Купить МУК 4.1.1218-03 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
1. Вводная часть
2. Методика определения остаточных количеств изоксафлютола и его метаболита RPA-202248 в воде; изоксафлютола (в виде RPA-202248) в почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изоксафлютола в воде методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование
2.3. Подготовка к определению
2.4. Отбор проб
2.5. Описание определения
2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов
3. Требования техники безопасности
4. Контроль погрешности измерений
5. Разработчики
Дата введения | 01.07.2003 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.01.2019 |
Актуализация | 01.01.2021 |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _ Российской Федерации_
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды
Сборник методических указаний
Выпуск 2 Часть 2 МУК 4.1.1217—4.1.1220—03
Издание официальное
Москва • 2005
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Сборник методических указаний
Выпуск 2 Часть 2 МУК 4.1.1217—4.1.1220—03
МУК 4.1.1218—03
Натрия нитрит
Патроны концентрирующие «Диапак»-Диол
05451931—94 ГОСТ 6995-77 ГОСТ 5962-67 ТУ 6-09-3877—80 ТУ 6-09-1678—86
(2-ОН, 0,6 г) АО «БиоХимМак», МГУ, Москва ТУ 4215-002-
Спирт метиловый Спирт этиловый, ректификат Трифторуксусная кислота, ч Фильтры бумажные, «красная лента»
ГОСТ 19433-88 ГОСТ 20015-88 ГОСТ 223000-76 ОСТ 84-2006—88
Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями 20 мкм, фирма Уотерс Хлористый метилен Хлороформ, ч
Этиловый эфир уксусной кислоты Эфир диэтиловый, медицинский
2.2.2. Приборы и оборудование
Хроматограф жидкостный «Уотерс 510» с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,0025 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа
Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая неподвижную фазу Zorbax SB С18, зернением 5 мкм или другая с аналогичными характеристиками
Хроматограф газовый с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов «Цвет-550 М» с пределом детектирования по Линдану не выше 4 в 10“14 или другой аналогичного типа Алонж прямой с отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами Диапак -Диол (2 ОН))
Баня водяная ТУ 46-22-603—75
Баня песчаная Ванна ультразвуковая
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 34104-80 Е
или аналогичные
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г ГОСТ 19491-74
20
МУК 4.1.1218—03
Воронки делительные на 250 и 500 мл Воронки конические, стеклянные диаметром 50—60 мм
Встряхиватель механический или аналогичный
Колбы конические, плоскодонные на 250 и 500 мл Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл Концентраторы грушевидные и круглодонные, объемом 50,100 и 250 мл, КТУ-100-14/19 Испаритель ротационный вакуумный ИР-1М или аналогичный
Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50—100 мкл, фирма «Гамильтон», или аналогичный
Микрошприц для газового хроматографа на
10 мкл, МШ-10
или аналогичный
Насос водоструйный
Палочки стеклянные
Пипетки мерные на 0,2; 1,0; 2,0; 5,0 мл
КШ 14/23 ГОСТ 1770—74
Стаканы стеклянные на 100—500 мл ГОСТ 25366—80Е
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления ОД °С, пределы измерения 40—110 °С ГОСТ 16590—71
Цилиндры мерные, вместимостью 10; 50; 100 мл ГОСТ 1770—74Е
Пробирки мерные с притёртыми пробками,
2,3, Подготовка к определению
2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Колонку с неподвижной фазой Zorbax SB-C18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при t = 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин в течение 3—4 ч.
2.3.2. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии Готовую насадку (5 % OV-210 на Газохроме-Q) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 230 °С в течение 8—10 ч.
21
МУК 4.1.1218—03
2.3.3. Приготовление стандартных растворов
Взвешивают 100 мг RPA 202248 в мерной колбе объемом 100 мл. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный раствор № 1, концентрация RPA 202248 - 1,0 мг/мл). Затем 1 мл стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой в мерную колбу объемом 100 мл и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор №2, концентрация RPA 202248 - 10 мкг/мл). Стандартные растворы №1 и 2 можно хранить в холодильнике в течение 3-х месяцев. Методом последовательного разведения ацетонитрилом из раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 мкг/мл вещества и используют эти растворы для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец при отработке методики.
