УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач

ской Федерации

Первый за*    дравоохрансния

4 А. г? <

Дата введения: i 0lu-o^ Ieoh

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

по определению остаточных количеств десмедкфама и фенмедифама в корнеплода! и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом капиллярной газожидкостной хроматографии

1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ

Название препарата: Витал AM, Сннбетшг Прогресс ОФ. Бифор Прогресс. Фирма производитель: ФМРус, РосАгроХим, АгроЭксперт групп. Действующие вещества: десыеднфам и фенмедифам-

1. Десмедифам (ISO).

3-этоксихарбоннламипофенкл фен ил карбамат (Ц/РАС).

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C^Hi^O*.

Молекулярная масса: 300,3.

Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы. Температура плшшения: 120°С. Растворимость (г/1000мл) при 20°С: в поде - 0,007, ацетоне - 400, метаноле - 180 , этил ацетате - 149 , хлороформе - 80, днхлорметаьс - 17,8, беизоле - 1,6, гексане - 0,5. 2. Фенмедифам (ISO).

З-мстоксикарбонкламияофеннл З'мстхлкар-баиилат (ГОРАС).

Структурная формула:

Н₃С

Эмпирическая формула: CiiHjeNjO*-Молекулярная масса: 300,3.

Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы. Температура плавления: 140 ]44°С.

3

Растворимость (г/1000мл) при 20°С: в воде - 0,006, ацетоне - 200, метаноле - 50, этил-ацетате - 56,3 , хлороформе - 20, дихлорметане - 16,7, бензоле - 2,5 , гексане - 0,5. Гигиенические нормативы: ВМДУ дссмедифама в свекле сахарной, столовой и кормовой- 0,1 мг/кг; МДУ фенмедифама в свекле сахарной, столовой и кормовой 0.2 мг/кг. Область применения препарата: послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними двудольными и некоторыми злаковыми сорными растениями на свекле.

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕСМЕДИФАМА И ФЕНМЕДИФАМА В КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ САХАРНОЙ, СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода.

Метод основан на извлечении остаточных количеств десмедифама и фенмедифама из анализируемого объекта ацетоном, проведении очистки экстракта перераспределением в системе растворителей, получении производных путем гидролитического расщепления десмедифама в анилин, а фенмедифама в метиланилин, их бромировании и газо-хро^алгографическом анализе с использованием капиллярной колонки и детектора электронного захвата (ДЭЗ).

2.1.2,    Избирательность метода.

Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование селективного детектора и капиллярной колонки позволяет устранять влияние на анализ коэкстрактивных веществ.

2.1.3.    Метрологическая характеристика метода.

Метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1.

Метрологические параметры, р=0,95» п=6 Анализи руемый объект 1 Предел j обнаруже- | ния, ] мг/кг ! Диапазон ! определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определе ния, % Стандартное отклонение, % Доверительный интервал среднею результата, % Корнеплоды I 0,02 0,02-0,16 82,7 6,1 ±5,6 Ботва О о 0,02-0,16 85,3 4,7 ±4,3

4

Таблица 2. Полнота определения десмедифама и фенмедифама в корнеплодах и ботве свеклы (п = 6 для каждой концентрации).

Анализируемый Внесено, Найдено. Стандартное Полнота объект мг/кг мг/кг отклонение,± определения, % Корнеплоды 0,020 0,015 0,0015(7,3%) 77,0 свеклы 0,040 0,032 0,0026 (6,4%) 80,8 0,080 0,068 0,0045 (5,6%) 85,0 0,160 0,141 0,0082 (5,1%) 88 2 Ботва свеклы 0,020 0,016 0,00 П (5,4%) 80,7 0,040 0,033 0,0019(4,9%) 83,3 0,080 0,069 0,0036 (4,5%) 86,7 0,160 0,145 0,0064 (4,0%) 90,5

2.2.    Реактивы, материалы

Аналитические стандарты десмедифама и фенмедифама.

Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25*89.

Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.

Вода дистиллированная и перегнанная над КМп0₄и щелочью.

