Федеральная служба но надзору о сфере защиты нраи потребителей и благополучия челонска

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указаний

Выпуск 2 Часть 3 МУК 4.1.1221—4.1.1223—03

ББК 51.23+51.21 060

060 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2005.—30 с.—Вып. 2.—Ч. 3.

1.    Сборник подготовлен: Федеральным научным центром пн мены им. Ф. Ф. Орисматта (чл.-корр. РАМН, ироф. В. Н. Ракитский. проф. Т. В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К. А. Тимирязева (проф. В. А. Калинин, к. хим. и. Довшлевич А. В.): при участии Департамент гос-санэпиднадэора Минздрава России (А. II. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.

2.    Методические указания рекомендованы к >тверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации. Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г. Г. Онищенко 16 марта 2003 г.

4.    Введены с I июля 2003 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.23+51.21

© Роспотребнадзор, 2005 © Федеральным центр гигиены и

эн идем полон н Роспотребнадзора, 2005

МУК 4.1.1221—03

ки. откладывая по оси ординат высоты (площади) пиков, на оси абсцисс - количество клетодима или его метаболитов.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации. Находят среднее значение высоты (площади) пика для каждой концентрации. Строят градуировочные графики зависимости высоты в мм (площади в мв х с) хроматографического пика от концентрации клетодима или его метаболитов в растворе (мкг/мл).

Калибровочный коэффициент, представляющий собой тангенс угла наклона полученной прямой к оси абсцисс, вычисляют по методу наименьших квадратов.

2.5.5. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6. Описание измерения

Бумажный фильтр извлекают из фильтродержателя, помещают в чашку Петри и экстрагируют 80 % этанолом один раз порцией 10 мл и 3 раза порциями по 5 мл, выдерживая каждый раз 3—4 мин. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр «синяя лента» в круглодонную колбу емкостью 100 мл. в ту же колбу сливают этиловый спирт из поглотителя. Поглотитель обмывают трижды этиловым спиртом порциями по 5 мл, смывы сливают в круглодонную колбу.

Объединенный экстракт упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани нс более 50 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила или подвижной фазы и хроматографируют по п. 2.7.

2.7. Ус. швин хроматографирования

Жидкостный хроматограф высокого давления с ультрафиолетовым детектором, длина волны - 254 нм. оборудован двумя последовательно соединенными колонками:

I    - предколонка. стальная, заполнена сорбентом с привитой фазой Ci8 с диаметром частиц 10 мкм (Partisil-10 ODS-2). длина колонки - 30 мм. внутренний диаметр - 4.6 мм.

II    - колонка основная, заполнена сорбентом с привитой фазой С₈ с диаметром частиц 6 мкм (Zoibax С₈). длина колонки - 250 мм. вну тренний диаметр - 4.6 мм.

Число теоретических тарелок - нс менее 10 000.

11

МУК 4.1.1221—03

Линейный динамический диашпон детектирования - 0.004—4 мкг.

В качестве подвижной фаты при хроматографировании клетодима и его метаболитов используют элюент. состоящий из 68.6 % ацетонитрила. 1.4 % ледяной уксусной кислоты и 30 % дистиллированной воды, который пропускают через колонки со скоростью 0.8 см³/мин при температуре 20 °С.

Температура термостата колонки 20—30 °С.

Время удерживания клетодима 18.1 ± 0.5 мин.

Время удерживания клетодим су льфоксида 12.0 ± 0.2 мин.

Время удерживания клетодим сульфона 10.6 ± 0.2 мин.

В качестве альтернативной колонки можно использовать колонку, заполненную сорбентом с привитой фазой С18 с диаметром частиц 10 мкм (Hipersil-10 ODS). длина колонки - 250 мм. внутренний диаметр - 4.6 мм.

Время удерживания клетодима - 21.0 ± 0.5 мин.

Время удерживания клетодим сульфоксида - 11.3 ± 0.2 мин.

Время удерживания клетодим сульфона - 6.8 ± 0.2 мин.