Аналогично готовят стандартные растворы изоксафлютола № 1 (1 мг/мл) и 2 (10 мкг/мл).
Для отработки методики определения остаточных количеств изоксафлютола и RPA 202248 в воде методом ВЭЖХ готовят смешанный стандарт, содержащий оба вещества в равной концентрации. В мерную колбу объемом 100 мл помещают по 1 мл стандартных растворов изоксафлютола и RPA 202248 с концентрацией 1 мг/мл и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор с концентрацией изоксафлютола и RPA 202248 - 10 мкг/мл). Для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец при отработке методики методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы с концентрацией изоксафлютола и RPA 202248 2,0; 0,8; 0,4; 0,2 мкг/мл.
2,3.4. Приготовление растворов для жидкостной хроматографии
2.3.4.1. Очистка бидистиллированной воды.
Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцово-кислым калием, добавленным из расчета 1 r/л, и затем перегоняют.
2.3.4.2. Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил перегоняют на стеклянной установке для дистилляции, собирая фракцию, кипящую при температуре 81,6 °С.
2.3.4.3. Приготовление 0,2 %-ного водного раствора трифторуксус-ной кислоты.
В мерную колбу объемом 1 000 мл наливают 300 мл очищенной воды, прибавляют туда же 2 мл концентрированной трифторуксусной кислоты и тщательно перемешивают, после чего доводят раствор до метки очищенной водой.
2.3.4.4. Приготовление подвижной фазы для ВЖХА.
МУК 4.1.1218—03
В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 500 мл ацетонитрила и 500 мл 0,2 %-ного водного раствора трифторуксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.
2.3.4.5. Приготовление раствора для разведения проб.
В плоскодонную колбу объемом 100 мл помещают 80 мл ацетонитрила и 20 мл 0,2 %-ного водного раствора трифторуксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают. Полученный раствор используют для растворения проб перед вводом их в хроматограф.
2.3.5. Построение калибровочного графика (ВЖХ)
Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из полученных четырех растворов RPA 202248 (с концентрацией 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2 мкг/мл), измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации RPA 202248 (мкг/мл).
Для построения калибровочного графика для смешанного стандарта вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из полученных четырех растворов изоксафлютола и RPA 202248 (с концентрацией 2,0; 0,8; 0,4; 0,2 мкг/мл), измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации каждого компонента смешанного стандарта — изоксафлютола и RPA 202248.
2.3.6. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-Диол (2 ОН) (0,6 г) для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума.
Патрон Диапак-Диол устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют, как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 мл метанола и 5 мл смеси гексана с ацетоном в соотношении 50 : 50. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
2.3.7. Подготовка картриджа Sep-Pak Diol (2 ОН) (5 г) для очистки экстракта
Все процедуры происходят без использования вакуума при нормальном атмосферном давлении.
23
МУК 4.1.1218—03
Кондиционирование: картридж промывают последовательно 20 мл метанола и 20 мл смеси гексана с ацетоном в соотношении 50 : 50. Элю-ат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
2.3.8. Проверка хроматографического поведения RPA 202248 на картриджах и концентрирующих патронах
В кругло донную колбу объемом 50 мл вносят по 1 мл стандартного раствора RPA 202248 с концентрацией 1 мкг/мл и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
Добавляют 1 мл ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 1 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор наносят на картридж. Концентратор тщательно обмывают 2 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50 : 50 и смесь также вносят на картридж. Картридж промывают последовательно 10 мл гексана и 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50 : 50 со скоростью 2 мл/мин. Элюат отбрасывают. Затем RPA 202248 элюируют с картриджа пятью порциями по 2 мл метанола. Каждую фракцию упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Каждую фракцию анализируют отдельно, для чего сухой остаток после упаривания растворяют в смеси: ацетонитрил + 0,2 %-ный водный раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 80 :20 и аликвоту объемом 20 мкл вводят в хроматограф.
Рассчитывают содержание RPA 202248 в каждой фракции и определяют полноту элюирования вещества с картриджа или патрона и необходимый для очистки объем элюата.
