Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

3.5. ДЕЗИНФЕКТОЛОГИЯ

Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств

Методические указания МУ 3.5.2431—08

Издание официальное

Москва * 2010

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

3.5. ДЕЗИНФЕКТОЛОГИЯ

Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств

Методические указания МУ 3.5.2431—08

(субстанции, исследуемого вещества) для того, чтобы остановить его действие на тест-вирус через заданное время (экспозицию).

4.5.1.    Для нейтрализации ДС в виде монопрепарата на основе окислителей (хлор-, йод-, кислородсодержащие средства) применяют 0,1— 1,0 % растворы тиосульфата натрия:

•    для катионных поверхностно-активных веществ - 0,1—1,0 % растворы лаурилсульфата натрия (сульфонол) или растворы сульфонола с 10 % обезжиренного молока;

•    для альдегидов - 1,0 % раствор бисульфита натрия;

•    для кислот - щелочи в эквивалентном количестве;

•    для щелочей - кислоты в эквивалентном количестве;

•    для спиртов - воду;

•    для композиционных средств - «комплексный» нейтрализатор, например, содержащий Твин 80 (3%), сапонин (0,3—3,0%), гистидин (0,1 %), цистеин (0,1 %). Если в состав ДС входят окислители, в нейтрализатор дополнительно вводят тиосульфат натрия. Следует иметь в виду, что «комплексный» нейтрализатор обладает выраженным цитотоксическим действием на клеточные культуры.

4.5.2.    Если не удается подобрать какой-либо из перечисленных нейтрализаторов, что проявляется в неспецифической дегенерации культуры клеток (или гибели мышей, уток), то используют 60—80% сыворотки (без консерванта) крупного рогатого скота (СКРС), инактивированную при 56 °С в течение 30 мин. СКРС нейтрализует большой перечень ДВ и наиболее близка к «универсальному» нейтрализатору,

4.5.3.    При невозможности нейтрализовать токсическое действие ДС следует применять дополнительные методы удаления ДС - диализ смеси вирус-дезинфектант, например, с использованием сефадекса LH-20, G-75, осаждения вируса методом высокоскоростного центрифугирования, фильтрацией через мембранные фильтры.

5. Основные этапы и методы изучения вирулицидной активности ДС и субстанций

Исследование вирулицидной активности ДС осуществляется в два этапа.

1. Первый этап исследований - определение наличия вирулицидной активности. Проводится in vitro суспензионным методом или методом батистовых тест-объектов.

МУ 3.5.2431—08

2. Второй этап исследований - изучение вирулицидной активности ДС при обработке ими различных тест-объектов, воздуха, контаминиро-ванных тест-вирусом.

В качестве тест-объектов могут использоваться:

•    различные изделия медицинского назначения;

•    предметы ухода за больными и игрушки;

•    белье, спецодежда и другие изделия из тканей;

•    посуда, в т. ч. лабораторная;

•    различные поверхности в помещениях (жесткой мебели, разных предметов, оборудования, в т. ч. санитарно-технического и др.);

•    кровь;

•    выделения (моча, фекалии, мокрота).

Объем исследований и перечень объектов обеззараживания зависит от назначения ДС, их состава, токсикологической характеристики, формы выпуска и др.

Проводятся также исследования вирулицидной активности кожных антисептиков, антимикробных тканей и лакокрасочных материалов.

5.7. Суспензионный метод

5.1.1.    К вирусной суспензии (ВС), в качестве которой может быть использована культуральная жидкость после удаления клеточных остатков, или ВС органов или тканей, или сыворотка крови, добавляют испытуемое средство в соотношении 1:9(1 объем вируса и 9 объемов средства) различных концентраций.

Суспензионный тест проводят в двух вариантах: без белковой нагрузки и с белковой нагрузкой. В последнем случае к вирусной суспензии добавляется инактивированная сыворотка КРС из расчета 40 % ее концентрации в смеси вирус - дезинфектант.

Полученную смесь (как с сывороткой, так и без нее) выдерживают при комнатной температуре (20 ± 2) °С в течение 15, 30, 60 мин, нейтрализуют (в соотношении 1 : 1, т. е. 1 объем смеси и 1 объем нейтрализатора), встряхивая в течение 5—10 мин, и используют для определения тест-вируса в чувствительной культуре клеток (или на мышах, или на утках).

5.1.2.    Методика определения инфекционного вируса после воздействия ДС (субстанции): исследуемый материал (смесь вируса, ДС и нейтрализатора) вносят (или исследуемым материалом заражают мышей или уток) в лунки планшет (пробирки) с выращенным монослоем клеток или в суспензию клеток (в случае применения суспензионной культуры

клеток), через 30—60 мин удаляют смесь, заменяют ее культуральной средой. Культуру клеток инкубируют в термостате при температуре, необходимой для репродукции вируса в течение срока наблюдения.

