МУК 4.1.1391-03
Определение остаточных количеств Карбофурана в воде, почве, корнеплодах и зеленой массе сахарной свеклы, капусте, семенах и масле рапса (горчицы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

МУК 4.1.1391—03

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онищенко

24 июня 2003 г.

Дата введения: 30 июня 2003 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Карбофурана в воде, почве, корнеплодах и зеленой массе сахарной свеклы, капусте, семенах и масле рапса (горчицы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.1391—03

1. Вводная часть

Фирма-производитель: Агро-Кеми Кфт.

Торговое название препарата: Хинуфур, ВС, 436 г/л.

Название действующего вещества по ИСО: Карбофуран.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 0-(2,3-дигидро-2,2-диметилбензофуран-7-ил)метилкарбамат. Структурная формула:

Эмпирическая формула: C12H15NO3    М.    м.    221,26

Химически чистый Карбофуран представляет собой белое кристаллическое вещество е температурой плавления 153—154 °С.

1

МУК 4.1.1391—03

Коэффициент распределения в системе н-октанол - вода K_ow logP= 1,52 (при 20 °С).

Растворимость в воде 320 мг/л (при 20 °С). Растворимость (при 25 °С в г/кг): в ацетоне 150, ацетонитриле 140, бензоле 40, диметил-сульфоксиде 270, циклогексаноне 90. Растворимость в дихлорметане > 200 г/л (при 20 °С).

При комнатной температуре нестабилен в щелочных растворах, стабилен в нейтральных и кислых. DTso (при 20 °С) составляет »1 месяца (pH 4), 121 день (pH 7), 31 ч (pH 9). При нагревании со щелочами и кислотами быстро разлагается, в спиртовых растворах щелочей разлагается при комнатной температуре.

Давление паров: 0,031 шРа (20 °С); 0,072 шРа (25 °С).

Краткая токсикологическая характеристика. Карбофуран относится к чрезвычайно опасным веществам по острой пероральной (ЛДзд для крыс - 8,0 мг/кг, для мышей - 14,4 мг/кг, собак - 15,0 мг/кг) и ингаляционной токсичности [ЛК$о (4 ч) для крыс - 0,075 мг/л воздуха (аэрозоль)]. Малоопасен при нанесении на кожу (ЛД₅₀ для крыс > 3000 мг/кг), но вызывает раздражение кожи и слизистых оболочек глаз. Высоко токсичен для пчел и других полезных насекомых.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,002 мг/кг/сутки; ПДК в почве - 0,01 мг/кг; ПДК в воде водоемов -0,02 мг/дм³; МДУ в семенах и масле горчицы и рапса - 0,05 мг/кг, ВМДУ в сухом хмеле - 5,0 мг/кг. Остаточные количества Карбофурана в сахарной свекле и винограде нс допускаются.

Область применения препарата. Карбофуран - инсектицид и нс-матицид системного, контактного и кишечного действия из ipyniibi эфиров карбаминовой кислоты - ингибиторов а цетил холинэстеразы. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, перепончатокрылых, прямокрылых, двукрылых, чешуекрылых (имаго и личинки). Карбофуран, внесенный в почву или нанесенный на семена, может предохранять всходы растений от повреждения блошками, жука-ми-долгоносиками, проволочниками и нематодами.

Зарегистрирован в России под торговым названием: Хинуфур, концентрат суспензии (436 г/л), в качестве инсектицида для подавления численности крестоцветных блошек на ранее при норме расхода 12—15 л/т семян, а также борьбы е комплексом почвообитающих и наземных вредителей сахарной и кормовой свеклы при норме расхода 12—23 л/т семян.

МУК 4.1.1391—03

Затем в колбу добавляют 100 мл смеси ацетонитрил: 0,05 и соляная кислота 9 : 1 и перемешивают содержимое на механическом встряхива-теле 30 мин.

