Государственное саннтарио эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Измерение массовых концентраций аверсектина С (смесь изомеров) в воздухе рабочей зоны методом высокоэфффективной жидкостной

хроматографии

Методические указания МУК 4.1.1326-03

Издание официальное

Минздрав России Москва 2004

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Измерение массовых концентраций аверссктина С (смесь изомеров) в воздухе рабочей зоны методом высокоэфффектнвной жидкостной хроматографии

Методические указания

МУК 4.1.1326-03

10

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде С ± Д мг/м³, Р=0,95, где Д-характеристика погрешности, Д - 0,20С+0,0006.

13. Контроль погрешности измерений

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл.З в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

Таблица 3. Результаты метрологической аттестации методики количественного химического анализа аверсектина С.

Диапазон определяемых концентраций аверсектина С, мг/м3 Наименование метрологической характеристики Характеристика погрешности Д, мтУм3; Р=0,95 Норматив оперативного контроля точности К, мг/м3; Р=0,90, т=2 Норматив оперативного контроля воспроизводимости D, мг/м3; Р=0,95, т=2 От 0,025 до 0,5 0,20С+0,0006 0,21С+0,0007 0,12С +0,0013

13.1. Оперативный контроль воспроизводимости.

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Огбирают реальные пробы воздуха из одною традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики, привлекая различных исполнителей и максимально варьируя условия проведения анализа (партии реактивов, набора мерной посуды и т.д.), и получают два результата С| и С₂ анализов. Результаты не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

|C,-C₂|<D

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в неделю.

13.2. Оперативный контроль точности.

Оперативный контрол», точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, делают добавку анализируемого компонента 8С из раствора, нанося его на фильтр. Результаты анализа С| без добавки и С₂ с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, с одним набором посуды и т.д. Величина

li

добавки 5C должна соответствовать 50- 150 % от содержания компонента в пробе, а величина С₂ не должна выхолить за верхнюю границу диапазона измерения. Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по

характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

| С₂ - С| - 8С | < К

14. Нормы затрат времени на анализ.

Для проведения серии анализов из 6-и проб при последовательном проведении анализов воздуха требуется 9 часов.

Тиражировано Издательским отделом Федерального центра госсанэпиднадзора Минздрава России Тираж 300 экз.

2

1.    Подготовлены НИИ медицины труда РАМН (Макеева Л.Г., Муравьева Г.В.)

2.    Разработаны ООО НБЦ “Фармбиомед” (В.Т. Тер-Симонян, Е.Б.Кругляк), Российским государственным медицинским университетом (Е.Б.Гугля).

3.    Рассмотрены на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по государственному сани гарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме ^м Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение” и методбюро подсекции “Промышленно-санитарная химия” Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии”.

4.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Министерстве Здравоохранения Российской Федерации. (Протокол № 18 от 27 марга 2003 года).

5.    Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 16 мая 2003 года.

6.    Введены впервые.

3

Содержание    Стр.

I    .Общие положения и область применения    4

2.    Характеристика вещества    4-5

3.    Погрешность измерений    6

4.    Метод измерений    6

5.    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы    6

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы    6

5.2. Реактивы    7

6. Требования безопасности    7

7. Трсбования к квалификации оператора    7

в.Условия измерений    7

9. Подготовка к выполнению измерений    7

9.1.    Приготовление растворов    7

9.2.    Подготовка прибора    8

9.3. Установление градуирово'шой характеристики    8

9.4.    Отбор проб воздуха    9

10. Выполнение измерений    9

II    Вычисление результатов измерений    9

12.    Оформление результатов анализа    10

13.    Контроль погрешности измерений    10

13.1 .Оперативный контроль воспроизводимости    10

13.2.0псративный контроль точности    10

14.    Нормы затрат времени на анализ    11

УТВЕРЖДАЮ

нный

миской Федерации Министра здравоохранения

Г. Г Онищенко 2003г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовых концентраций авсрссктина С (смеси изомеров) в воздухе рабочей зоны метолом высокоэффективной жидкостной хроматографии Методические указания

МУК 4.1    -оз

1.    Общие положения и область применения

11астоящис методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание аверсектина С в диапазоне массовых концентраций от 0,025 до 0,5 мг/м³.

