МУК 4.1.1753—03

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онишенко

29 июня 2003 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Фотометрические измерения массовых концентраций целловиридина в воздухе рабочей зоны

Методические указания _МУК    4.1.1753--03_

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный фотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание целловиридина в диапазоне массовых концентраций 1,0—10,0 мг/м\

2. Характеристика вещества

Цслловиридин получают в процессе микробиологического синтеза. Ферментативная активность целловиридина выражается в его способности гидролизовать целлюлозу.

Целловиридин предназначен для использования в сельском хозяйстве при силосовании соломы и бобовых трав.

2.1. Физико-химические свойства

Цслловиридин представляет собой мелкий порошок от светло-желтого до светло-коричневого цвета, без запаха. Растворим в воде.

Целлюлолитическая активность - 1 600 ед/г.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика

Целловиридин обладает общей токсичностью.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2 мг/м\ Класс опасности - 3.

149

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций целловиридина с по1решностью, не превышающей ± 24 %. при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерение массовой конценлрации целловиридина выполняется методом фотометрии.

Метод основан на количественном определении целлобиозы, образующейся при гидролизе целлюлозы целловиридином; используется способность калия железосинеродистого менять свой цвет при окислительно-восстановительной реакции. Измерение производят при длине волны 400 нм. Субаратом для целловиридина служит бумага для физико-химических анализов, представляющая собой чистую целлюлозу.

За единицу целлюлолитической активности принимают такую активность, при которой 1 грамм фермента (в стандартных условиях) катализирует образование 1 грамма восстанавливающих эквивалентов (целлобиозы) в час.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания целловиридина в анализируемой пробе (2 см³) - 10 мкг.

Нижний предел измерения концентрации целловиридина в воздухе при отборе 50 дм³ воздуха - 1,0 мг/м³.

Метод специфичен в условиях производства целловиридина. Определению не мешают инактивированные белки, углеводы, инактивированные штамм-продуценты.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы Фотоэлектроколориметр КФК-2МП, обеспечивающий измерения на длине волны 400 нм, погрешность 1 %

Весы лабораторные ВЛА-200 Аспирационное устройство, модель 822 Фильтродержатель Фильтры АФА-ВП-10

Баня водяная с температурой герморегулирования (100 ± 0,5) °С Термостат или ультратермостат, обеспечивающий температуру нагрева (37 ± 0,2) °С Секундомер

Стаканчики СВ-19/9 и 24/10 Стаканы, вместимостью 25 см³ Колбы 50, 100, 200, 500, 1 000 см³ Пипетки 1 и 10 см³

Пробирки П1-14-120 ХС или ПМ6-150

5.2. Реактивы Целловиридин, целлюлолитическая активность 1 600 ед/r, содержание основного вещества не менее 95 %

Бумага для медицинских и физико-химических анализов в качестве субстрата Ацетатный буферный раствор, pH 4,7 Натрий углекислый Калий железосинеродистый Вода дистиллированная

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данной МВИ.

6. Требования безопасности

6.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2.    При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3.    При выполнении измерений с использованием фотоэлектроко-лоримстра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

Работа на фотоэлектроколориметре должна проводиться в чистом помещении, свободном от пыли, паров кислот и щелочей. Вблизи фотоэлектроколориметра не должны располагаться громоздкие изделия, создающие неудобства в работе оператора (ГОСТ 15150-69).

151

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим и средним специальным образованием, имеющие навыки рабогы на фотоэлектроколориметре.

8. Условия измерений

8.1.    Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 84—106 кПа и влажности воздуха не более 80 %.

8.2.    Измерения на фотоэлектроколориметре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

9.1. Приготовление растворов

9.1.1.    Стандартный раствор целловиридина, 50 мкг/см³. В стеклянный стаканчик помещают 5,25 мг целловиридина (с учетом процентного содержания), тщательно растирают стеклянной палочкой с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см⁵. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Стандартный раствор готовят в день проведения анализа.

9.1.2.    Раствор калия железосинеродистого, 0,6 мг/см³. Растворяют 6 г углекислого натрия в 200 см³ дистиллированной воды и переносят в мерную колбу вместимостью 1 000 см³.

Затем в эту же колбу добавляют 0,6 г калия жслезосинеродистого. Объем доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Раствор хранят при комнатной температуре в темном месте в течение 2 месяцев.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку фотоэлектроколориметра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины оптической плотности от массы анализируемого вещества в пробе, взятой для анализа, устанавливают при помощи градуировочных растворов целловиридина в соответствии с табл. 1.

152

МУК 4.1.1753—03

Таблица 1 Приготовление растворов дли определения градуировочной характеристики целловирндина

№ стан дарта Объем стандартного раствора целловири-дина (50 мкг/см3), см1 Объем дистиллированной воды, см3 Содержание целловирндина в объеме пробы (2,0 см3), взятой для анализа, мкг 1 0,0 10,0 0,0 2 КО 9,0 10,0 I 3 1,5 8.5 15,0 4 2,5 7.5 25.0 5 5.0 5,0 50,0 6 7.5 2,5 75,0 7 10,0 0,0 100.0

Градуировочные растворы готовят непосредственно перед измерениями. Хранить не более 6 ч в бытовом холодильнике.

9.3.1. Гидролиз целлюлозы Полоски бумаги массой 100,0 мг складывают гармошкой, помещают в пробирки и заливают 2 см³ ацетатного буферного раствора. Пробирки помещают в водяную баню с температурой (37 ± 0,2) °С и прогревают в течение 10 мин. Затем в пробирки вносят по 2 см³ градуировочных растворов целловирндина (также предварительно прогретых 10 мин при тех же условиях), перемешивают и включают секундомер. Пробирки выдерживают в улыратермостате 7,5 мин.