Примечание: Хроматографическое поведение RPA 202248 на картриджах и патронах обязательно проверяют при отработке методики и каждый раз при использовании новых партий картриджей и патронов.
2.3.9. Приготовление IMраствора гидроксида натрия в метаноле
Взвешивают 4 г гидроксида натрия в мерной колбе на 100 мл, растворяют навеску в метиловом спирте и доводят объём до метки метанолом (необходимо добиться полного растворения щёлочи).
2.3.10. Получение П-нитрозо-Ы-метилмочевины
При отсутствии коммерческого препарата N-нитрозометилмочевины осуществляют его синтез. Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу! В круглодонную колбу со шлифом вместимостью 1 л, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 мл воды и кипятят 3 ч с обратным холодильником на водяной бане. По истечении срока раствор в
24
МУК 4.1.1218—03
колбе охлаждают до комнатной температуры и добавляют в него 110 г нитрита натрия. Затем раствор охлаждают в бане со льдом, содержащим поваренную соль, до 0 °С. Охлажденный раствор медленно (Осторожно! Вспенивание.) при перемешивании переливают в стакан емкостью 2 л, содержащий смесь 600 г льда и 60 мл концентрированной серной кислоты, охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью, следя за тем, чтобы температура внутри стакана не поднималась выше 2 °С. Всплывшие кристаллы нитрозометилмочевины немедленно отфильтровывают через фильтр в воронке Бюхнера под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.
Внимание! Нитрозометилмочевину хранят во влажном состоянии в темной склянке с пластмассовой пробкой в морозильнике, так как под действием света и тепла она может взорваться.
2.3.11. Приготовление раствора диазометана
Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!
В коническую колбу на 100 мл вносят 20 мл 40 %-ного раствора гидроксида калия и 50 мл диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2—4 °С. В охлажденную смесь порциями при перемешивании на магнитной мешалке или путем встряхивания вносят 5 г нитрозометилмочевины. Реакционную смесь выдерживают на холоде 10 мин. Затем эфирный слой сливают в чистую коническую колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10—15 гранул гидроксида калия и колбу оставляют в бане со льдом на 2,5—3,0 ч для осушения раствора.
Раствор диазометана в эфире годен к употреблению при хранении в морозильнике в течение 1—2 суток. При хранении сосуды с диазометаном нельзя плотно закрывать!
2.3.12. Метилирование аналитического стандарта и анализируемого образца
К остатку, полученному после превращения стандартного раствора изоксафлютола в RPA-203328, к сухому остатку при анализе образцов, в концентраторы добавляют 2 мл эфирного раствора диазометана и выдерживают смесь при комнатной температуре 30 мин. Эфир отдувают прохладным воздухом досуха.
25
МУК 4.1.1218—03
2.5.73. Модификация аналитического стандарта изоксафлютола
для построения калибровочного графика и калибровки прибора перед анализом серии образцов
Отбирают 1 мл стандартного раствора изоксафлютола № 2 (10 мкг/мл) в концентратор и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 10 мл этанола, добавляют 2 %-ный раствор гидроксида натрия до pH 9,0—10,0 и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. При этом изоксафлютол гидролизуется до RPA 202248. По истечении срока в концентратор добавляют 8— 10 мл дистиллированной воды и упаривают спирт на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С до водного остатка.
Водную фракцию переносят в делительную воронку, добавляют 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия и 70 мл дистиллированной воды, подкисляют до pH < 1 концентрированной соляной кислотой (да 2 мл) и трижды экстрагируют RPA 202248 хлористым метиленом порциями по 50 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
Сухой остаток из концентратора переносят в мерную пробирку с притёртой пробкой, тщательно обмывая концентратор тремя порциями диэтилового эфира по 5 мл. Эфир упаривают в токе тёплого воздуха. В пробирку добавляют 5 мл 1М раствора гидроксида натрия в метаноле и растворяют сухой остаток, выдерживая пробирку в ультразвуковой ванне в течение 2 мин, после чего пробирку плотно закрывают и нагревают в песчаной бане в течение 1 ч при температуре 110 °С (недопустимо присутствие воды, т. к. любое её количество ингибирует метанолиз). По истечении срока пробирку охлаждают до комнатной температуры. В остывшую пробирку добавляют 5 мл дистиллированной воды и переносят содержимое в делительную воронку. Пробирку ополаскивают водой ещё 3 раза по 5 мл. Водную фазу подкисляют до pH < 1 концентрированной соляной кислотой (да 2 мл), добавляют 6 г хлористого натрия и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 15 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
Сухой остаток метилируют следуя пункту 2.3.12.