О вирулицидной активности средства судят по наличию или отсутствию цитопатогениого действия, вызываемого вирусом, или по другим проявлениям, указывающим на репродукцию вируса.

Все эксперименты сопровождаются контролями культуры клеток, вируса, полноты нейтрализации,

Эффективным считают средство (субстанцию), обеспечивающее инактивацию вируса при времени воздействия не более 60 мин.

5.2 Метод батистовых тест-объектов

5.2.1.    Исследования вирулицидной активности ДС (субстанций) этим методом проводят на тест-вирусах, фиксированных на батистовых тест-объектах. При использовании данного метода происходит некоторая потеря (1—2 log ТЦИД₅₀/мл) вирусных частиц во время погружения контаминированных тест-объектов в раствор ДС, нейтрализатор и при последующем отмывании от остатков ДС. Однако этот метод более приемлем для изучения ДС, продукты нейтрализации которых токсичны для культуры клеток и вызывают в них неспецифические дегенеративные изменения (прилож. 2). Методы культивирования вирусов приведены в прилож. 1.

5.2.2.    Исследования вирулицидной активности субстанции завершаются первым этапом.

5.2.3.    Исследования вирулицидной активности ДС, предназначенных для дезинфекции при особо опасных вирусных инфекциях завершаются первым этапом, если возбудитель по устойчивости к конкретному ДС не превышает полиовирус и аденовирус.

5.2.4.    После получения данных о наличии у ДС вирулицидной активности исследования продолжаются на втором этапе - изучении эффективности при обеззараживании различных объектов.

Эффективным считают средство (субстанцию), обеспечивающее инактивацию вируса при времени воздействия не более 60 мин.

6. Методы изучения и оценки эффективности ДС при обеззараживании различных объектов

Исследования эффективности ДС при обеззараживании различных объектов (изделия медицинского назначения, включая эндоскопы, посуда, белье, поверхности, выделения и др.), имеющих эпидемиологическое

12

МУ 3.5.2431—08

значение в распространении инфекционных заболеваний вирусной этиологии, проводят с целью разработки эффективных режимов дезинфекции. Полученные положительные результаты в опытах на тест-вирусах уточняют (при необходимости) на вирусах - возбудителях той инфекции, при которой они будут использованы, учитывая их специфику и механизм передачи инфекции. Объем исследований ДС зависит от их предполагаемого назначения и может включать все или некоторые из приведенных ниже объектов.

6.1. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании изделий медицинского назначения (ИМН)

6.1.1. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании ИМН (кроме эндоскопов) из различных материалов

В качестве тест-изделий используют стерильные инструменты и другие ИМН (в т. ч. однократного применения): имеющие замковые части (щипцы, ножницы, корнцанг), не имеющие, замковых частей (пинцеты, шпатели); стоматологические, в т. ч. вращающиеся, инструменты (боры, буравы корневые, зеркала, диски шлифовальные) из различных материалов (металлов, резин, стекла, пластмасс) или имитирующие их тест-объекты.

6.1.1.1.    Контаминация изделий тест-вирусом. Простерилизованные или продезинфицированные (способом кипячения) тест-изделия конта-минируют ВС с добавлением 40 % инактивированной (без консерванта) СКРС в качестве органической нагрузки (например, к 6 мл ВС добавляют 4 мл неразведенной сыворотки), перемешивают. Если средство обладает фиксирующими свойствами, то сыворотку в качестве белковой нагрузки добавляют в количестве 5 %.

6.1.1.2.    Приготовленной смесью контаминируют изделия, полностью погружая в нее мелкие, а на крупные наносят пипеткой, следя за равномерным смачиванием всей поверхности. Каналы изделий заполняют с помощью шприца или другого приспособления, избегая образования пузырьков воздуха.

6.1.1.3.    Разъемные изделия погружают в смесь и делают несколько рабочих движений. Инструменты, имеющие замковые части, погружают раскрытыми, предварительно сделав ими несколько рабочих движений для лучшего проникновения вируса в труднодоступные участки изделия в области замка. Избыток смеси удаляют промоканием с помощью сте-

МУ 3.5.2431—08

рильной фильтровальной бумаги, марлевой салфетки, но не протирают (!) изделия. Тест-изделия подсушивают при температуре (20 ± 2) °С в течение 60—90 мин.

6Л. 1.4. Определение активной концентрации средства и времени вирулицидного действия. Контаминированные вирусом изделия погружают в дезинфектант на время дезинфекционной выдержки (5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120 мин) или при необходимости на более длительное время, например, 240 мин - для изделий однократного применения перед утилизацией.

