МУК 4.1.1416—03

УТВЕРЖДАЮ Г лавный государственный санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онищенко

24 июня 2003 г.

Дата введения: 30 июня 2003 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств метилизотиоцианата в томатах и огурцах методом газожидкостной хроматографии

1Методические указания _МУК    4.1.1416—03_

Вводная часть

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хромато1рафии для определения в томатах и oiypiiax массовой концен грации метилизотиоцианата в диапазоне 0,025—0,250 мг/кг.

Метилизотиоцианат - основной метаболит дазомета, действующего вещества препарата ВАЗАМИД, мг (970 г/кг), фирма-производитель БАСФ АТ, Германия.

Метилизотиоцианат (МИ I I0 CH₃N=CS    C₂H₃NS

Молекулярная масса - 73,12.

Бесцветное кристаллическое вещество с раздражающим запахом. Температура плавления 35—36 °С. Температура кипения 119 °С. Слаборастворим в воде, хорошо растворим в органических растворителях. В воздухе находится в виде паров.

Область применения препарата БАЗАМИД, мг (970 г/кг д.в. дазомета). Препарат рекомендуется к применению в качестве фунгицида и исматоцида против нсматодов, почвенных патогенных 1рибов, прорастающих семян сорняков и злаков, вредных насекомых и бактерий на огурцах, томатах открытого и защищенного грунта, в питомниках, на землянике.

Гигиенические нормативы метилизотиоцианата: ВМДУ в томатах и oiypnax - 0,05 мг/кг.

1

1. Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода представлены в табл. 1.

Таблица 1 Метрологические параметры

Анализи руемый объект Метрологические параметры, Р 0,95, п 24 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S, % Довери тельный интервал среднего резуль тата, % Томаты 0,025 0,025—0,250 81,32 3,01 ±4,4 Огурцы 0,025 0,025—0,250 83,73 2,67 ±3,9

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества е помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором ( ГИД) после отгонки метилизотиоцианата из образца растительного материала е водяным паром, превращении в 1,3-димстилимидазолидин-тион-2-он-5 (ДИ ГО) при взаимодействии е этиловым эфиром саркозина, очистке на колонке е флорисилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии возделывания томатов и oi-урцов.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерении

Газовый хроматограф «Кристалл-2000М», снабженный гермоионным детектором ( ГИД) е пределом детектирования но азоту в азобензоле 1,4 х 10 ¹ г/с

Весы аналитические ВЛА-200

МУК 4.1.1416—03

Объем вводимой пробы - 2 мм³.

Ориентировочное время удерживания

производного МИТЦ (ДИТО) - 2 мин 10 с.

Линейный диапазон детектирования - 1 —10 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор производного МИТЦс концентрацией 5 мкг/см³, разбавляют бензолом.

10. Обработка результатов анализа

Содержание МИТЦ в пробе рассчитывают по формуле:

_v А V

X =-,    где

т

X- содержание МИТЦ в пробе, мг/кг;

А -концентрация производного МИТЦ, найденная но ipa-дуировочному графику, мкг/см³;

V-объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

/// - масса анализируемого образца, г.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводи мости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335—95. «ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

12. Разработчики

Юдина Т. В., Федорова II. Е., Волчек С. И, Рогачева С. К., Гарбузова Л. Л.

Федеральный научный центр гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана (ФНЦГ им. Ф. Ф. Эрисмана). 141000, г. Мытищи Московской обл., ул. Семашко, д. 2, лаборатория аналитических методов контроля.

Телефон: (495) 586-12-76 ¹

Газхром Q (0,12—0,16 мм) с 1 % Реоплекса-400 (фирмы Мерк, США)

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч    ГОСТ    22300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Ваня водяная

Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные

Воронки делительные, вместимостью 250 см³

Воронки конусные, диаметром 30—37 и 60 мм Груша резиновая

Колбы плоскодонные, вместимостью 200—250 см³

Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10, 100 и 250 см³ Колба Кьсльдаля Насос водоструйный Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 50 Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный

испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария    ТУ 25-11-917—74

Стаканы химические, вместимостью

100 и 400 см³    ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянная колонка длиной 30 см,

внутренним диаметром 15 мм

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

при атмосферном давлении

Установка для перегонки растворителей

с водяным паром

Хрома кнрафическая колонка стеклянная длиной 1,5 м, внутренним диаметром 3 мм

МУК 4.1.1416—03

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования е аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При работе е реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами но ГОСТ 12.1005.

4.2.    При выполнении измерений с использованием газового хрома-тографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подготовка и кондиционирование хромато1рафической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с флорисилом для очистки экстрактов, проверка хромато1ра-фического поведения вещества на колонке с флорисилом.

