Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды
Сборник методических указаний
Выпуск 2 Часть 5 МУК 4.1.1229—4.1.1233—03
Издание официальное
Москва • 2006
Глиный гооударотмииый миипфный врач Российской Федерации,
Первый заместитель Министр» здравоохранения Российской Федерации
16 марта 2003 года
Дата введения: 1 июля 2003 г.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств тетраконазола в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур методом газожидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.1229—03 1
МУК 4. U 229—03
Область применения: фунгицид широкого спектра действия. Гигиенические нормативы:
ОДК в почве - 0,4 мг/кг;
ПДК в воде водоемов - 0,0] мг/дм1;
МДУ в зерне хлебных злаков - 0,2 мг/кг.
2. Методика определения остаточных количеств тетраконазола в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении тетраконазола методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора (ДЭЗ или ДПР) после его извлечения из образцов органическим растворителем, очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами и колоночной хроматографии на флорисиле. Идентификация тетраконазола проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной градуировки.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.
Метрологическая характеристика метода
Таблица 1 |
Объект
анализа |
Предел обнаружения, мг/кг |
Диапазон
измеряемых
концентраций,
мг/кг |
Среднее значение определения, % (для каждого объекта п = 24) |
Относи
тельное
стандартное
отклонение,
% |
Доверительный интервал среднего, п ~ 24,
Р = 0,95 |
Вода |
0,0005 |
0,0005—0,01 |
90,8 |
0,99 |
2,0 |
Почва |
0,001 |
0,001—0,02 |
80,3 |
2,19 |
4,4 |
Зеленая
масса |
0,005 |
0,005—0,5 |
83,1 |
1»75 |
3,6 |
Солома |
0,005 |
0,005—0,1 |
84,2 |
2,76 |
5,6 |
Зерно |
0,0025 |
0,0025—0,05 |
86,0 |
2,53 |
5,1 |
|
2.1.3. Избирательность метода
Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.
5
МУК 4.1.1229—03
2L2. Реактивы и материалы
Тетраконазол, аналитический стандарт с содержанием д.в. 9938 %
Ацетон, хч
н-Гексан, ч, свежеперегнанный Дихлорметан, хч Этилацетат, чда Метанол, хч
Натрий серно-кислый безводный, чда,
свежепрокаленный
Натрий хлористый, хч
Вода дистиллированная
Насадки для колонок: 5 % SE-30 на хроматоне
N-Super (0,125—0,160 мм), имп.
5 % ХЕ-60 на хроматоне N-Super (0,16—
0,20 мм), имп.
Флорисил для хроматографии (0,150—0,250 мм) Merck, имп.
Бумага фильтровальная
Азот особой чистоты (в баллоне с редуктором)
Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР или ДЭЗ) и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1 или 2 м; внутренним диаметром 3 мм Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные Весы технические ВЛКТ-500 Установка ультразвуковая «Серьга»
Мельница ножевая РМ-120 или лабораторная зерновая ЛМЗ
Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М или аналогичный Микрошприц МШ-10, МШ-10М Насос водоструйный
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС Воронки лабораторные В-75-110
Воронки делительные ВД-3-500
Цилиндры мерные на 100 см3
Колбы мерные на 25,50,100 см3
Пипетки на 1,2, 5, 10 см3
Пробирки с притертыми пробками на 10,20 см3
Колонка стеклянная хроматографическая длиной
25 см, диаметром I см.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№2051—79 от 21.08.79). Отобранные пробы зеленых растений хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике при 0— 4 °С в течение недели, в морозильной камере при -18 °С в течение 6 месяцев. Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторной мельнице.
2.5. Подготовка к определению
2.5. I. Кондиционирование колонки
Готовую насадку (5 % SE-30 или ХЕ-60 на хроматоне N-Super) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 8—10 часов.
2.5.2. Приготовление стандартного и градуировочных растворов
Берут точную навеску тетраконазола и растворяют в ацетоне таким образом, чтобы получить стандартный раствор с концентрацией 1 мг/мл. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 6 месяцев.
Градуировочные растворы в гексане с концентрациями 0,001, 0,0005, 0,0002, 0,0001 и 0,00005 мг/мл готовят из стандартного раствора методом последовательного разбавления по объему. Градуировочные растворы хранятся в холодильнике в течение 1 месяца.
7
2.5.3. Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 мкл каждого из градуировочных растворов (3 параллельных определения для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты или площади пика от концентрации тетраконазола в градуировочном растворе (мкг/мл).
2.6. Проведение определения
2.6.1. Определение тетраконазола в воде
В делительную воронку емкостью 250 мл помещают пробу воды объемом 100 мл, добавляют 1—2 г хлористого натрия и экстрагируют тетраконазол 50 мл дихлорметана дважды, встряхивая воронку каждый раз не менее 3-х мин. После полного разделения слоев отделяют нижний органический слой, пропуская его через безводный серно-кислый натрий (не менее 30 г), предварительно промытый дихлорметаном. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °С.
Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан-ацетон (9 : 1) и проводят очистку экстракта на колонке с флорисилом.
Колонку готовят следующим образом: в нижнюю часть колонки помещают тампон из обезжиренной ваты, к 8 г флорисила добавляют 15 мл смеси гексан-ацетон (9 : 1) и заполняют колонку этой суспензией. После осаждения флорисила (уровень растворителя над столбиком флорисила 15—20 мм) в колонку добавляют безводный сульфат натрия слоем 10 мм. Перед внесением пробы колонку промывают 20 мл той же смеси гексан-ацетон и понижают уровень растворителя до верхнего слоя сорбента. Экстракт количественно переносят в колонку, обмывая дважды колбу 1—2 мл смеси гексан-ацетон. Элюируют тетраконазол той же смесью гексан-ацетон (9 : 1), отбрасывая первую фракцию 20 мл и собирая последующие 50 мл.