Использование других марок неподвижной фазы типа С₈. а также фаз типа С|₈, даст качественно аналогичные результаты хроматографирования.

Вводимый в хроматограф объем пробы - 0.02—0.1 мл (20—ИХ) мкл).

Скорость движения ленты самописца (интегратора) 0.1— 0.2 см/мин.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту (площадь) пиков.

Растворы для хроматографирования нс хранятся.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартные растворы клс-тодима и его метаболитов с концентрациями 10 мкг/мл. разбавляют.

2.Н. Обработка результатов анализа

Содержание клетодима в пробах (Х_К1) вычисляют как сумму концентраций клетодима и его метаболитов в пересчете на действующее вещество:

Х„ = С_к, + C_KVO X 0.96 + С_ксфХ 1.01, где

С_К1 - содержание клетодима в пробе, мг/м³;

C_KVO - содержание клетодим сульфоксида в пробе, мг/м³;

Сксф -содержание клетодим сульфона в пробе, мг/м³;

Содержание клетодима и его метаболитов для каждого в отдельности рассчитывают по формуле:

12

МУК 4.1.1221—1223—03

Содержание

Измерение концентраций клстодима и его основных метаболитов клетодим сульфона и клего;шм сульфоксида в воздухе рабочей юны методом высокоэффективной жи;и<ос пюй хроматографии:

МУК 4.1.1221—03......................................................................................................4

Измерение концентраций кломазона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы, корнеплодах моркови и клубнях карго ([кия методом газожидкостной хроматографии (дополнение к № 5(Х)6-89):

МУК 4.1.1222—03....................................................................................................14

Определение остаточных количеств метрибузина в клубнях картофеля методом газожи;осоепюй хрома гофафии:

МУК 4.1.1223—03....................................................................................................23 ¹

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации.

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онищенко

16 марта 2003 г.

Дата введения - 1 июля 2003 г.

4 1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций клетоднма и его основных метаболитов клетодим сульфона и клетодим сульфоксида в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания

_МУК 4.1.1221—03_

1. Вводная часть

Фирма производитель: ТОМЕН АГРО ИНК., (Япония)

Торговое название: СЕЛЕКТ, КЭ, ТМ-5403, КЭ, ЦЕНТУРИОН КОМБИ, КЭ.

Действующее вещество: Клетодим (ISO).

(Е,Е)-(+)-2- {1 -[[3-хлоро-2-(пропенил)оксн]нмино]пропил} -5-[2-(этилтио)пропил]-3-гидрокси-2-циклогексен-1 (1UPAC)

Структурная формула:

ОСН2СН=СНС1

Эмпирическая формула: C₎₇H₂6CINO_?S.

Молекулярная масса: 359,92.

Химически чистый клетодим представляет собой вязкую жидкость светло-желтого цвета со слабым ароматическим запахом. ²

МУК 4 1.1221—03

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль + пары

Удельная масса технического клетодима - 1140 кг/м³.

Давление паров при 25 °С менее 0,013 мПа.

Разлагается при температуре ниже точки кипения

Растворимость в воде 54 мг/л при pH = 7.

Растворимость в органических растворителях: более 900 г/л в большинстве растворителей.

Коэффициент распределения в системе октанол-вода - 1,5 • 10⁷

Температура вспышки 62 °С.

Клетоднм нестабилен. Разлагается под действием УФ света, при повышенных температурах и экстремальных значениях pH. В аэробных условиях окисляется и разлагается с периодом полураспада от 1 до 3 дней. Относительно устойчив в водных растворах с pH 7—10 при отсутствии солнечного света. Период полураспада в результате гидролиза в водных растворах с pH 7 и pH 9 составляет 300 и 310 дней соответственно.

Основные продукты метаболизма - клетоднм сульфон и клетоднм сульфоксид.

Основные метаболиты

Клетоднм сульфоксид.

