Государственное сани гарно- ->пндемиологичсское нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны

Сборник методических указаний МУК 4.1.1575—4.1.1614—03

Выпуск 38

Москва • 2003

МУК4.1.    О3

УТВЕРЖДАЮ

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации -Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

___Г.Г.ОНИЩЕНКО

</-К>Н-Х.______ 5.003 •

МУК 4.1.    Ъ

Дата введения: с момента утверждения

4.1. М е г о д ы к о н т р о л я. X и м и ч е с к и е факторы

сле**р*    Методические    указания

пс^фотометрическому измерению концентрации целлюлазы в воздухе рабочей зоны

Ферментный препарат целлюлаза,

(К 3.2.1.4 — р-1,4-глюкан-4-глкжаногидролаза).

М.м. 65000.

Целлюлаза - порошок сероватого цвета со слабым запахом дрожжей. Растворим,

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.    4 00^0.

Обладает общетоксическим действием. Мало токсична при различных путях воздействия на организм. При ингаляции пыль целлюлазы вызывает раздражение верхних дыхательных путей.

ПДК в воздухе рабочей зоны - 2 мгАг (аэрозоль).

Характеристика метода

Метод основан на количественном определении восстанавливающих эквивалентов, в основном целлобиозы, образующихся при гидролизе целлюлозы целлюлазой; используется способность калия железосинеродистого менять свой цвег при окислительно-восстановительной реакции с восстанавливающими эквивалентами. Измерение производят при длине волны 390-420 нм (оптимальная длина волны 405 нм). Субстратом для целлюлазы служит бумага для физико-химических анализов, представляющая собой практически чистую целлюлозу. Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр АФА-ВП-10.

Нижний предел измерения    целлюлазы    в    анализируемой

пробе 3.2 мкг.

Нижний предел измерения концентрации в воздухе (зри отборе 16 л

МУК 4.1

Диапазон измеряемых концентраций^"- 10 мг/м³.

Суммарная погрешность измерения нс прсвышаетг20° о.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, не более 1.5 часов. Определению мешают хондрозин, мелибиоза, мальтоза, лактоза, ксилобиоза, гиалобиуроновая кислота, мурамовая кислота.

Приборы, аппаратура, посуда

•    Колориметр фотоэлектрический лабораторный (фотоэлект роколс лиметр) по ГОСТ 12083 , обеспечивающий измерения в интервалах длин волн 390 - 420 нм (оптимум 405 нм).

•    Весы лабораторные ВЛР-200, ГОСТ 24104-88Е.

•    Аспирационное устройство, модель 822, ТУ 64-1 -862-72.

•    Фильтродержатель, ТУ 96-72-05-77.

•    Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80.

•    Баня водяная с температурой терморегулирования 100±0.5°С.

•    Термостат или ультратермостат, обеспечивающий температуру нагрева 37±0.2°С

•    Секундомер, ГОСТ 5072-79 •

•    Стаканчики СВ-19/9 и 24/10, ГОСТ 25336-82 Е.

•    Стаканы вместимостью 25 мл, ГОСТ 25336-82 Е.

•    Колбы 50, 100, 200, 500, 1000мл, ГОСТ 1770-74Е.

•    Пипетки 1 и 10мл, ГОСТ 29227-91.

•    Пробирки П1-14-120 ХС или П1-16-150, ГОСТ 25336-82 Е.

Реактивы, растворы и материалы

•    Целлюлаза, целлюлолитическая активность 1000 ед/г, ТУ 9231-008-05800805-93.

•    Бумага для медицинских и физико-химических анализов в качестве субстрата, ТУ 13-7308001-778-89.

•    D-глюкоза, ГОСТ 6086-79 .

•    Ацетатный буферный раствор, pH 4.7, готовый, ГОСТ 4919.2

•    Натрий углекислый, ГОСТ 83-79.

•    Калий железосинеродистый, ГОСТ 4206-75.

•    Вода дистиллированная, ГОСТ 6709.

Все реактивы должны быть марки х.ч. или ч.д.а.

Подготовка к измерению

1. Приготовление стандартного раствора целлюлозы, 16 мкг/мл.

МУК 4.1

8.0 мг целлюлазы помешают в стеклянный стаканчик, тщательно растирают стек.1янной палочкой с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой. Окончи телько полученный раствор разводят в 10 раз. Стандартный раствор готовят в день проведения анализа.

2. Приготовление растворов целлюлозы Оля построения граОуировочного графика.

Для градуировочного графика растворы приготовляют согласно табл.