Методические указания разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ “Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования”, ГОСТ Р 8.563-96 “ Государсхвслная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений”, МИ 2335-95 “Внутренний контроль качеезва результатов количественного химического анализа”, МИ 2336-95 “Характеристика погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания”.

Методические указания предназначены для санитарных лабораторий промышленных предприятий, организаций и учреждений, где возможен контакт работающих с авсрсектином С и других лабораторий, аккредитованных в установленном порядке на право проведения таких исследований.

2.    Характеристики вещества

2 I. Струкзурная формула

Аверсектин С представляет собой смесь восьми близких в химическом оз ношении природных 16-членных макроциклических лактонов, продуктов жизнедеятельности культуры Streptomycis avermitilis (табл.1). Компоненты А| и В| имеют двойную связь в положении 22-23 (см. рисунок), у компонентов Аг и Bj эта связь восстановлена. Основные компоненты - авермсктияы В| и Вг, причем содержание компонента В|, (10E,14T,16E,2ZH1R,4S,S',6S,6'R,8R,12S,20R,21R,24S)-6*-f(S)J-scc-6yTHn)-21,24-гидрокси-8', 11,13,22-тетраметил-2-оксо-3,7,19-триоксатстрацикло^,'[ 16,61 ]-4,8О,22,24-пентакоза-0,14,16,22-тетрае11-6-спиро-2^,(5',6'-дигидро-2И-пиран)-12-ил-2,6-дидеокси-4-2-(2,60-дидеокси-3-0-метил-а-1 -арабино= гсксапиранозилУЗ^-метил-а-арабиногскса-пиранозида) в смеси составляет не менее 40 %.

5

Таблица 1. Характеристика авермсктинов.

Тип авср-мсктина Эмпирическая формула Рсгистрацион ные номера по CAS Молскуляр-ная масса Заместители Rs R26 А|, С49Н74О14 886 ОСНз С2Н5 А2, С4«Н7бО|5 904 ОСНз с2н5 в„ С4«Н720|4 65195-55-3 872 ОН с2н5 в2. C4RH740IJ 65195-56-4 890 ОН С2Н5 Alb С49Н72014 872 ОСН3 СНз Л2ь С49Н74015 890 ОСНз СНз Bib С47Н70О14 65195-57-5 858 ОН СНз в* С47Н70О15 65195-58-6 876 ОН СНз

2.5. Физико-химические свойства.

Лверссктии С - порошок белого или желтовато-белого цвета, легко растворим в хлорированных углеводородах, ацетоне, бензоле, растворим в низших спиртах, практически нерастворим в воде, петролейном эфире. Температуры плавления авермектинов (с разложением) составляют около 150°С.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика

Авсрссктин С - иротивопаразитарный препарат, обладает нервно-паралитическим действием.

6

Предельно допустимая концентрация (ПДК) аверссктина С в воздухе 0,05 мг/м³. Класс опасности - первый.

3.    Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций аверссктина С с погрешностью не более ± 24% при доверительной вероятности 0,95.

4.    Метод измерений

Измерение массовых концентраций аверссктина С основано на получении флуоресцирующих производных авермектинов путем их дериватизации 1-мстилимидазолом и трифторуксусным ангидридом. Последующее количественное определение авермсктина В»,, одного из компонентов аверсектина С, проводят методом обращенио-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением флуоресцентного детектора при длинах волн возбуждения и испускания 365 и 470 нм соответственно.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания авермсктина В|, в хроматографируемом объеме раствора 0,004 мкг.

Нижний предел измерения концентрации аверссктина С в воздухе 0,025 мг/м³ (при отборе 140 дм³ воздуха).