Далее содержимое колбы переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 10 мин при 2 000 об/мин. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в делительную воронку емкостью 500 мл, в которую предварительно добавлено 3 г хлорида натрия. Осадок из центрифужного стакана переносят обратно в коническую колбу. Повторяют экстракцию из почвы еще 2 раза, используя каждый раз по 50 мл смеси ацетонитрил: 0,05 н соляная кислота и перемешивая содержимое колбы на механическом встряхивателе 15 мин. Мосле каждой экстракции содержимое колбы центрифугируют, супернатант фильтруют в делительную воронку. После завершающей экстракции осадок почвы отбрасывают.

Делительную воронку с объединенным экстрактом интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонигрильный слой оставляют в делительной воронке.

К экстракту в делительной воронке прибавляют 40 мл гексана и интенсивно встряхивают 1 мин. Возможно, в делительной воронке будет наблюдаться три слоя жидкости. Нижний слой - вода, не полностью отделившаяся от ацетонитрила при предшествующем встряхивании с хлоридом натрия. Нижний водный слой отбрасывают. Средний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт из химического стакана снова переносят в делительную воронку. Повторяют процедуру промывки ацетонитрильного экстракта гексаном еще 2 раза, используя по 30 мл гексана. После завершающей промывки нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор на 250 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия.

Ацетонитрил упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С. Добавляют в концентратор 20 мл гексана. Тщательно обмывают стенки концентратора, помещают концентратор на 20 с в ультразвуковую ванну, тщательно перемешивают. Содержимое концентратора переносят в чистую делительную воронку на 250 мл. В концентратор добавляют еще 20 мл гексана, помещают его в ультразвуковую ванну на 20 с, тщательно обмывают стенки. Гексан из концентратора переносят в гу же делительную воронку.

11

К объединенным порциям гексана добавляют 50 мл 0,1 н раствора соляной кислоты в деионизированной бидистиллированной воде. Аккуратно встряхивают 1 мин. После полного разделения фаз нижний водный слой фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 250—500 мл. Верхний гексановый слой оставляют в делительной воронке. Повторяют процедуру экстракции Карбофурана из гексана 0,1 н раствором соляной кислоты еще 3 раза, используя по 50 мл раствора. Нижние водные слои фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 200—500 мл.

Переносят водный раствор из конической колбы в делительную воронку на 500 мл, куда добавляют 50 мл хлористого метилена. Интенсивно встряхивают 1 мин. Нижний метиленхлоридный слой собирают в концентратор на 250 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Верхний водный слой оставляют в делительной воронке. Повторяют процедуру экстракции хлористым метиленом еще 3 раза, используя но 50 мл растворителя. Нижние метиленхлоридые слои пропускают через слой безводного сульфата натрия и объединяют в концентраторе на 250 мл.

Хлористый метилен упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С досуха. Остатки растворителя отдувают из концентратора воздухом комнатной температуры не менее 3 мин.

2.5.2.2. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак-Нитрил.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 4 мл гексана, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки копиейгратора. Полученный раствор вносят на каргридж. Концентратор тщательно обмывают 10 мл гексана и также вносят на картридж. Олюат отбрасывают. Карбофуран элюируют с картриджа 10 мл смеси гексан-ацетон 1 : 4, элюат собирают в конценгратор, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила, и аликвогу 20 мкл вводят в хроматограф.

2.5.3. Корнеплоды сахарной свеклы

Образец массой 20 г, измельченный на терке, помещают в коническую колбу объемом 250 мл. Прибавляют 40 мл ацетонитрила и помещают на 5 мин в улыразвуковую ванну, затем перемешивают содержимое колбы 15 мин на механическом вегряхивателе. Процедуру экеграк-ции повторяют еще 2 раза, используя но 40 мл ацетонитрила. Экстракты

МУК 4.1.1391—03

фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в делительную воронку на 250 мл.

В делительную воронку добавляют приблизительно 3 г хлорида натрия, интенсивно встряхивают 1 мин. После разделения слоев нижний водный слой с остатками нерастворившегося хлорида натрия отбрасывают.