Аналогично приготавливают холостую пробу, куда вместо раствора, содержащего целловиридин, добавляют 2 см³ дистиллированной воды.

9.3.2. Проведение цветной реакции После этого из пробирок, содержащих опытную и холостую пробы, в заранее приготовленные другие пробирки отбирают по 0,2 см³ раствора, приливают по 6 см³ раствора калия железосинеродистого, смесь прогревают в кипящей водяной бане в течение 10 мин, затем охлаждают до комнатной температуры.

Раствор устойчив в течение 30 мин.

9.3.3. Проведение оптических измерений

Измеряют оптическую плотность растворов в кюветах с толщиной оптического слоя 5,0 мм при длине волны 400 нм но отношению к холостой пробе, не содержащей определяемого вещества (раствор К® 1 по табл. 1).

153

Рабочая зона оптического поглощения для градуировочного « рафика лежит в пределах 0,09—0,90.

9.3.4. Построение градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы целловиридина, устанавливают по 6 сериям раствора из 5 параллельных определений для каждой серии согласно табл. 1.

Каждый из подготовленных градуировочных растворов перемешивают и измеряют оптические плотности этих растворов в кювеге с толщиной поглощающего слоя 5 мм при длине волны 400 нм но отношению к холостой пробе. Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания целловиридина (мкг).

Проверку градуировочной характеристики проводят I раз в 3 месяца или в случае смены партии реактивов, оборудования или приборов.

9.4. Отбор проб воздуха Воздух с объемным расходом 10 дм³/мин асиирируют в течение 5 мин через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в фильтродержатсль. Для определения /г ПДК целловиридина следует отобрать 50 дм³ воздуха.

Отобранные пробы хранятся в условиях сухого помещения в закрытом сосуде при комнатной температуре до 5 суток.

10. Выполнение измерения

10.1. Экстракция целловиридина с фильтра Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс, приливают в нею 5 см³ дистиллированной воды и оставляют на 10 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Полученный раствор отливают в пробирку, а экстракцию продолжают, добавив в стаканчик с фильтром 5 см³ дистиллированной воды. Затем фильтр тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в одну пробирку. Таким образом получают 10 см³ элюата целловиридина.

Степень десорбции целловиридина с фильтра равняется 97 %.

10.2. Проведение анализа Анализ 2,0 см³ элюата на содержание целловиридина проводят гочно так же, как при построении градуировочной характеристики.

Оптическую плотность анализируемого раствора измеряют аналогично градуировочным растворам по сравнению с холостым, который готовят одновременно и аналогично пробам, используя чистый фильтр.

154

МУК 4.1.1753—03

По градуировочному графику находят количество целловиридмна в объеме пробы, взятой для анализа, соответствующее полученным значениям оптических плотностей.

Нели значения оптических плотностей находятся за пределами рабочей зоны градуировочного 1рафика, то опыт необходимо повторить с раствором, имеющим большее или меньшее содержание целловиридина.

11. Расчет концентрации вещества в воздухе

Массовую концентрацию целловиридина в воздухе (С, мг/м³) вычисляют по формуле:

С =

а - содержание целловиридина, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочной характеристике, мкг; б - объем пробы, взятой для анализа, см³; а - общий объем пробы, см³;

К - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, дм³ (см. прилож. 1).

12.    Оформление результата анализа

Результат количественного анализа представляют в виде (С ± С • Д/100) мг/м³, Р = 0,95, где Д - характеристика погрешности, выраженная в процентах.

13.    Контроль погрешности методики

Значения полученных метрологических характеристик погрешности, норматива оперативного контроля точности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты метрологической аттестации фотометрической методики

155

13.1» Оперативный контроль воспроизводимости Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, набора мерной посуды и т. д., и получают два результата С/ и С> анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D (%):

|С.-С2|-200_гг

(С, + С₂)

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

13.2. Оперативный контроль точности Внутренний оперативный контроль точности проводят для каждого интервала определяемых концентраций. Единичные контрольные измерения выполняют в одной серии с КХА рабочих проб за период, в течение которого условия проведения КХА допустимо считать постоянными. Число контрольных измерений зависит от установленных планов статистического контроля точности.

Образцами для оперативного контроля точности являются стандартные образцы с известным содержанием измеряемого вещества, величина которого должна быть близкой к анализируемым пробам.

При контроле качества результатов КХА состава воздушных сред, при отсутствии в лаборатории промышленных смесей или невозможности их создания в качестве образца для контроля, используют стандартный образец, нанесенный на фильтр или другое устройство, на которое собирают исследуемые вещества. При этом следует иметь в виду, что погрешность процедуры отбора проб контролируется путем поверки используемых пробоотборников, и расчет норматива контроля точности осуществляют, исходя из характеристики погрешности методики КХА за вычетом характеристики погрешности используемою пробоотборника и характеристики погрешности, связанной с неполным извлечением анализируемых компонентов.

156

МУК 4.1.1753—03

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

С_м - содержание (концентрация) анализируемого вещества в образце для анализа (по приготовлению), мг/м³;

X - измеренное содержание (концентрация) вещества, мг/м³.

К - величина характеристики оперативного контроля точности, %.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения анализа требуется 1,5 ч.

Методические указания разработаны Российским государственным медицинским университетом (Лиманцев А. В.).

157