Таблица

№№ н/11 Объем стандартного расгвора целлюлазы, мл Объем дистиллята, мл Концентрация целлюлазы. мкг/мл Содержание целлюлазы в объеме пробы (2мл), взятой для анализа, мкг 1 2 3 4 5 1 0.0 10.0 0.0 0.0 2 1.0 9.0 1.6 32 3 1.5 8.5 2.4 4.8 4 2.5 7.5 4.0 8.0 5 5.0 5.0 8.0 16.0 6 7.5 2.5 12.0 24.0 7 10.0 0.0 16.0 32.0

3. Приготовление раствора катя железосинеродиапого, 0.60 мг/мл.

6.00 г углекислого натрия растворяют в 200 мл дистиллированной воды и переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл.

Затем в эту же колбу добавляют 0.60 г калия железосинеродистого. Объем доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Раствор хранят при комнатной температуре в темном месте в течение 2-х месяцев.

Проведение измерений и построение градуировочного г рафика

1. Гидролиз целлюлозы

Полоску бумаги массой 100.0 мг складывают гармошкой, помещают в пробирку и заливают 2мл готового ацетатного буферного раствора. Пробирку помещают на водяную баню с температурой 37±02°С и прогревают в течение 10 мин. Затем в пробирку добавляют 2 мл пробы, содержащей известное количество целлюлазы (концентрации целлюлазы указаны в таблице), и гидролизуют в течение 15 минут (точно).

МУК 4.1

Аналогично ПрИГУТДВ ДИВОЮ! МОЛОС-тую пробу, где вместо раствори, содержащею целлюлазу. добавляют 2 мл дистиллята.

2. Проведение цветной реакции.

После этого из пробирок, содержащих опытную и холостую пробы. в другие пробирки отбираю! по 0.2 мл реакционной смеси, приливают по б мл раствора калия жслезосинсродистого. смесь прогревают при температуре 100°С в течение 10 мин на во;1яиой бане, татем охлаждают до комнатной юмпературы.

Проведение, оптических :пме. рений.

Оптическую пло1нос!Ь определяют наФ'Же при длине волны .

405 им в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 5.0 мм.

Колориметрироваиис опытной и холостой проб ведут HdcpoHt дистиллированной воды: определяют соответствующие оптические плоигосги -15л и Ях-

Определение концентрации целлюлазы в воздухе рабочей юны

Отбор проб воздуха.

Для определения 0.5 ПДК целлюлазы необходимо отобрать 16 л воздуха. Пробы воздуха с объемным расходом 5 л/мин отбирают на фильтры АФА-ВП-10. Срок хранения отобранных проб в холодильнике до 1 суток.

Экстракция целлюлазы с фильтра.

Фильтр с отобранной пробой, содержащей целлюлазу из воздуха рабочей зоны, помещают в стакан и приливают 5.0 мл дистиллированной водьг. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин и сливают в пробирку. Аналогичным образом проводят повторную экстракцию с фильтра и объединяют растворы. Общий объем элюата составляет 10.0 мл.

Измерения проводят точно так же, как и при установлении 1 радуировочного графика, отбирая для анализа 2 мл из общего объема элюата. Находят"Sx -В₀. соответствующие данному образцу воздуха.

Если значения оптической плотности выходят за пределы рабочей зоны градуировочного графика целлюлозы (В = 0.060..0.600), то опыт необходимо повторить с раствором, имеющим большее или меньшее содержание ((юрментного препарата.

МУК 4.1

Обработка результатов целлм,,##*-

Определение содержания < ■ в анализируемом пробе. Количественное определение содержания целлюлазы в объеме пробы, взятой для анализа (2 мл)_г проводят по предварительно построенному . калибровочному графику, определяя соответствие полученной разности -V содержанию целлюлазы в пробе (5-я графа таблицы).

Вычисление концентрации иеллюлазы в еозоухе рабочей юны. Концентрацию целлюлазы в воздухе (С,_и) вычисляют по формуле:

а -в

Сц, *--------(мг/.ч³),    где:

б-V

а - содержание целлюлазы в объеме пробы, взятом для анализа (мкг); б - объем анализируемой пробы (мл); в - общий объем элюата с воздушного фильтра (мл);

V - объем воздуха (л), отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям (см. Приложение 1).

Приложение I

Приведение объёма воздуха к стандартным условиям (температура 20°С и давление 760 мм ст.ст.) проводят по формуле:

У_± *(273 f 20) -Р У₂₀--,    где

(273 +£).101,33

\ - объём воздуха, отобранный для анализа, л;

Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа=760 мм рт.ст.);

6 - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчёта VpQ следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить У^ на соответствующий коэффициент.