К оставшемуся в делительной воронке ацетонитрильному слою прибавляют 30 мл гексана и интенсивно встряхивают 1 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонигрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт из химического стакана снова переносят в делительную воронку. Повторяют процедуру промывки ацетонитрильного экстракта гексаном еще 2 раза, используя по 30 мл гексана. После завершающей промывки нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор на 250 мл, пропуская его через слой безводного еульфага натрия.

Ацетонитрильный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 35 °С. В концентратор добавляют 2 мл ацетона, тщательно растворяют сухой остаток. Концсн-тратор помещают на 30 с в ультразвуковую ванну. В концентратор к ацетону добавляют 20 мл гексана, тщательно перемешивают и обмывают стенки. Содержимое концсшратора переносят в делительную воронку на 250 мл. В концентратор повторно добавляют 20 мл гексана, тщательно обмывают стенки. Гексан переносят в ту же делительную воронку.

К объединенным порциям гексана добавляют 50 мл 0,1 н раствора соляной кислоты в деионизированной бидистиллированной воде. Смесь в воронке осторожно встряхивают 1 мин. После полного разделения фаз водный слой фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 200—500 мл. Верхний гексановый слой оставляют в делительной воронке. Повторяют процедуру экстракции из гексана 0,1 н раствором соляной кислоты еще 3 раза, иенользуя по 50 мл раствора каждый раз. Нижние водные слои фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 250—500 мл. После завершающей экстракции гексановый слой отбрасывают.

Переносят раствор соляной кислоты из конической колбы в делительную воронку на 500 мл, куда добавляют 50 мл хлористого метилена. Интенсивно встряхивают 1 мин. После разделения фаз нижний мети-ленхлоридный слой собирают в концентратор на 250 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Верхний водный слой оставляют

13

в делительной воронке. Повторяют процедуру экстракции хлористым метиленом еще 3 раза, используя по 50 мл растворителя. Нижние мети-ленхлоридные елои пропускают через елой безводного сульфата натрия и объединяют в концентраторе на 250 мл.

Хлористый метилен упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 35 °С досуха. Остатки растворителя отдувают из концентратора воздухом комнатной температуры не менее 3 мин.

Далее проводят процедуру очистки на концетрирующем патроне Диапак-Нигрил, как описано в п. 2.5.2.2.

2.5.4. Зеленая масса сахарной свеклы. Капуста

Измельченный образец массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл. Прибавляют 40 мл ацетонитрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну. Затем смесь перемешивают 10 мин на механическом встряхивателе. Процедуру экстракции повторяют еще 2 раза, используя по 40 мл ацетонитрила. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в делительную воронку на 250 мл.

В делительную воронку добавляют 5 г хлорида натрия, интенсивно встряхивают 1 мин. После разделения фаз нижний водный елой е остатками нерастворившегося хлорида натрия отбрасывают.

К оставшемуся в делительной воронке ацетонитрильному слою прибавляют 30 мл гексана и интенсивно встряхивают 1 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацстонифильный эксфакт из химического стакана снова переносят в делительную воронку. Повторяют процедуру промывки ацетонитриль-ного экстракта гексаном еще 2 раза, используя по 30 мл гексана. После завершающей промывки нижний ацстонифильный елой собирают в конценфатор на 250 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия.

Ацетонифильный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при темперагуре не выше 35 °С. В концентратор добавляют 2 мл ацетона, тщательно растворяют сухой остаток. Конценфатор помещают на 1 мин в улы развуковую ванну. В концентратор к ацетону добавляют 20 мл гексана, тщательно перемешивают и обмывают стенки. Содержимое концетратора переносят в делительную воронку на 250 мл. В конценфатор повторно добавляют 20 мл гексана, тщательно обмывают стенки. Гексан переносят в гу же делительную ворои-ку.