Название по ИСО: клетоднм сульфоксид.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (Е,Е)-(+)-2-{ 1-[[3-хлоро-2-(пропенил) окси] имнно] пропил }-5-[2-(этилсульфокснд) пропил]-З-гидрокси-2-циклогексен-1

Структурная формула:

CH₃CH₂-S-CHCH₂

Эмпирическая формула: C17H26CINO4S.

Молекулярная масса: 375,9.

Химически чистый клетоднм сульфоксид представляет собой белое кристаллическое вещество.

Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в большинстве органических растворителей. ³

Является основным метаболитом при разложении клетодима в почве в аэробных условиях, в воде (при условиях способствующих фотолизу) и растениях. Клетодим сульфоксид нестабилен. Период полураспада в почве от 2,5 до 20 дней.

Клетодим сульфон.

Название по ИСО: клетодим сульфон

Название действующего вещества по ИЮПАК: (Е,Е)-(±)-2-{ 1-[[3-хлоро-2-(пропенил) окси] имино] пропил}-5-[2-(этилсульфон)пропил]-3-гидрокси-2-циклогексен-1

Структурная формула:

о

Химически чистый клетодим сульфон представляет собой белое кристаллическое вещество.

Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в большинстве органических растворителей.

Является одним из основных метаболитов при разложении клетодима в почве в аэробных условиях. Клетодим сульфон нестабилен. Период полураспада в почве от 1 до 2 дней

Гигиенические нормативы для клетодима:

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,7 мг/м\

Область применения препарата: послевсходовый гербицид для применения на широколистных культурах (свекле, картофеле, моркови, луке, льне, масличных культурах, бобовых и других) для борьбы с одно-и многолетними травами ⁴

МУК 4.1.1221—03

2. Методика измерения концентрации клетоднма и его основных метаболитов клетоднм сульфона и клетоднм сульфоксида в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2. /. /. Принцип методики

Методика основана на определении клетоднма и его основных метаболитов - клетоднм сульфоксида и клетоднм сульфона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов. применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор- и фос-форорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы. синтетические пнретроиды).

Избирательность метода обеспечивается селективным детектором и использованием неподвижных фаз различной полярности.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в таблице.

Таблица

Донср1гге.1Ы1ый интервал и полнота определения клетоднма (6 параллельных определений для каждой концентрации)

Внесено клетоднма, мг/м3 Определено клетоднма, мг/м3 Доверительный интервал, мг/м3 Средняя полнота определения, % 0,003 0,0022 0,00011 73 0,005 0,0043 0,0004 86 0,02 0,019 0,0014 95 0,1 0,093 0,0079 93

Минимально детектируемое количество клетоднма и его метаболитов в хроматографируемом объеме - 4 нг.

Предел обнаружения клетоднма в воздухе рабочей зоны -0.003 мг/м³ (при отборе 100 литров воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций -0.003—0.10 мг/м\

Среднее значение определения - 87.1 %.

Стандартное отклонение (.S) - 9.2 %.

Относительное стандартное отклонение (DS) - 10.5 %. Доверительный интервал среднего - ± 10.6 %.

Суммарная погрешность измерений -± 12.2 %

Указанное значение полноты определения достигается при выполнении анализов за 4—8 ч в течение одного рабочего дня. При увеличении длительности анализа более 8 ч полнота определения снижается из-за нестабильности определяемых соединений.

2.2. Реактивы, растворы и материалы Клстодим. аналитический (98 %.

Томен Агро Инк.. Япония)

Клстодим сульфон. аналитический (98 %.

Томен Агро Инк.. Япония)

Клстодим сульфоксид, аналитический (98 %.

