулярными сигами 4А и подвергают фракционной перегонке на ректификационной колонне, целиком собранной из стекла с числом теоретических тарелок нс менее 30. До начала отбора главной фракции приемник несколько раз промывают дистиллятом. Перегонку продолжают до тех пор, пока в сосуде для перегонки нс останется приблизительно 100 см³ ацетона. Температуру водяной бани следует снижать по мере уменьшения объема ацетона, во всех случаях она нс должна превышать температуру кипения ацетона более чем на 20°.

7.1.1.3. Контроль чистоты ацетона

В круглодониую колбу вместимостью 100 см³ помещают 30 см³ ацетона, упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха, в колбу вносят 5 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 7.1.2.) и анализируют раствор в условиях хромаго1рафирования по п. 7.6.1.1.

7.1.2.    Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 600 см' ацетонитрила, доводят объем до метки дистиллированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Xo^f

7.2. Метод ГЖХ 7. 2.1. Приготовление 12,5 N раствора гидроксида натрия Навеску гидроксида натрия массой 50,0 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

7. 2.2. Приготовление 3,6 М раствора соляной кислоты В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 30 см³ соляной кислоты, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают.

7. 3. Приготовление стандартных растворов

7.3.1.    Серия №1 (метод ВЭЖХ)

7.3.1.1.    Исходный раствор дифлубензурона для градуировки (концентрация 1мг/см³). В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают 0,0500 г дифлубензурона, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

7.3.1.2.    Раствор №1 дифлубензурона для градуировки (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1 см³ исходного стандартного раствора дифлубензурона (п. 7.3.1.1.) с концентрацией 1 мг/см³, разбавляют ацетонитрилом до мегки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7 3.1.3. Рабочие растворы №№ 2-6 дифлубензурона для градуировки (концентрации 0.1-1,0 мкг/см').

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,0;    5,0 и 10,0

см³ стандартного раствора №1 (л. 7.3.1.2.) с концентрацией 10 мкг/см³, доводят до метки подвижной фазой для ВЭЖХ (и. 7.1.2.) и тщательно перемешивают. Получают рабочие растворы №№ 2-3, 5-6 с концентрацией дифлубензурона 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см³, соответственно. Раствор № 4 с концентрацией дифлубензурона 0,3 мкг/см³ готовят аналогично, помещая в мерную колбу емкостью 50 см³ 1,5 см³ раствора № I (и.

7.3.1.2.). Растворы хранятся в холодильнике в течение суток.

7.3.2.    Серил Ns 2 (метод ГЖХ)

7.3.2.1. Исходный раствор дифлубензурона для градуировки (концентрация ЮОмкг/см³) В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,0100 г

&об~

дифлубензурона, доводят до метки метиловым спиртом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 2-х недель.

7.3.2.2. Раствор №1 для градуировки ( соответствует концентрации дифпубензурона 20 мкг/см³). В конический концентратор вместимостью 100 см³ помещают 2 см³ исходного стандартного раствора дифлубензурона (п. 7.3.2.1.) с концентрацией 100 мкг/см³, растворитель отдувают потоком теплого воздуха и проводят гидролиз и дериватизацию согласно п.п. 8.2. и 8.3, соответственно. Раствор полученного производного упаривают до 5-7 см³, переносят в мерную пробирку и добавляют бензол до объема 10 см³. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7.3.2.3. Рабочие растворы №№ 2-6 для градуировки (соответствуют концентрации дифпубензурона 0.1-1.0 мкг/см³).

В две мерные колбы вместимостью 100 см³ вносят с помощью пипетки 0,5 и 5,0 см³ раствора № 1 концентрации 20 мкг/см³ в бензоле (п. 7.3.2.2.) и доводят до метки бензолом. Получают растворы № 2 и № 6 с концентрациями 0,1 и 1,0 мкг/см³. Растворы №№ 3-5 с концентрациями 0,2; 0,3 и 0,5 мкг/см³ готовят аналогично, помещая в мерные колбы вместимостью 50 см³ 0,5; 0,75 и 1,25 см³ раствора № 1, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение месяца.

7.4. Отбор проб

Огбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 “ССЬТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны”.

В течение 15 минуг последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух с объемным расходом 0,5-1 дм³/мин аспирируют в течение 5 минуг через фильтр “синяя лента”, помещенный в филмродержатель.

Для измерения концентрации дифлубензурона на уровне 0,5 ПДК воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 0,33 дм³ воздуха (измерение по п. 7.6.1., ВЭЖХ) или 0,67 дм³ воздуха (измерение по п. 7.6.2., ГЖХ).

Срок хранения отчтбранных проб, помещенных в по.мизтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4°С, - 7 дней.

7.5. Подготовка и кондиционирование хроматографических колонок

Я&6

7.5.1.    Метод ГЖХ

Готовую насадку (5% OV-210 на Супелкопорте, 0,16 - 0,20 мм) засыпают в стеклянную колонку длиной 1 м, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 260 °С в течение 10-12 часов.

7.5.2.    Метод ВЭЖХ

Промывают колонку подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 7.1.2.) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.6. Установление градуировочной характеристики

7.6.1. Метод ВЭЖХ

Градуировочную характеристику, пыражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации дифлубензурона в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной градуировки с использованием серии стандартных растворов № 1, состоящей из 5-ти растворов №№ 2 - 6, приготовленных по п. 7.3.1.3. В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого i-радуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.1.1.

7.6.1. J. Условия хроматографирования

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США) Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм Температура колонки: комиагная

Подвижная фаза, ацетонитрил - вода (60:40. по объему)

Скорость поз ока элюсита: I см³/мин Рабочая длина волны: 254 (или 280 )* нм

•ПРИМЕЧАНИЕ - детектирование при длине волны 280 нм приемлемо при наличии в натурных пробах воздуха примесей, поглощающих в области 254 нм, время выхода которых совпадает с временем выхода дифлубензурона.

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу (Кгьсм вводимой пробы: 20 мм³

1

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерении Г азовый хроматограф “Цвет -560”, снабженный детектором постоянной скорости рскомби-