После метилирования сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл гексана, раствор переносят в мерную колбу объемом 10 мл, обмывая концентратор гексаном, и доводят объем колбы до метки гексаном. Концентрация полученного раствора соответствует 1 мкг изоксафлютола в 1 мл. Методом последовательного разведения гексаном готовят растворы с концентрацией изоксафлютола 1,0; 0,5; 0,25; 0,1 мкг/мл. Для
26
МУК 4.1.1218—03
построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 2 мкл каждого из полученных четырех растворов, измеряют высоту пиков, рассчитывают среднее значение высоты пика для каждой концентрации и строят график зависимости высоты пика от концентрации изоксафлютола (мкг/мл).
Указанные в п. 2.3.13 операции проводят перед постановкой методики в лаборатории и при анализе очередной серии образцов воды.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна кукурузы в початках подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Замороженные образцы зеленой массы хранят в морозильной камере при температуре не выше 18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Початки обрушивают, зерно измельчают на лабораторной мельнице.
2.5. Описание определения
2.5.1. Вода
2.5.1.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография.
Пробу воды объемом 200 мл помещают в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 1,0 мл концентрированной соляной кислоты и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 50 мл, интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. После разделения фаз в воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия, осушитель обмывают еще 10 мл этилацетата и объединяют с экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,0 мл смеси: ацетонитрил + 0,2 %-ный раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 80 : 20 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
2.5.1.2. Газожидкостная хроматография.
Образец воды объемом 100 мл помещают в коническую колбу на 250 мл, добавляют 2 %-ный водный раствор гидроксида натрия до pH 9—10 (« 2,5 мл) и помещают на механический встряхиватель на 1 ч.
27
МУК 4.1.1218—03
После встряхивания воду переносят в делительную воронку, добавляют 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия, подкисляют до pH < 1 концентрированной соляной кислотой (« 2 мл) и трижды экстрагируют RPA 202248 хлористым метиленом порциями по 50 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
Сухой остаток из концентратора переносят в мерную пробирку с притёртой пробкой, тщательно обмывая концентратор тремя порциями диэтилового эфира по 5 мл. Эфир упаривают в токе тёплого воздуха. В пробирку добавляют 5 мл 1М раствора гидроксида натрия в метаноле и растворяют сухой остаток, выдерживая пробирку в ультразвуковой ванне в течение 2 мин, после чего пробирку плотно закрывают и нагревают в песчаной бане в течение 1 ч при температуре 110 °С (недопустимо присутствие воды, т. к. любое её количество ингибирует метанолиз). По истечении срока пробирку охлаждают до комнатной температуры. В остывшую пробирку добавляют 5 мл дистиллированной воды и переносят содержимое в делительную воронку. Пробирку ополаскивают водой еще 3 раза по 5 мл. Водную фазу подкисляют до pH < 1 концентрированной соляной кислотой (« 2 мл), добавляют 6 г хлористого натрия и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 15 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
Сухой остаток метилируют следуя пункту 2.3.12.
После метилирования сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл гексана и 2 мкл раствора вводят в хроматограф.