Томен Агро Инк.. Япония)

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

ОП-3. осч

Бумага фильтровальная Вода дистиллированная Гелий газообразный

Основные стандартные растворы клстодима. клстодим сульфоксида и клетодимсульфона с концентрацией 1 мг/мл и рабочие стандартные растворы с концентрацией 1. 2. 5. К) мкг/мл в ацетонитриле

Раствор этанол-вода в соотношении 8 : 2 по объему

Уксусная кислота (ледяная), хч Фильтры бумажные «синяя лента»

Чашки Петри Этанол, осч

2.3. Приборы, аппаратура, посуда Хроматограф жидкостной высокого давления (Цвет серий 300. импортные хроматографы высокого давления фирм Hewlett Packard. Varian и др.). снабженный УФ-дстсктором и двумя последовательно соединенными колонками: ⁵

МУК 4.1.1221—03

I    - предколонка стальная, заполнена сорбентом с привитой фазой С|₈ с диаметром частиц 10 мкм (Partisil-10 ODS-2), длина колонки -30 мм. внутренний диаметр - 4.6 мм.

II    - колонка основная, заполнена сорбентом с привитой фазой С₈ с диаметром частиц 6 мкм (Zorbax Cg). длина колонки - 250 мм. внутренний диаметр - 4.6 мм.

Аспиратор. ЭА-1А или аналогичный Барометр

Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные Воронки химические, конусные Испаритель вакуумный ротационный ИР-1М или

аналогичный

Колбы круглодонные со шлифом вместимостью 100 мл

Колбы мерные, вместимостью 25. 50.

ИЮ и 1000 мл Мнкропипстки

Микрошпрнц МШ-10. МШ-10М

Насос стеклянный вакуумный водоструйный

Палочки стеклянные

Пипетки вместимостью 1. 2. 5. 10 мл

Поглотитель

Стаканы химические

Фнльтродсржатсли

Цилиндры мерные вместимостью 10. 50. 100. 500 и 1000 мл

2.-4. Отбор и подготовка проб Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».

Воздух, содержащий клетодим в виде паров и аэрозоля, аспириру-ют в течение 20 мин со скоростью 5 л/мин через последовательно соединенные бумажный фильтр «синяя лента», укрепленный в фильтро-держателе. и поглотительный прибор, заполненный 5 мл этилового спирта, в качестве поглотителя.

Поглотительные растворы клетодима в этаноле можно хранить в холодильнике в течение месяца, бумажные фильтры, помещенные в стеклянные склянки. 3—1 дня при температуре не более 4 °С.

9

МУК 4.1.1221—03

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и кондиционирование колонок для высокоэфе юн иеной жидкостной хроматографии

Колонку Zorbax С₈ кондиционируют в потоке подвижной фазы до стабилизации нулевой линии в течение 1—2 ч.

2.5.2. Подготовка растворителей и приготовление растворов

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.

Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °С досуха, обмывают стенки колбы 2 мл подвижной фазы (ВЭЖХ) и хроматографируют полученный раствор. При обнаружении примесей, которые мог>т мешать определению. растворители очищают общепринятыми методами.

Подвижная фаза. В мерную колбу емкостью 1000 мл сначала наливают 14 мл ледяной уксусной кислоты, затем 300 мл дистиллированной воды и доводят ацетонитрилом до метки.

Раствор этанол-вода в соотношении 8 : 2. 800 мл этилового спирта смешивают с 200 мл дистиллированной воды.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Взвешивают по 50 мг аналитических стандартов клетодима. клсто-днм сульфоксида и клетодим сульфона. переносят в мерные колбы объемом 50 мл и доводят до метки ацетонитрилом. Концентрация растворов 1 мг/мл (основные стандартные растворы №№ 1—3).

Методом последовательного разбавления из растворов №№ 1—3 готовят рабочие стандартные растворы клетодима и его метаболитов в ацетонитриле с концентрацией 1; 2: 5: 10 мкг/мл для построения калибровочных графиков.

Основные и рабочие стандартные растворы клетодима и его метаболитов устойчивы при хранении в диапазоне температур от 0 до +4 °С и отсутствии солнечного света в течение недели, при хранении при температуре от -3 до -5 °С - течение двух месяцев.

2.5.4. Построение калибровочных графиков

Рабочие стандартные растворы клетодима и его метаболитов с концентрацией 1; 2; 5; 10 мкг/мл хроматографируют по п. 2.7. а затем на основании данных хроматографирования строят калибровочные графи-

10

1

2

3

4

5