МУК 4.1.1391—03

К объединенным порциям гекеана добавляют 50 мл 0,1 н раствора соляной кислоты в деионизированной бидистиллированной воде. Осторожно встряхивают в течение 1 мин. После полного разделения фаз водный слой фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 200—500 мл. Верхний гексановый слой оставляют в делительной воронке. Повторяют процедуру экстракции Карбофурана из гексана 0,1 н раствором соляной кислоты еще 3 раза, используя по 50 мл раствора. Нижние водные слои фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 250—500 мл. После завершающей экстракции гексановый слой отбрасывают.

Переносят раствор соляной кислоты из конической колбы в делительную воронку на 500 мл, куда добавляют 50 мл хлористого метилена. Интенсивно вегряхивают 1 мин. После разделения фаз нижний мсти-ленхлоридный слой собирают в концентратор на 250 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Верхний водный слой оставляют в делительной воронке. Повторяют процедуру экстракции из раствора соляной кислоты хлористым метиленом еще 3 раза, используя по 50 мл растворителя. Нижние метиленхлоридные слои пропускают через слой безводного сульфата натрия и объединяют в концентраторе на 250 мл.

Хлористый метилен упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С досуха. Остатки растворителя отдувают из концентратора воздухом комнатной температуры нс менее .3 мин.

Далее проводят процедуру очистки на концентрирующем патроне Диапак-Пигрил, как описано в п. 2.5.2.2.

2.5.5. Семена рапса (горчицы)

Образец размолотых семян рапса массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл. Прибавляют 40 мл ацетонигрила и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну и затем перемешивают смесь 10 мин на механическом встряхивагеле. Процедуру экстракции повторяют еще 2 раза, используя по 40 мл ацетонигрила. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в делительную воронку на 250 мл.

К объединенному экстракту в делительной воронке прибавляют 40 мл гексана и интенсивно вегряхивают 1 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Верхний гексановый слой огбраеывают. Ацетонитриль-

15

МУК 4.1.1391—03

ный экстракт из химического стакана снова переносят в делительную воронку. Повторяют процедуру промывки ацетонитрильного экстракта гексаном еще 3 раза, используя по 30 мл гексана. После завершающей промывки нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор на 250 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия.

Ацетонитрильный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 35 °С до масляного остатка. Добавляют в концентратор к масляному остатку 20 мл хлористого метилена. Растворяют масло, тщательно перемешивают. Раствор переносят в делительную воронку на 250 мл. В концентратор добавляют еще 20 мл хлористого метилена. Концентратор помещают в ультразвуковую ванну на 30 с, тщательно обмывают стенки. Хлористый метилен из концентратора переносят в гу же делительную воронку.

Добавляют в делительную воронку 40 мл 0,05 н расгвора соляной кислоты в деионизированной бидистиллированной воде. Интенсивно встряхивают 1 мин. Для того чтобы разбить образующуюся эмульсию, в делительную воронку, при плавном перемешивании, порциями но 0,5 мл прибавляют 0,5—2,0 мл 40 % расгвора фосфорно-вольфрамовой кислоты. После полного разделения фаз нижний метиленхлоридный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Скоагулировав-шийся белок в химический стакан нс собирают. Верхний слой с хлопьями белка отбрасывают. Делительную воронку ополоскивают небольшим количеством деионизированной бидистиллированной воды. Хлористый метилен из химического стакана снова переносят в делительную воронку. Повторяют процедуру промывки дихлорметаиа 0,05 н раствором соляной кислоты еще 2 раза, используя но 40 мл раствора. При этом также может образовываться стойкая суспензия. Для се разрушения следует добавлять при плавном перемешивании 0,5—2,0 мл 40 %-ной фосфорно-вольфрамовую кислоту. После завершающей промывки нижний метиленхлоридный слой фильтруют через бумажный фильтр «красная лента», на который добавлено 5 г безводного сульфата натрия, в концентратор на 100 мл.

