Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указаний

Выпуск 4 Часть 2 МУК 4.1.1430—4.1.1433—03

Москва • 2004

МУК 4.1.1431—03

Расход водорода - 15 мл/мин, воздуха - 180 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Прометрина - 4 мин 30 с. Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,25— 4,00 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Прометрина 4,0 мкг/мл соответственно, разбавляют.

2.6.2. Обработка результатов анализов Содержание Прометрина рассчитывают по формуле:

X - содержание Прометрина в пробе, мг/кг;

S_r„ - высота (площадь) пика стандарта, мВ;

S_v - высота (площадь) пика образца, мВ;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - масса анализируемого образца, г;

Р - содержание Прометрина в аналитическом стандарте, %.

3. Требованья техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Разработчики

Калинин В. А., профессор, канд. с-х. наук, Довгилевич Е. В., канд. биол. наук, Калинина Т. С., канд. с-х. наук, Довгилевич А. В., канд. хим. наук.

Московская сельскохозяйственная академия им. К. А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов». 127550, Москва. Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (095) 976-37-68, факс: (095) 976- 43-26.

27

МУК 4.1.1431—03

Химически чистый Прометрин представляет собой белое кристаллическое вещество без запаха.

Давление паров 0,165 шРа.

Температура плавления 118—120 °С.

Коэффициент распределения н-октанол-вода: Kow lg Pow =3,1. Растворимость в воде составляет 33,0 мг/л при 25 °С и pH 7,0.

Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): ацетон - 300,0; гексан - 6,3; этанол - 140,0; толуол - 200.0; н-октанол - 110,0.

Прометрин стабилен в водных растворах в нейтральной, слабощелочной и слабокислой среде, быстро гидролизуется сильными кислотами и щелочами.

Период полураспада в почве в полевых условиях от 14 до 158 дней (в среднем 50 дней). Основным путем разложения вещества в почве является микробиологическое деалкилирование и окисление метилтио-группы.

Краткая гигиеническая характеристика. Прометрин относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛДя> крысы 5 233 мг/кг), дермальной (ЛД50 крысы свыше 3 100 мг/кг) токсичности и умеренно опасным по ингаляционной (ЛДзо крысы более 5 170мг/м³) токсичности. Может оказывать побочные неблагоприятные токсикологические эффекты.

В России установлены следующие гигиенические нормативы.

ДСД - 0,005 мг/кг/сут.

МДУ в зерне кукурузы, гороха, фасоли, чечевицы, семенах и масле подсолнечника и сои, клубнях картофеля, в тмине, кориандре и чесноке - 0,1 мг/кг.

Остаточные количества в моркови, сельдерее, укропе, петрушке не допускаются.

Область применения. Прометрин - гербицид из группы производных 1,3,5-триазина системного почвенного действия с длительным защитным эффектом, может проникать через листья растений, передвигаясь по ксилеме. Высокоэффективен против малолетних злаковых и двудольных сорняков в период их прорастания в посевах хлопчатника, зернобобовых, подсолнечника, сои, моркови и других зонтичных. Широко используется для приготовления смссевых промышленных препаратов.

Зарегистрирован под торговой маркой Гезагарл 50 в России в качестве гербицида для подавления сорняков в посевах подсолнечника, сои, зернобобовых, лекарственных кормовых бобовых куль-

19

тур, моркови и других зонтичных, чеснока, посадках картофеля с нормой расхода 2—5 кг/га, однократная обработка.

2. Методика определения остаточных количеств Прометрина в зеленой массе петрушки и укропа, клубнях картофеля, корнеплодах моркови н петрушки методом газожидкостной хроматографии

2. /. Основные положения

2.1.1. Принцип метода Методика основана на определении Прометрина методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ органическим растворителем, очистки экстрактов путем перевода соединений в ионизированную форму и последующего перераспределения между двумя несмеши-вающимися растворителями.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода газожидкостной хроматографии приведена в табл. I и 2.

Таблица 1

Метрологическая характеристика метода газожидкостной хроматографии

Метрологические параметры, р = 0,95, п = 20 анализируемый объект предел обнару жения, мг/кг диапазон определяемых концентраций, мг/кг среднее значение определения, % стандартное отклонение, S доверительный интервал среднего результата, %± Клубни картофеля, корнеплоды моркови и петрушки 0,02 0,02—0.32 91,9 4,34 91,9 ±2.0 Зеленая масса петрушки и укропа 0,02 0.02—0,32 83.2 4,95 83,2 ± 2,3

МУК 4.1.1431—03

2.1.3. Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для защиты овощных и плодовых культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).