2.5.2. Почва
2.5.2.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец почвы массой 50 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, добавляют 20 мл дистиллированной воды, встряхивают колбу до полного смешивания и дают выстояться в течение 10 мин. Затем в колбу прибавляют 100 мл ацетонитрила и экстрагируют изоксафлютол и RPA 202248 на встряхивателе в течение 30 мин. Полученную смесь центрифугируют и супернатант фильтруют в делительную воронку объемом 250 мл через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя 100 и 75 мл ацетонитрила и экстрагируя на встряхивателе по 30 мин с обязательным центрифугированием. Экстракты фильтруют и объединяют в делительной воронке объемом 250 мл. К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 30 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гекса-
28
МУК 4.1.1218—03
новый слой отбрасывают, нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще раз 30 мл гексана. Гексан отбрасывают. Ацетонитрил собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия, осушитель промывают 10 мл ацетонитрила, объединяют смыв с экстрактом и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 3 мл ацетона, добавляют 30 мл дистиллированной воды, 1,5—2,0 мл 2 %-ного раствора едкого натра (до pH 9), 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку. Полученную смесь выдерживают в течение 20 мин. при комнатной температуре. Экстракт в делительной воронке трижды промывают гексаном порциями по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку. RPA 202248 трижды экстрагируют этилацета-том порциями по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний этилацетатный экстракт собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
2.5.2.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак-Диол.
Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 1 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор наносят на картридж. Концентратор тщательно обмывают 2 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50 : 50 и смесь также вносят на картридж. Картридж промывают последовательно 10 мл гексана и 10 мл смеси гексан—ацетон в соотношении 50: 50 со скоростью 2 мл/мин. Элюат отбрасывают. RPA 202248 элюируют с картриджа 10 мл метанола, элюат упаривают досуха при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в смеси: ацетонитрил + 0,2 %-ный водный раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 80 : 20 и аликвоту объемом 20 мкл вводят в хроматограф.
2.5,3. Зерно кукурузы
2.5.3.1 Экстракция и предварительная очистка. Образец размолотого зерна массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 50 мл ацетонитрила и экстрагируют изоксафлютол и его метабо-
29
ББК 51.23+51.21 060
060 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005.—71 с.—Вып. 2,—Ч. 2.
ISBN 5—7508—0578—6
1. Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф. Ф. Эрис-мана (чл.-корр. РАМН, проф. В. Н. Ракитский, проф. Т. В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К. А. Тимирязева (проф. В. А. Калинин, к. хим. н. А. В. Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А. П. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормирова-нию при Минздраве России.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г. Г. Онищенко 16 марта 2003 г.
4. Введены с 1 июля 2003 г.
5. Введены впервые.
ББК 51.23+51.21
ISBN 5—7508—0578—6
© Роспотребнадзор, 2005 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005
МУК 4.1.1218—03
лит в гомогенизаторе в течение 3 мин. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила и гомогенизируя в течение одной минуты. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 мл, отфильтровывая их через фильтр «красная лента». К объединенному экстракту добавляют 30 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают, нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще раз 30 мл гексана. Гексан отбрасывают. Ацетонитрил собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия, осушитель промывают 10 мл ацетонитрила, объединяют смыв с экстрактом и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 3 мл ацетона, добавляют 30 мл дистиллированной воды, 1,5—2,0 мл 2 %-ного раствора едкого натра (до pH 9), 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку. Полученную смесь выдерживают в течение 20 мин при комнатной температуре. Экстракт в делительной воронке трижды промывают гексаном порциями по 20 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Каждый раз после полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку, прибавляют туда 30 мл хлороформа. Делительную воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний хлороформовый слой отбрасывают. RPA 202248 трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний этилацетатный слой собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
2.5.3.2. Очистка экстракта на картридже Sep-Pak Diol (2 ОН) (5 г).