Хлористый метилен упаривают на ротационном вакуумном иена-ригеле при температуре не выше .35 °С до масляного остатка. Добавляют в концентратор к масляному остатку 20 мл гексана. Растворяют масло, тщательно перемешивают. Масло, растворенное в гексане, переносят в делительную воронку на 250 мл. В концентратор добавляют еще 20 мл гексана, концентратор помещают на ультразвуковую ванну на 30 с.

МУК 4.1.1391—03

2. Методика определении остаточных количеств Карбофурана в воде, почве, корнеплодах и зеленой массе сахарной свеклы, капусте, семенах и масле ранса (горчицы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Карбофурана методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием УФ-детектора, после его экстракции из анали зируемой пробы органическим растворителем, очистки экстракта методом перераспределения между двумя нссмсшивающимися жидкими фазами и, при необходимости, на концентрирующем патроне Диапак.

Идентификация вещества проводиться по времени удерживания. Количественное определение Карбофурана осуществляется методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода ВЭЖХ представлена в табл. 1 и 2.

Таблица 1

Метрологическая характеристика метода

Анализируемый объект	Метрологические параметры, р 0,95, п 20
	предел обнару жения Карбофу рана, мг/кг	диапазон определяемых концентраций, мг/кг	среднее значе ние опреде ления, %	стандартное отклонение, S	доверительный интервал среднего результата, %, ±
вода	0,01	0,01 -0,10	82,22	0,0287	82,22 ± 1,34
почва	0,005	0,005 0,050	74,40	0,0243	74,40+ 1,14
корнеплоды сахарной свеклы	0,05	0,05—0,50	75,79	0,0344	75,79+ 1,61
зеленая масса сахарной свеклы	0,05	0,05 0,50	79,84	0,0597	79,84 » 2,7%
капуста	0,05	0,05 0,50	75,51	0,0436	75,51 + 2,04
семена ранса (горчицы)	0,05	0,05—0,50	80,39	0,0499	80,39 + 2,34
масло рапса (горчицы)	0,05	0,05 0,50	81,61	0,0487	81,61 г 2,28

3

Таблица 2 Доверительный интервал и полнота определения Карбофурана в воде, почве, корнеплодах и зеленой массе сахарной свеклы, капусте, семенах и масле ранса (горчины)

Анализируемый объект Добавлено Карбофурана, мг/кг (мг/л) Обнаружено Карбофурана, мг/кг (мг/л) Доверительный интервал, _}_ 11олнота определения. % 1 2 3 4 5 вода 0,0100 0,00819 0,0001 81,88 0,0200 0,0163 0,0008 81,36 0,0500 0,0412 0,0027 82,42 0,1000 0,0832 0,0033 83,23 почва 0,0050 0,0036 0,0001 72,62 0,0100 0,0074 0,0002 73,60 0,0200 0,0152 0,0004 76,02 0,0500 0,0377 0,0023 75,36 корнеплоды сахарной свеклы 0,05 0,0371 0,0020 74,19 0,10 0,0782 0,0023 78,18 0,20 0,1439 0,0014 71,94 0,50 0,3944 0,0064 78,87 зеленая масса сахарной свеклы 0,05 0,0421 0,0044 84,25 0,10 0,0847 0,0026 84,66 0,20 0,1506 0,0071 75,29 0,50 0,3758 0,0044 75,15 капуста 0,05 0,0386 0,0020 77,24 0,10 0,0737 0,0018 73,72 0,20 0,1454 0,0060 72,72 0,50 0,3918 0,0416 78,37 семена рапса (горчицы) 0,0500 0,0393 0,0040 78,61 0,1000 0,0768 0,0046 76,82 0,2000 0,1635 0,0073 81,72 0,5000 0,4225 0,0190 84,50 масло рапса (горчицы) 0,0500 0,0414 0,0012 82,79 0,1000 0,0827 0,0046 82,71 0,2000 0,1717 0,0095 85,85 0,5000 0,3758 0,0110 75,16

Фильтры бумажные    ТУ 6-09-1678—77

Хлороформ, хч    ГОСТ 20015-74

2.2.2. Приборы, оборудование и посуда

Хроматограф жидкостный Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,0050 сд. адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP-8, зернение 5 мкм, фирма Уотерс, или колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм. Symmetry Shield RP-18, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.