Таблица 2 Доверительный интервал н полнота определения Прометрина в клубнях картофеля, корнеплодах моркови и петрушки и в зеленой массе петрушки и укропа

Среда Добавлено Прометрина, мг/кг Обнаружено Прометрина, мг/кг Доверительный интервал, ± Полнота определения, % Клубни карте-феля, корнепло-ды моркови и петрушки 0,02 0,0185 0,0020 92,5 0,04 0,0370 0,0020 91,3 0,16 0,1440 0,0062 90,1 0,32 0,3000 0,0140 93,7 Зеленая масса петрушки и укропа 0,02 0,0168 0,0020 84,4 0,04 0,0330 0,0030 82,5 0,16 0,1370 0,0091 85,6 0,32 0,2570 0,0118 80,4

2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование 2.2.1. Реактивы, материалы и растворы

Аналитический стандарт Прометрина

с содержанием не менее 95 % д.в.,

фирма Сингента

Азот особой чистоты

Ацетон

Ацетонитрил

Гексан

Гелий, очищенный марки «А» Кислота хлороводородная,

0,1 н водный раствор Кислота хлороводородная, концентрированная, хч Натрий серно-кислый, безводный, хч

21

Натрия хлорид, насыщенный водный раствор

Натрия хлорид, хч    ГОСТ 4233-77

Неподвижные фазы для газожидкостной

хроматографии: SE-30,5 % на

Хроматоне-N-AW (0,16-0,20 мм)

фирма Хемапол, Чехия

Флорисил для колоночной хроматографии

с размером частиц 60—80 меш.,

фирма Мерк или аналогичный

Хлороформ, ч    ГОСТ 20015-74

Этилацетат    ГОСТ 22300-76

Эфир диэтиловый (для наркоза.

Фармакопея СССР).

2.2.2. Посуда и оборудование

МУК 4.1.1431—03

Микрошприц для газового хроматографа на 1—10 мкл

Пипетки мерные на 1; 2,0; 5,0; 10 мл    ГОСТ 20292-74

Фильтры бумажные «красная лента»    ТУ 6-09-2678—77

Хроматограф газовый «Цвет-600» или другой марки, снабженный термоионным детектором на азот

Хроматограф газовый «Кристалл 2000 м» с термоионным детектором на азот и приспособлениями для капиллярной колонки Центрифужные банки полипропиленовые с крышками объемом 250 мл, Nalgene, cat. № 3120—0250.

2.3. Подготовка к определению

2.3.1. Приготовление стандартных растворов Взвешивают 50 мг Прометрина в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Получают исходный стандартный раствор № I с концентрацией 1 мг/мл, который хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разведения готовят стандартный раствор № 2 с концентрацией Прометрина 10 мкг/мл в ацетоне, который можно хранить в холодильнике 30 дней.

2.3.2. Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика из стандартного раствора № 2 готовят методом последовательного разбавления ацетоном стандартные растворы с концентрацией: 4,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,25 мкг/мл. Вводят в хроматограф по 2—3 мкл каждого стандартного раствора, измеряют высоту пиков и строят график зависимости высоты пика от концентрации раствора.

2.3.3. Подготовка колонки для очистки экстракта

2.3.3.1. Подготовка колонки с Флорисилом.

В стеклянную или пластмассовую колонку длинной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно стекловату и заполняют колонку Флорисилом на высоту 10 см. На слой Флорисила насыпают слой безводного Na2SC>4 толщиной 1,0 см. За день до очистки экстракта колонку промывают последовательно 20 мл ацетона и 10 мл гексана. После промывки колонка готова к работе.

2.3.3.2. Проверка хроматографического поведения Прометрина на колонках с Флорисилом.

При отработке методики или поступлении новой партии сорбента (Флорисил) проводят изучение поведения Прометрина на колонке.

Для этого в концентратор (или пробирку) вносят 1 мл стандартного раствора Прометрина концентрацией 4 мкг/мл, упаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха или в токе теплого воздуха.