Сухой остаток растворяют в 2,5 мл ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 2,5 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Картридж промывают последовательно 20 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50 : 50 и 10 мл метанола со скоростью 2 мл/мин. Элюаты отбрасывают. RPA 202248 элюируют с картриджа 10 мл метанола с той же скоростью, элюат упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в смеси: ацетонитрил + 0,2 %-
30
МУ К 4.1Л 217—4 Л Л 220—03
Определение остаточных количеств дифлубензурона в воде, почве,
пастбищных травах и люцерне методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии: МУК 4ЛЛ217—03....................................................4
Определение остаточных количеств изоксафлютола и его метаболита RPA-202248 в воде; изоксафлютола (в виде RPA-202248) в почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изоксафлютола в воде методом газожидкостной хроматографии: МУК 4ЛЛ218-—03........................................................................14
Измерение концентраций изоксафлютола (RPA 201772) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:
МУК 4ЛЛ219—03....................................................................................................34
Измерение остаточных количеств клетодима и его основных метаболитов (клетодим сульфона и клетодим сульфоксида) в воде, почве, корнеплодах моркови, столовой, сахарной и кормовой свеклы, клубнях картофеля, бобах сои, луке-репке, зеленой массе растений, семенах масличных культур и растительном масле
хроматографическими методами: МУК 4.1 Л 220—03..........................................41
3
УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,
Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онищенко
16 марта 2003 г.
Дата введения: 1 июля 2003 г.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств шоксафлютола и его метаболита RPA-202248 в воде; изоксафлютола (в виде RPA-202248) в почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изоксафлютола в воде методом газожидкостной хроматографии
Методические указания _МУК 4.1.1218—03_
1. Вводная часть
Фирма производитель: Рон Пуленк.
Торговое название: Мерлин, 75 % в. г.
Название действующего вещества по ИСО: изоксафлютол.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 5-циклопропил-1,2-оксазол-4-ил а,а,а- трифтор-2-мезил-р-толилкетон.
Синонимы: RPA 201772.
Структурная формула:
Эмпирическая формула: С^Н^зЖ^Б.
Молекулярная масса: 359,3.
Химически чистый изоксафлютол представляет собой белый кристаллический порошок без запаха.
МУК 4.1.1218—03
Температура плавления: 140 °С.
Давление паров: 1 • 10 ”3 мПа (при 25 °С).
Коэффициент перераспределения в системе октанол-вода: Kow log Р = 2,32.
Растворимость в воде при 10,2 °С - 5,3 мг/л, при 19,9 °С - 6,2 мг/л, при 30,3 °С- 11,8 мг/л.
Растворимость в органических растворителях (г/л при 24 °С): ацетонитрил - 233, гексан - 0,1, дихлорметан - 346, метанол - 13,8, октанол - 0,76, толуол — 31,2, этилацетат - 142, ацетон - 293.
Максимум поглощения в ультрафиолетовой области спектра находится на длине волны 268,7 нм.
Вещество стабильно при нагревании (14 дней при 54 °С) и на свету, но быстро разрушается в щелочной среде в результате гидролиза (Т50 составляет при pH 5 - 11,1 суток, при pH 7-20,1 дней, при pH 9- 3,2 дня).
Основной метаболит изоксафлютола - RPA 202248.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-циано-З-цикло-пропил-1-(2-метилсульфонил-4-трифторметилфенил)-пропан-1,3-дион.
Структурная формула:
Эмпирическая формула: С^Н^зЖ^.
Молекулярная масса: 359,3.
Химически чистый RPA 202248 представляет собой бесцветный кристаллический порошок без запаха.
Температура плавления - 137,3 °С.
Коэффициент перераспределения в системе октанол-вода: Kow log Р--0,88.
Растворимость в воде при 25 °С - 326 мг/л.
RPA 202248 - кислота с рКа 1,64.
Максимум поглощения в ультрафиолетовой области спектра находится на длине волны 302,0 нм.
Второй метаболит изоксафлютола - RPA 203328.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-метилсульфонил-4-трифторбензойная кислота.
15
МУК 4.1.1218—03
Структурная формула: |
Эмпирическая формула: C9H7F3O4S.
Молекулярная масса: 268,2.
Химически чистый RPA 203328 представляет собой бесцветный кристаллический порошок без запаха.
Температура плавления - 157,1 °С.
Коэффициент перераспределения в системе октанол-вода: Kow log Р = 0,61 при pH 3,0 и менее 0 при pH 7,0.
Растворимость в воде при 25 °С - 8 460 мг/л.
RPA 203328 - кислота с рКа 2,4.