Аллонж прямой е отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами)

Баня водяная

Ванна ультразвуковая «Серьга», или аналогичная Весы аналитические ВЛА-200, или аналогичные

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г Воронки делительные на 500 и 250 мл Воронки конические, стеклянные диаметром 50—60 мм Встряхиватель механический, или аналогичный

Испаритель ротационный вакуумный ИР-1М, или аналогичный Колбы круглодонные со шлифами Колбы мерные на 100 мл, 50 мл и 25 мл Колбы плоскодонные конические со шлифами

Мельница лабораторная электрическая, или аналогичная Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50—100 мкл Насос вакуумный водоструйный

МУК 4.1.1391—03

Палочки стеклянные

Пипетки на 1,2, 5 и 10 мл

Стаканы стеклянные на 100—500 мл

Стеклянный холодильник с

прямой трубкой

Центрифуга

Цилиндры мерные на 25, 50, 100 и 500 мл

2.3. Отбор проб

Огбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79).

Отобранные пробы воды, почвы, сахарной свеклы, капусты, семян и масла рапса (горчицы) анализируются в день отбора или могут храниться в холодильнике при 4 °С в течение 3 дней.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Пробы сахарной свеклы и капусты замораживают и хранят при температуре -18 °С. Непосредственно перед определением пробы корнеплодов сахарной свеклы и капусты измельчают на терке. Пробы зеленой массы сахарной свеклы измельчают ножницами.

Пробы семян рапса (горчицы) подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света до стандартной влажности и хранят в воздушно-сухом состоянии в бумажной или тканевой упаковке. Перед анализом пробы семян рапса измельчают на лабораторной мельнице.

Пробы масла рапса (горчицы) хранят в плотно закрытой таре в холодильнике при температуре 0—5 °С.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартных растворов

2.4.1.1. Приготовление стандартных растворов Карбофурана в ацетонитриле.

Взвешивают 50 мг Карбофурана в мерной колбе на 50 мл, растворяю! навеску в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный раствор в ацетонитриле № 1 с концентрацией 1 мг/мл).

7

Стандартный раствор № 1 хранят в мерных колбах с притертыми пробками в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разбавления готовят стандартный раствор е концентрацией 10 мкг/мл (стандартный раствор в ацетонитриле № 2), который хранится в холодильнике в течение 30 дней в плотно закрытой посуде.

Стандартные растворы Карбофурана в ацетонитриле используют для построения градуировочного графика и внесения в воду, почву, корнеплоды и зеленую массу сахарной свеклы, капусту, семена рапса при отработке и апробации методики.

2.4.1.2. Приготовление стандартных растворов Карбофурана в гексане.

Взвешивают 50 мг Карбофурана в мерной колбе на 100 мл. Ингси-сивно встряхивая, растворяют навеску в гексане и доводят объем до метки гексаном (стандартный раствор в гексане № 3 с концентрацией 500 мкг/мл). Для лучшего растворения Карбофурана в гексане мерную колбу можно на 1 мин поместить в ультразвуковую ванну.

Стандартный раствор № 3 хранят в мерных колбах с притертыми пробками в холодильнике в течение 6 месяцев.

М его дом последовательного разбавления готовят стандартный раствор е концентрацией 10 мкг/мл (стандартный раствор в гексане № 4), который хранят в мерных колбах с притертыми пробками в холодильнике в течение 30 дней.

Стандартные растворы Карбофурана в гексане используют для внесения в масло рапса (горчицы) при отработке и апробации методики.

2.4.2. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хромато1рафическую колонку устанавливают в термостате хрома-Ю1рафа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1,0 мл/мин в течение 3—4 часов.

2.4.3. Приготовление растворов для жидкостной хроматографии

Для приготовления подвижной фазы используют свежснсрсгнан-ные ацетонитрил и деионизированную бидистиллированную воду.