7.7. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетона

Растворитель сушат над молекулярными сигами 4Л и подвергают фракционной перегонке на ректификационной колонне, целиком собранной из стекла с числом теоретических тарелок не менее 30. Сосуд для перегонки погружают в водяную баню и через приемник пропускают медленно струю сухого азота. Затем температуру водяной бани по-

вышают до 70—75 °С и прибор промывают парами ацетона, после чего холодильник заполняют водой. До начала отбора главной фракции приемник несколько раз промывают дистиллятом. Перегонку продолжают до тех пор, пока в сосуде для перегонки не останется приблизительно 100 см³ ацетона. Температуру водяной бани следует снижать по мере уменьшения объема ацетона, во всех случаях она не должна превышать температуру кипения ацетона более чем на 20°.

7.1.2. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5 %-м водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.1.3. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.4. Очистка хлороформа

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, сушат над хлористым кальцием, перегоняют над свежей порцией хлористого кальция.

7.2. Приготовление б N соляной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 200—300 см³ дистиллированной воды, вносят 500 см³ концентрированной соляной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.3.    Приготовление 3 %-го раствори

этилацетата в бензоле

В мерную колбу вместимостью 1 000 ем³ помещают 30 см³ этилацетата, доводят бензолом до метки, тщательно перемешивают.

7.4.    Приготовление 10 %-го раствора

)ти.зацетата в бензоле

В мерную колбу вместимостью 1 000 ем³ помещают 100 см³ этилацетата, доводят бензолом до метки, тщательно перемешивают.

МУК 4.1.1416—03

7.5. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (1 % Реоплекса-400 на Газхроме Q) засыпают в стеклянную колонку, предварительно промытую последовательно этиловым спиртом, ацетоном и гексаном, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 200 °С в течение 8—10 ч.

7.6. Приготовление градуировочных растворов

7.6.1. Исходный раствор МИТЦ (концентрация 100 мкг/см³ В мерную колбу вместимостью 25 см³ помещают 0,0025 г МИТЦ, растворяют в 50—70 ем³ гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают. Раствор готовят непосредственно перед работой.

Для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения МИТЦ из исследуемых образцов используют стандартные растворы, приготовленные на ацетоне.

7.6.2. Раствор № 1 производного МИТЦ (ЛИТО) для градуировки (концентрация 5 мкг/см³)

В круглодонную колбу вместимостью 300 см³ помещают 5 см³ исходного стандартного распюра МИТЦ с концентрацией 100 мкг/см³ (и. 7.6.1), добавляют 30 см³ дистиллированной воды, 50 см³ хлороформа, 0,100 г гидрохлорида этилового эфира саркозина и 2,5 г гидрокарбоната натрия и выдерживают на водяной бане с обратным холодильником при 80 °С в течение 30 мин. После охлаждения содержимое колбы переносят в делительную воронку вместимостью 300 см³, ополаскивая колбу 30—40 см³ дистиллированной воды, которую также переносят в делительную воронку. Дают фазам расслоиться, нижний хлороформный слой отделяют, помещая его в коническую колбу. К водному раствору в делительной воронке добавляют 10 г хлорита натрия и 10 см³ 6N соляной кислоты. Вновь вносят в делительную воронку отделенный ранее хлороформный раствор. Воронку встряхивают в течение 7 мин. После разделения фаз нижний хлороформный слой отделяют, фильтруя его через слой безводного сульфата натрия (~ 2 см), помещенный на бумажном фильтре в конусной химической воронке, в круглодонную колбу вместимостью 300 см³. К водной фазе в делительной воронке добавляют новую порцию хлороформа объемом 80 ем³, воронку вновь встряхивают 7 мин. После разделения фаз нижний хлороформный слой отделяют, фильтруя его через слой безводного сульфата натрия, в круглодонную колбу с ранее полученным экстрактом. Операцию экстракции производного МИТЦ (ДИ ГО) повторяют еще раз, используя порцию хлороформа объемом 60 см³

7

и встряхивая делительную воронку в течение 7 мин. Пропущенный через слой безводного сульфа т ма фия объединенный жсчракг упариваю г на ротационном вакуумном испарителе при температуре не более 35 °С. Д.тя удаления возможной влаги к остатку в колбе добавляют 3—4 см³ бензола и вновь упаривают досуха. Сухой остаток в колбе раегворяют в 100 см³ бензола, получая раегвор № 1 производного МИТЦ (ДИТО) с концетрацией 5 мкг/см³. Раслюр хранится в холодильнике не более 5 дней.

Растворы № 2—4 готовят объемным методом путем последовательного разбавления раствора № 1.

7.6.3. Рабочие растворы № 2—4 производного МИТЦ ШИТО) для градуировки (концентрация 0,5—2,5 мкг/см³)

В 3 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают но 10, 20 и 50 см³ стандартного раствора № 1 с конценфацией 5 мкг/см³ (п. 7.6.2), доводят до метки бензолом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2—4 с конценфацией ДИТО 0,5, 1,0 и 2,5 мкг/см\ со-ответственно.

Растворы готовят непосредственно перед работой.

7.7. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации МИТЦ в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для фадуировки № 1—4.