Краткая токсикологическая характеристика: изоксафлютол относится к малоопасным по оральной токсичности соединениям (ЛД50 для крыс составляет более 5 000 мг/кг) с низкой дермальной (ЛД 50 для кроликов более 2 000 мг/кг) и ингаляционной (ЛК50 для крыс составляет более 5 230 мг/м3) токсичностью. Кумулятивные свойства изоксафлюто-ла выражены слабо: не раздражает кожу и слабо раздражает слизистую оболочку глаз. Аллергенное действие изоксафлютола не выявлено.
МДУ в зерне кукурузы — 0,05 мг/кг.
Область применения препарата. Изоксафлютол — гербицид системного действия, проникающий через корни и листья растений и ингибирующий биосинтез каротиноидов. Хорошо подавляет развитие широколистных и злаковых сорняков в посевах кукурузы при довсходовом или до-посевном внесении с нормой расхода 75—140 г д. в./га.
Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Мерлин, 75 % в. г., в качестве гербицида в посевах кукурузы с нормой расхода 0,10—0,15 кг/га при однократной обработке за сезон.
По данным фирмы-регистранта, метаболиты изоксафлютола токсикологического значения не имеют.
МУК 4.1.1218—03
2. Методика определения остаточных количеств изоксафлютола и его метаболита RPA-202248 в воде; изоксафлютола (в виде RPA-202248) в почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изоксафлютола в воде методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении изоксафлютола и его метаболита R в воде, а также изоксафлютола в виде его метаболита RPA 202248 в других средах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, перевода изоксафлютола в его метаболит (при необходимости), очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и на концентрирующих патронах.
Методика определения изоксафлютола в воде с помощью газожидкостной хроматографии основана на использовании детектора с постоянной скоростью рекомбинации ионов и неподвижной фазы OV-210. При этом изоксафлютол путем гидролиза превращается в RPA 202248 и экстрагируется из воды органическим растворителем. Затем за счет ме-танолиза RPA 202248 переводится в RPA 203328, который после очистки экстракта перераспределением действующего вещества между не-смешивающимися фазами метилируется и хроматографируется в виде метилового эфира 2-метилсульфонил-4-трифторбензойной кислоты.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода. Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1,2.
17
Таблица 1 Метрологическая характеристика метода | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Полнота определения изоксафлютола в воде, почве, зерне и зеленой массе кукурузы (5 повторностей для каэкдой концентрации)
Таблица 2 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
18
МУК 4.1.1218—03
2.1.3. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании кукурузы.
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование
2.2.1. Реактивы, материалы и растворы
ГОСТ 9293-74 ТУ 6-09-3513—86
йзоксафлютол, аналитический стандарт с содержанием д. в. 98,6 %, фирма Рон Пуленк RPA 202248, аналитический стандарт с содержанием д. в. 99,3 %, фирма Рон Пуленк Азот, осч Ацетон, осч
Ацетонитрил для ВЭЖХ, УФ 210, с массовой
долей ацетонитрила 99,9 %, воды — не более
0,01 % и оптической прозрачностью 100 % не
менее 210 нм; ЗАО «Предприятие Химресурс»,
тел/факс (095) 358-34-12
й-нитрозо-К-метилмочевина, ч
Бумага индикаторная универсальная
Вода бидистиллированная, деионизированная
Вода дистиллированная
н-Гексан, хч
Гелий, осч
Калий марганцово-кислый, чда Калия гидроксид
ГОСТ 857-88 ГОСТ 857-88 ГОСТ 19433-88 ТУ 6-09-2088—77 ГОСТ 6691-77
Калия гидроксид, 40 %-ный водный раствор Картриджи (концентрирующие патроны) Sep-Pak Dioi (2 ОН) (5 г) - Уотерс, кат. № 54690 Кислота соляная, концентрированная Кислота серная, концентрированная Метилен хлористый
Метиламин гидрохлорид (соляно-кислый) Мочевина, чда
Неподвижная фаза для ГЖХ: 5 % OV-210 (0,16— 0,20 мм) на Газохроме-Q, Хемапол, Чехия Натрий серно-кислый, безводный, хч Натрий хлористый, хч
Натрий хлористый, насыщенный водный раствор
Натрия гидроксид, очищенный
Натрия гидроксид, 2 %-ный водный раствор
19