Затем растворяют Прометрин в 1мл смеси растворителей гексан : ацетон в соотношении 4: I и наносят его на подготовленную, как указано выше, колонку. Промывают колонку 15 мл гексана, смыв отбрасывают. Затем пропускают через колонку 25 мл смеси гексан : этилацетат в соотношении 7 : 2, отбирая последовательно по 5 мл элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.

Сухие остатки растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 2—3 мкл. По результатам обнаружения Прометрина в каждой фракции определяют объем смеси гексан : этилацетат, необходимой для полного вымывания Прометрина.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79). Пробы корнеплодов и зеленой массы хранятся при температуре 0—4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18 °С.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Клубни картофеля, корнеплоды моркови, петрушки и зеленая масса укропа и петрушки Навеску измельченного растительного материала (корнеплоды моркови, корнеплоды петрушки, зеленая масса укропа или зеленая масса петрушки) массой 25 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, заливают 70 мл ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт отфильтровывают через воронку с бумажным фильтром в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют

24

МУК 4.1.1431—03

еще 2 раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила и встряхивая смесь в течение 30 мин.

Экстракты отфильтровывают и объединяют в концентраторе. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. (Упаривание проводить осторожно, т. к. возможно вспенивание ацетонитрила.)

Водный остаток в концентраторе растворяют в 25 мл 0,1 н раствора соляной кислоты и фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор еще раз ополаскивают 25 мл 0,1 н раствора соляной кислоты и через фильтр переносят в ту же делительную воронку. Объединенный в делительной воронке раствор промывают смесью гексан : эфир в соотношении 7 : 1 по объему, 2 раза порциями по 20 мл. Сливают из делительной воронки нижний водный слой в химический стакан объемом 100 мл, а смесь гексан : эфир отбрасывают. После промывания водную фазу в стакане подщелачивают 1 н раствором едкого натрия (около 4,5 мл) до pH = 8.

Переносят полученный раствор в делительную воронку и ре-экстрагируют Прометрин тремя порциями хлороформа по 20 мл каждая. Сливают из делительной воронки каждый раз нижний слой (хлороформ) в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенные экстракты упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.

Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и вводят в хроматограф 2—3 мкл раствора. При наличии мешающих пиков в контрольных образцах экстракт очищают на колонках с Флорисилом.

2.5.2. Очистка образцов на колонке

При очистке образцов на колонке сухой остаток в концентраторе, полученный при упаривании хлороформа, растворяют в 1 мл смеси гексан : ацетон в соотношении 4: 1 и наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 15 мл гексана и 5 мл смеси гексан : этилацетат -7:2, смывы отбрасывают.

Элюируют Прометрин 15 мл смеси гексан : этилацетат (7 : 2). Элюат собирают в концентратор и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. Сухой остаток разводят в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 2— 3 мкл.

25

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов

2.6.1. Условия хроматографирования

Хроматограф «Цвет-600» с термоионным детектором по азоту.

Рабочая шкала электрометра 16 х 10⁹. Скорость движения ленты самописца 10 мм/мин.

Колонка стеклянная спиральная, длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм.

Носитель Хроматон N-AW, неподвижная фаза SE-30, 5 %, размер частиц 0,20—0,25 мм.

Температура испарителя - 270 °С, термостата колонки - 190 °С, переходной камеры - 364 °С.

Газовый режим:    азот - 45 мл/мин;

водород - 13 мл/мин; воздух - 180 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Прометрина - 1 мин 16 с.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,75— 12,00 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Прометрина 4,0 мкг/мл соответственно, разбавляют.

2.6.1.1. Альтернативные условия хроматографирования.

Хроматограф газовый «Кристалл 2000 м» с термоионным детектором на азот.

Капиллярная кварцевая колонка НР-5 (5% фенилсиликона + 95% метилсиликона), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Программированная температура термостата колонки: начальная температура - 160 °С, выдержка - 2 мин; нагрев колонки по 30 °С/мин до 250 °С, выдержка 5 мин.

Температура испарителя - 260 °С;

детектора - 350 °С.

Регулятор расхода гелия - РРГ-11; режим - Splitless.

Газ 1 - гелий, линейная скорость - 20 см/с, давление на входе -27,29 кПа.

Газ 2 - гелий (продувка испарителя), расход - 1,0 мл/мин; сброс

1 : 50.

Газ 3 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа -40 мл/мин.

26