Калий бромистый, ч, ГОСТ 4160-74.

Калий бромноватокислый, ч, ГОСТ 4457-74.

Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.

Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77.

Натрий сернистокислый (сульфит), чда, ГОСТ 195-77.

Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.

Этиленгликоль, чда, ГОСТ 10164-75.

Эфир этиловый (серный), ГОСТ ФС 42-3643-98.

Фильтры бумажные, красная лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, белая лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

2.3.    Приборы, аппаратура, посуда.

Газовый хроматограф с ДЭЗ и хроматографической колонкой капиллярной кварцевой длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52, толщиной слоя 0,4 мкм.

5

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73 или аналогичный.

Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.

Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Воронки делительные емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Инструментарий для первичной подготовки проб к определению ( нож, ножницы, шпатели, кюветы и др.)*

Колбы-концентраторы емкостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы плоскодонные емкостью 300 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.

Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.

Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Стаканы химические емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.

Установка для упаривания растворителей в токе азота.

Установка ультразвуковая ’’Серьга" УЗМ002 или аналогичная.

Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 20,0 мл.

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411 -76.

Электроплитка, ГОСТ 14919-83.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Очистка органических растворителей и воды.

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Дгп этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40°С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

В обязательном порядке проводят дополнительную очистку воды, используемой при обработке проб к проведению определения. Для этого 150 мл (из расчета обработки I пробы) дистилированной воды, перегнанной над КМп0₄ и щелочью, помещают в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку вносят 50 мл насыщенного водного

6

раствора хлористого натрия, 1,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия и после перемешивания 50мл этилового эфира. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После разделения слоев нижний водно-солевой слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, а верхний эфирный слой отбрасывают. К водно-солевой фракции, находящейся в колбе, добавляют (до pH 3-4) - 1,5 мл 5% водного раствора серной кислоты. Содержимое колбы перемешивают встряхиванием, переносят в делительную воронку емкостью 500 мл и добавляют 50 мл этилового эфира. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После разделения слоев нижний водно-солевой слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, а верхний эфирный слой отбрасывают. Очищенный водно-солевой раствор используют при обработке пробы к проведению определения по п. 2.6.

2.4.2.    Приготовление щелочного этиленгликоля.

В мерной колбе емкостью 25 мл растворяют 1,0 г гидроокиси калия в 1,0 мл дистиллированной воды и доводят объем до 25 мл этиленгликолем.

2.4.3.    Приготовление стандартных растворов десмедифама и фенмедифама.

Основные растворы десмедифама и фенмедифама с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в ацетоне 0,01 г каждого препарата в мерных колбах на 100 мл. Растворы хранят в холодильнике при 4-6°С не более 3-х месяцев.

Смеси рабочих стандартных растворов десмедифама и фенмедифама с концентрациями

4.0,    2,0, 1,0 и 0,5 мкг/мл готовят во флаконах емкостью 20 мл (типа пенициллиновых) из основных стандартных растворов соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Ацетон упаривают в токе азота досуха и проводят гидролиз стандартных веществ с получением их бромпроизводных по п. 2.6.2.

Экстракты, приготовленные по п. 2.6.2 для построения калибровочного графика, хранят в холодильнике при 4-6°С не более месяца.

2.4.4.    Построение калибровочного графика.

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 мкл приготовленных по пп. 2.4.3. и 2.6.2. экстрактов, содержащих смеси стандартных растворов десмедифама и фенмедифама (в виде бромпроизводных) с концентрациями 0,5.

1.0,    2,0 и 4,0 мкг/мл. Осуществляют не менее З-.ч параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм²) от концентрации десмедифама и фенмедифама в растворе в мкг/мл.

7

2.5. Отбор и храпение проб

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.1979г., №2051-79.

Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру с температурой -18°С.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция десмедифама и фенмедифама

Аналитическую пробу корнеплодов или ботвы массой 25,0±0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл ацетона, слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане два раза по 5 мин. Ацетоновый экстракт фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой массой 25,0±0,1 г вносят 150 мл ацетона и содержимое колбы встряхивают в течение 60 мин. После этого эксгракт фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-юонцентратор с объединенным экстрактом устанавливают в ротационный вакуумный испаритель и упаривают ацетон при температуре 40°С до объема экстракта 20-30 мл. К остатку экстракта в колбе добавляют 200 мл водно-солевого раствора, приготовленного по п. 2.4.1. Содержимое колбы-концентратора фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. Затем в делителы1ую воронку вносят 50 мл этилового эфира, содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут и после разделения слоев нижний водно-солевой слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, а верхний эфирный слой в колбу-концентратор емкостью 100 мл. Процедуру экстрагирования десмедифамэ и фенмедифама из водно-солевого раствора повторяют с использованием 25 мл этилового эфира.

8

Колбу-концентратор с объединенным эфирным экстрактом устанавливают в ротационный испаритель и упаривают этиловый эфир при температуре 40°С до объема экстракта 10-15 мл. Остаток экстракта количественно переносят во флакон (типа пенициллинового) емкостью 20 мл и упаривают этиловый эфир в токе азота.

2.6.2. Проведение гидролиза и бромирования производных десмедифама и фенмедифа-ма.

К остатку во флаконе прибавляют 1 мл щелочного этиленгликоля* приготовленного по п.

2.4.2., флакон герметизируют и термостатируют при 150°С в течение 30 мин. После охлаждения во флакон последовательно добавляют 10 мл 1н водного раствора серной кислоты, 0,25 мл 20% раствора (в 1н водном растворе серной кислоты) бромистого калия и 0.25 мл 1% водного раствора бромноватокислого калия (хранят в темноте). Содержимое флакона перемешивают, флакон закрывают пробкой и выдерживают в темноте 15 мин. После этого во флакон последовательно добавляют небольшое количество ("на кончике шпателя") порошкообразного сульфита натрия до обесцвечивания содержимого, 1,0 мл 50% водного раствора гидроокси калия и после перемешивания - 2*5 мл толуола. Флакон закрывают пробкой, интенсивно встряхивают в руке и оставляют в покое на 10-15 минут до разделения слоев содержимого флакона. Аликвотную часть верхнего толуольиого слоя хроматографируют по п. 2.7.

В том случае, если через 10-15 минут верхний толуольный слой остается мутным, аликвотную его часть (1,5-2,0 мл) пропускают через слой (толщина 0,3-0,5 см) безводного сульфата натрия и затем анализируют на содержание десмедифама и фенмедифама по п.2.7.

2.7. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с ДЭЗ.

Колонка хроматографическая капиллярная длиной 15 м* внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE -52 толщиной слоя 0,4 мкм.

Температура колонки с программированием от 80°С (3 мии) до 280°С (15 мин) со скоростью 10°С/мин.

Температура испарителя: 250°С.

Температура детектора: 300°С.

Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) - 2,0 см³/мин, дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ - 40 см³/мин.

Объем хроматографируемой пробы: 1 мкл.

9

Время удерживания: десмедифама (в виде бромпроизводиого) - 14,3±0,1мин. феп-медифама (в виде бромпроизводиого) -15,9±0,1 мин.

Линейный диапазон детектирования (по бромлроизводным): 0,25-8,0 нг.

2.8. Обработка результатов анализа.

Содержание десмедифама нли фенмедифама рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

H,xA*V

X =-.    где:

Нохш

X - содержание десмедифама или фенмедифама в пробе, мг/кг,

Н₍ - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм (мм²).

Но - высота (площадь) пика стандартного вещества, мм (мм²),

А-концентрация смеси стандартных растворов десмедифама и фенмедифама, мкг/мл,

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл, ш - масса (г) аналитической пробы.

3.    КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химическою анализа".

4.    ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ.

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.

5.    РАЗРАБОТЧИКИ.

П.А. Тарарин, Т.А. Маханькова, Л.В. Григорьева (ВНИИ защиты растений).