Определению не мешают другие авермектины.

5.    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, магериалы.

5.1.1.    Хроматограф жидкостной Du Pont 8800 (США) с флуоресцентным детектором

5.1.2.    Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм и внутренним диаметром 4 мм, заполненная сорбентом Диасорб-130-С16Т с размером частиц 5 мкм (фирма БиоХимМак, Россия)

5.1.3.    Аспирационное устройство ПУ-ЗЭ, ТУ 4215-000-11696625-95

5.1.4.    Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-88Е

5.1.5.    Меры массы, ГОСТ 7328-82 Е

5.1.6.    Фильтродержатель, ТУ 95.72.05-77

5.1.7.    Набор для фильтрации жидкостей, производство НПФ «Биохром»

5.1.8.    Колбы мерные вместимостью 25 и 100 см³, ГОСТ 1770-74Е

5.1.9.    Пипетки вместимостью от 1,2, 5 и 10 см³, ГОСТ 29227-91

5.1.10.    Цилиндр мерный со шлифом вместимостью 100 см³, ГОСТ 1770-74Е

5.1.11.    Бюксы 50/30, ГОСТ 25336-82Е

5.1.12.    Пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 см³, ГОСТ 25336-

82Е

5.1.13.    Воронка фильтровальная ВФ-20/16, ГОСТ 25336-82

5.1.14.    Центрифуга низкоскоростная ЦЛС-3, ТУ 5-375-4170-73

5.1.15.    Цсн грифужныс пробирки стеклянные вместимостью 5 см³ с полиэтиленовыми пробками

5.1.16.    Ультразвуковой диспергатор УЗДН-А, ТУ 25-7401.0127-88

5.1.17.    Холодильник бытовой, ГОСТ 16317-87

7

5.1.18.    Вакуумный испаритель ротационный ИР- 1М, ТУ 25-11-917-76

5.1.19.    Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80

5.2.    Реактивы

5.2.1.    Авермектин Bi РСО 9340-201-00-494189-99, содержание авермектина В|, 88,88

%

5.2.2.    Аверсектин С, ТУ 9383-009-17266133-97, содержание авермектина В|, не менее 40%

5.2.3.    Ацетонитрил «для жидкостной хроматографии», ТУ-6-09-14-2167-84

5.2.4.    Спирт этиловый, х.ч., ТУ 6-0951710-72

5.2.5.    1-Метилимидазол импортный, фирма Мерк

5.2.6.    Трифгоруксусный ангидрид импортный, фирма Мерк

5.2.7.    Спирт метиловый, х.ч., ГОСТ 6995-77

5.2.8.    Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72

5.3.    Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реакгивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данной МВИ.

6.    Требования безопасности

6.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные дня работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005 88.

6.2.    При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности но ГОСТ 12.1.004 -76.

6.3.    При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7.    Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы на жидкостном хроматографе.

8.    Условия измерений

8.1.    Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20±5)°С, атмосферном давлении 84 -106 к11а и влажности воздуха нс более 80%.

8.2.    Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.    Подготовка к выполнению измерения

9.1. Приготовление растворов 9.1.1. Стандартный раствор №1 авермектина В|_адля градуировки с концентрацией 88,8 мкг/см³ готовят путем растворения точной навески 10 мг авермектина В| в этиловом спирте в мерных колбе объемом 100 см³. Раствор хранят нс более 2-х месяцев в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор № 2 авсрмектина В| с концентрацией авермектина В|, 3,52 мкг/см³ готовят путем разведения 4 см³ стандартного раствора № 1 в мерной колбе на 100 см³ этиловым спиртом. Раствор хранят не более 2-х педель в холодильнике.

9.1.3.    Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 98 см³ метилового спирта и 2 см³ дистиллированной воды. I !епосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью набора для фильтрации.

9.1.4.    Реакционную смесь готовят из трифторуксусного ангидрида и ацетонитрила в соотношении 1:2 и помещают ее в холодильник при 0°С (смесь готовят в день работы и нс хранят).