Растворитель выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют I мл этилацетата и вводят в хроматограф 1 или 2 мкл полученного раствора.
2.6.2. Определение тетраконазола в почве
Образец сухой почвы массой 50 г помещают в коническую колбу с притертой пробкой, добавляют 15 мл дистиллированной воды, встряхивают и оставляют на сутки. На следующий день в колбу добавляют 100 мл смеси метиловый спирт-вода (9:1 по объему) и экстрагируют
МУК 4.1.1229—03
тетраконазол на ультразвуковой бане в течение 30 мин. Затем фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу емкостью 500 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза по 5 мин, используя по 50 мл той же смеси. (При анализе почв с содержанием гумуса более 2,5 % количество экстракций увеличивают.) Колбу ополаскивают 20 мл смеси и добавляют к объединенному водно-спиртовому экстракту. Метиловый спирт отгоняют на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °С. К остатку добавляют дистиллированную воду до объема 100 мл, вносят 1—2 г хлористого натрия и переносят водный экстракт в делительную воронку.
Далее подготовку пробы к газохроматографическому анализу проводят так же, как для водных образцов (см. п. 2.6.1). При элюировании тетраконазола из колонки с флорисилом первую фракцию 30 мл отбрасывают, последующие 70 мл собирают. После выпаривания растворителя досуха сухой остаток растворяют в 1мл этилацетата и 1—2 мкл раствора вводят в хроматограф.
2.6.3. Определение тетраконазола в зеленой массе, соломе и зерне зерновых культур
Навеску зеленых растений или соломы 10 г измельчают (или мелко нарезают), зерна - 10 г измельчают с помощью лабораторной мельницы, помещают в коническую колбу и заливают 50—100 мл раствора ацетон-вода (50 : 50) таким образом, чтобы проба была полностью покрыта раствором, и экстрагируют тетраконазол на ультразвуковой установке в течение 15 мин (или оставляют на ночь). Водно-ацетоновый экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают дважды водным ацетоном порциями по 25 мл. Объединённый фильтрат помещают в делительную воронку и производят очистку переэкстрак-цией в н-гексан, добавляя хлористый натрий из расчета 1 г на 50 мл раствора. Тетраконазол экстрагируют н-гексаном трижды порциями по 25—30 мл. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через бумажный фильтр и сушат над безводным сульфатом натрия. Полученный экстракт упаривают на ротационном испарителе или под вакуумом на водяной бане при температуре 40 °С досуха. Остаток растворяют в 1— 10 мл гексана.
При определении остатков в урожае, когда измерение концентрации проводят на высоких шкалах чувствительности хроматографа, может потребоваться дополнительная очистка экстракта. В этом случае проводят очистку на колонке с флорисилом так же, как в п. 2.6.1.
Вводят в хроматограф 1 мкл очищенного экстракта.
9
2.6.4. Условия хроматографирования |
Параметры |
ДПР, колонка 5 % SE-30 |
ДПР, колонка 5 % ХЕ-60 |
Шкала усилителя |
20—40 х Ю10 |
20-40 х 10'° |
Температура колонки, °С |
230 |
220 |
Температура испарителя, *С |
250 |
240 |
Температура детектора, вС |
300 |
300 |
Дозируемый объем, мкл |
1—2 |
1—2 |
Скорость газа-носителя, смэ/мин |
40 |
40 |
Время удерживания |
1 мин 55 с |
2 мин 10 с |
Линейный диапазон детектирования, нг |
0,025—1 |
0,025—1 |
|
2.6. У Обработка результатов анализа
Количественное определение проводили методом абсолютной градуировки, содержание тетраконазола в образце воды, почвы или растений (X, мг/кг) вычисляли по формуле:
Хшн^с1Угас
Н\ ' Р к
Н\ - высота (площадь) пика тетраконазола в стандартном растворе, мм;
Н2 - высота (площадь) пика тетраконазола в анализируемой пробе, мм;
V - объём пробы, податповленной для хроматографического анализа, мл;
Р - навеска анализируемого образца, г;
С - концентрация стандартного раствора тетраконазола, мкг/мл;
К - коэффициент извлечения тетраконазола, определяемый в предварительном опыте по внесению тетраконазола в контрольный образец.
Содержание остаточных количеств тетраконазола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.
3. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции «Основные правила безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкций по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.
10
МУК 4.1.1229—03
4. Контроль погрешности измерении
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335—95 «ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».
5. Разработчики
Блинова Т. Ф., Цибульская И. А., Долженко В. И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений.
11
1
Вводная часть
Торговое наименование: Эминент.
Фирма производитель: Томен Корпорейшн (Япония).
Действующее вещество: тетраконазол.
(К8)-2-(2,4-дихлорфеннп)-3-( 1Н-1,2,4-триазол-1-ил) пропил-1,1,2,2-|етрафторэтиловый эфир.
Структурная формула:
Молекулярная масса: 372,1.
Эмпирическая формула: CijHuCJ^NjO.
Химически чистый тетраконазол представляет собой бесцветную вязкую жидкость, разлагается при 240 °С; давление паров 0,18 мРв, показатель преломления 1,432 (20 °С).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода К^, IgP =
= 3/56 (20 °С).
Растворимость: в воде 156 мг/л (pH 7; 20 °С); хорошо растворим в 1,2-дихлорэтане, ацетоне, метаноле.
Стабилен в разбавленных водных растворах с pH 5—9.
4