2.4.3.1. Приготовление деионизированной бидистиллированной воды.

Бидистиллят из дистиллятора заливают в круглодонную колбу подходящего объема, кипятят в течение 6 ч с перманганатом калия, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.

МУК 4.1.1391—03

2.4.3.2. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ.

В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 400 мл ацетонитрила и 500 мл деионизированной бидистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.

2.4.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация Карбофурана в растворе) методом последовательного разбавления ацетонитрилом из стандартного раствора № 2 готовят градуи-ровочные растворы с концентрациями 0,25; 0,50; 1,00; 2,50 и 5,00 мкг/мл. Вводят в хромато1раф по 20 мкл из соответствующих ipa-дуировочных растворов.

Измеряют площадь пиков (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации). Строят график зависимости площади хромато-графического ника от концентрации Карбофурана.

2.4.5. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-Humpiu

2.4.5.1.    Подготовка концентрирующего патрона Диапак-Нитрил для очистки экстракта.

Все процедуры происходят е использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин.

Патрон Диапак-Нитрил устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).

Концентрирующий патрон промывают 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1 : 4. Элюат отбрасывают. В течение 4 мин сушат патрон, продувая через него воздух, не нанося при этом никакого элюента. Затем промывают патрон 20 мл гексана. Элюат отбрасывают. После промывки патрона гексаном нельзя допускать высыхания его поверхности!

2.4.5.2.    Проверка хроматографического поведения Карбофурана на концентрирующем патроне Диапак-Нитрил.

При отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов проводят изучение поведения Карбофурана на патроне. Для этого на патрон, подготовленный, как указано в разделе

2.4.5.1, наносят 4 мл стандартного раствора Карбофурана концентрацией 1,0 мкг/мл в гексане. Затем патрон промывают 10 мл гексана, отбирая последовательно по 5 мл элюата. Каждую фракцию объемом 5 мл собирают отдельно и упаривают на ротационном вакуумном испарителе до-

суха при температуре не выше 35 °С. Карбофуран смывают е патрона 10 мл емееи гексан-ацетон 1 : 4, последовательно отбирая по 5 мл элюата. Каждую фракцию объемом 5 мл собирают отдельно, упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре нс выше 35 °С. Сухие остатки растворяют в 2 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и вводят в хроматограф но 20 мкл раствора.

По результатам обнаружения Карбофурана в каждой фракции определяют объем смеси гексан-ацетон, необходимый для полного вымывания Карбофурана из патрона. Фракции, содержащие Карбофуран, объединяют, хроматографируют и определяют полноту смыва вещества с нагрона.

2.5. Описание определении

2.5.1.    Вода

Пробу воды объемом 200 мл фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в делительную воронку емкостью 500 мл.

Экстрагируют Карбофуран из воды 50 мл хлористого метилена, интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. После разделения фаз нижний метиленхлоридный слой собирают в круглодонную колбу, пропуская через безводный сульфат натрия. Верхний водный слой оставляют в делительной воронке. Экстракцию повторяют еще 3 раза, используя каждый раз по 50 мл хлористого метилена.

Объединенный эксгракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани не более 35 °С. Остатки растворителя отдувают из конценгратора воздухом комнатной температуры не менее 3 мин. Сухой остаток растворяют в 4 мл ацетони-трила и вводят в хромаиираф 20 мкл пробы.

В случае недостаточной чистоты анализируемых проб воды используют процедуру очистки на концентрирующем патроне Диапак-Нитрил, как описано в п. 2.5.2.2.

2.5.2.    Почва

2.5.2.1. Экстракция и предварительная очистка.

Навеску 100 г воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу на 500 мл. К навеске почвы прибавляют 20 мл 0,05 н раствора хлороводородной (соляной) кислоты в деионизированной бидистилли-рованной воде. Встряхивают коническую колбу в течение минуты для равномерного смачивания навески почвы.