9.2.    Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3.    Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, вьгражакмцую зависимость площади пика авермектина В|₄(в условных единицах) от количества массы (мкг) авермектина Bj.b хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием {радуировочных растворов, которые готовят согласно табл.2. Градуировочные растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации авермектина В|_а

№	Стандартный раствор № 2 авсрмск-тина Bi„ см3	Этиловый спирт, см3	Концентрация вещества, мкг/см3	Содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, мкг
1	0	25	0	0
2	1,0	24,5	0,141	0,0040
3	1,5	23,5	0,211	0,0060
4	2,5	22,5	0,352	0,0102
5	о	20,0	0,704	0,0201
6	10,0	15,0	1,408	0,0404
7	20,0	5,0	2,816	0,0804

Для построения градуировочного графика отбирают по 2,0 см³ каждого градуировочного раствора, помещают в центрифужные пробирки и упаривают досуха на вакуумном испарителе. В каждую пробирку с сухим остатком вносят по 0,5 см³ ацетонитрила, пробирку энерпшно встряхивают и обрабат ывают ультразвуком в течение 30 с. Затем пробирку повторно встряхивают и повторно обрабатывают ультразвуком. В каждую пробирку вносят по 0,05 см³ 1-метилимидазола. Пробирку закрывают, тщательно перемешивают содержимое в течение 5-10 с, обрабатывают ультразвуком, центрифугируют и помещают в холодильник при 0°С на 10 минут. После охлаждения в пробирку с образцом вносят 0,15 см³ охлажденной реакционной смеси. Пробирку закрывают и выдерживают в холодильнике в течение 1 часа. Общий объем раствора пробы после проведения реакции - 0,7 см³.

Растворы помещают в пробоотборнос устройство хроматографа. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб: состав элюента    метиловый    спирт    :    дистиллированная    вода,    98:2

скорость потока элюента    2,0    см³/мин

объем вводимой пробы

длины волн флуоресцентного детектора

Время удерживания авсрмектина    В|,    9,7    мин

Bi_a    12,2    мин

На полученной хроматограмме измеряют площадь пика с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6-н растворов разных концентраций и растворителя, проводя нс менее 5-и параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную кривую зависимости площади пика авермсктина Вц от количества компонента в пробе (в мкг).

Проверку градуировочного графика проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

9.4. Отбор проб воздуха Воздух с объемным расходом 20 дм³/мин аспирируют через фильтр АФА ВП-20. Для измерения ‘/а ПДК достаточно отобрать 140 дм³. Пробы можно хранить не более десяти суток в защищенном от света месте.

Отбор проб сопровождается составлением акта отбора, с указанием, при какой температуре и давлении он проводился.

10. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и приливают пипеткой 10 см³ раствора этанола. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 10 мин. Экстракт фильтруют через воронку с пористой пластинкой №1 или № 2 и сливают в пробирку с притертой пробкой. Степень экстракции с фильтра 93 %. Отбирают 2 см³ раствора, помещают в центрифужную пробирку и упаривают досуха. Далее проводят химическую трансформацию и хроматографический анализ, аналогично тому, как описано в п. 9.3 для градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого авермектииа Вц в pact ворс проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

11. Вычисление результатов измерений

Концентрацию авсрсектина С “С" (в мг/м³) в воздухе вычисляют по формуле:

а в г

С ----,    где

К б V д

а - содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятый для хроматографирования, см³; в - общий объем раствора пробы после проведения химической реакции, см³; г- объем жидкой пробы после экстракции с фильтра, см³; д - объем жидкой пробы, взятый для упаривания, см³;

V - объем воздуха, отобранный для анализа и проведенный к стандартным условиям, дм³ (см. Приложение 1);

К = 0,4 - массовая доля авермектииа В|, в авсрссктине С согласно ТУ 9383-009-17266133-