В инжектор хроматофафа вводят но 2 мм³ каждого фадуировоч-ного раствора и анализируют в условиях хроматофафирования по и. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

7. Н. Подготовка колонки с флорисилом для очистки жстрактов

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 30 см, внутренним диаметром 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты, помещают в колонку 5 г безводного сульфата натрия, 10 г флорисила, затем 5 г безводного сульфата иафия. Колонку промывают 25 см³ 10 %-го этилаце-тата в бензоле (приготовленного но и. 7.4), затем 50 см³ бензола со скоростью 1—2 капли в секунду. После этого колонка готова к работе.

7.9. Проверка хроматографического поведения ДИТО на колонке с флорисилом

В подготовленную по п. 7.8 колонку вносят 2 см³ стандартного раствора № 1 (п. 7.6.2). Промывают колонку 50 см³ 3 %-го раегвора эти-лацетата в бензоле, элюат отбрасывают. Затем промывают колонку

МУК 4.1.1416—03

100 см³ 10 %-го раствора этилацетата в бензоле со скоростью 1—2 капли в секунду. Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 см³ бензола, анализируют содержание производного МИТЦ но и. 9.4.

Фракции, содержащие ДИТО, объединяют вместе и вновь анализируют по п. 9.4.

Рассчитывают содержание вещества в элюатс, определяют полногу смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического поведения ДИТО следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79).

Отобранные пробы огурцов и томатов хранят в стеклянной или полиэтиленовой rape в холодильнике не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Перед анализом образцы измельчают.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция

Образец измельченных огурцов или томатов массой 50 г помещают в колбу Кьельдаля вместимостью 500 см³, вносят 300 см³ воды и 20 см³ гексана, энергично перемешивают. Колбу присоединяют к установке для перегонки с водяным паром. Начинают перегонку, собирая дистиллят в круглодонную колбу вместимостью 300 см³, содержащую 50 см³ хлороформа. Отгоняют гексановую фракцию и около 30 см³ воды.

Далее проводят получение производного МИТЦ (ДИТО) по п. 9.2.

9.2. Получение производного МИТЦ (ДИТО)

В колбу с дистиллятом, полученным по п. 9.1, вносят 0,100 г гидрохлорида этилового эфира саркозина и 2,5 г бикарбоната натрия и выдерживают на водяной бане с обратным холодильником при 80 °С в течение 30 мин. После охлаждения содержимое колбы переносят в делительную воронку вместимостью 300 см³, ополаскивая колбу 30—40 см³ дистиллированной воды, которую также переносят в делительную воронку. Дают фазам расслоиться, нижний хлороформный слой отделяют, помещая его

в коническую колбу. К водному раствору в делительной воронке добавляют 10 г хлорида натрия и 10 см³ 6N соляной кислоты. Вновь вносят в делительную воронку отделенный ранее хлороформный раствор. Воронку встряхивают в течение 7 мин. После разделения фаз нижний хлороформный слой отделяют, фильтруя ею через слой безводною сульфата натрия (~ 2 см), помещенный на бумажном фильтре в конусной химической воронке, в круглодонную колбу вместимостью 300 см³. Операцию экстрак-ции производного МИТЦ (ДИ ГО) повторяют еще дважды, используя по 80 и 60 см³ хлороформа и встряхивая делительную воронку в течение 7 мин. Пропущенный через слой безводного сульфата натрия объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не более 35 °С. Для удаления возможной влаги к остатку в колбе добавляют 3—4 ем³ бензола и вновь упаривают досуха. Сухой остаток в колбе растворяют в 5 см³ бензола и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.

9.3. Очистка жстракта на колонке с флорисилом

Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2, наносят на колонку, подготовленную по п. 7.8. Колбу обмывают трижды порциями бензола по 5 см³, которые также наносят на колонку. Затем промывают колонку со скоростью 1—2 капли в секунду последовательно 50 см³ бензола, 50 см³ 3 %-го раствора этил ацетата в бензоле, элюат отбрасывают. Производное МИТЦ элюируют е колонки со скоростью 1—2 капли в секунду 50 ем³ 10 %-го раствора этилацетата в бензоле (объем данного элюента может быть увеличен или сокращен в соответствии с и. 7.9), собирая элюат непосредственно в колбу для упаривания вместимостью 100—200 ем³. Растворитель в колбе упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С. Остаток растворяют в 2,5 см³ бензола, анализируют содержание производного МИТЦ по п. 9.4.

9.4. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый «Кристалл 2000 М» е термоионным детектором.

Колонка стеклянная длиной 1,5 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Газхромом Q (0,12—0,16 мм) с 1 % Реоплекса-400.

Температура термостата колонки - 165 °С;

детектора - 380 °С; испарителя - 230°С.

Скорость газа-носителя (азота) - 35 ± 1 см³/мин;

водорода - 16 ± 1 см³/мин; воздуха - 200 см³/мин.

1