По истечении времени дезинфекционной выдержки изделия извлекают из дезинфектанта. Каналы промывают нейтрализатором, с поверхностей берут смывы салфетками размером 5 х 5 см, смоченными нейтрализатором. Салфетки, мелкие изделия погружают в пробирки с бусами и нейтрализатором (объем - 5 мл), которые помещают в шуттель-аппарат на 10 мин.

Полученную смывную жидкость вносят в пробирки или лунки планшет с культурой клеток или вводят в организм лабораторного животного (или уток).

Оптимальное время обеззараживания - не более 60 мин, для изделий однократного применения - не более 240 мин.

6.1.2. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании эндоскопов, включая дезинфекцию высокого уровня (ДВУ)

В качестве исследуемых объектов используют гибкий (гастроскоп), жесткий (цистоскоп) эндоскопы или фрагменты гибкого эндоскопа (гастроскопа) - его каналов и наружной поверхности.

С помощью пипетки ВС контаминируют поверхность и каналы эндоскопа (или его фрагменты), затем их погружают в раствор ДС, заполняя им каналы изделия. Для имитации минимального органического загрязнения к ВС перед контаминацией тест-изделия добавляют 5 % инактивированной сыворотки. Через 5—60 мин тест-изделие извлекают из раствора и берут смыв с его поверхности стерильной марлевой салфеткой, смоченной нейтрализатором. Канал изделия промывают раствором нейтрализатора и оставляют на 10 мин. Салфетки помещают в пробирки с нейтрализатором и стеклянными бусами, отмывают в шуттель-аппарате в течение 10 мин. Промывную - из каналов и смывную - с салфеток жидкости вносят в культуру клеток (или заражают другой биологический объект), отмытую от ростовой среды, оставляют на кон-

МУ 3.5.2431—08

такт на 30—60 мин для адсорбции вируса и добавляют поддерживающую среду. При необходимости для снятия цитотоксического действия ДС клетки промывают раствором Хенкса и заливают поддерживающей средой с сывороткой. Клетки инкубируют в термостате при необходимой для конкретного вируса температуре.

Оптимальное время обеззараживания - не более 60 мин.

При разработке режима ДВУ в качестве органической нагрузки используют 5 % инактивированной СКРС. ДС используют в концентрации, обеспечивающей стерилизацию, и исследует только время ДВУ.

Оптимальное время ДВУ - не более 30 мин.

6.1.3. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании стоматологических оттисков

6.1.3.1.    В качестве тест-объектов используют оттиски из альгинатных, силиконовых или других материалов. Для изготовления оттисков слепочную массу, полученную в соответствии с рекомендациями изготовителя, помещают в пластмассовую или металлическую ложку и делают оттиск с пластмассовых зубных протезов с моделированной десной.

6.1.3.2.    На оттиски наносят ВС, подсушивают в течение 2—3 мин, промывают стерильной водой и погружают полностью в раствор ДС. Контрольные контаминированные ВС оттиски погружают в стерильную водопроводную воду (вместо раствора ДС) на максимальное время, взятое в эксперименте.

6Л.3.3. Через 5—30 мин оттиски извлекают из раствора ДС (контрольные - из воды) и делают смывы марлевой салфеткой, смоченной в 5 мл нейтрализатора, приготовленного на поддерживающей среде.

6.1.3.4. Салфетки помещают в пробирки с нейтрализатором и стеклянными бусами, отмывают в шуттель-аппарате в течение 10 мин. Смывной жидкостью заражают культуру клеток (или другой биологический объект). Культуру клеток, отмытую от ростовой среды, оставляют на контакт на 30—60 мин для адсорбции вируса. Затем клетки промывают раствором Хенкса и заливают поддерживающей средой с сывороткой. Клетки инкубируют в термостате при оптимальной для конкретного вируса температуре.

Оптимальное время обеззараживания - не более 30 мин.

15

МУ 3.5.2431—08

6.1.4. Особенности постановки экспериментов по изучению

вирулицидной активности при обеззараживании ИМИ в установках (моюще-дезинфицирующие машины и др.)

6.1.4.1.    Одним из самых значимых условий постановки экспериментов по разработке (для отечественных) или экспертной оценке (для зарубежных) режимов обеззараживания ИМН в установках, например, ультразвуковых, моюще-дезинфицирующих машинах, является создание условий эксперимента, максимально приближенных к условиям практического применения (в соответствии с техническим паспортом и инструкцией по эксплуатации).

6.1.4.2.    Принципиальными являются следующие характеристики: скорость движения (циркуляции) дезинфицирующего раствора; температура раствора, количество (объем) раствора, диаметр канала (каналов) по которым циркулирует раствор. Повышенная температура растворов ДС и принудительная циркуляция повышают их активность, в несколько раз сокращая время обеззараживания ИМН.

6,2, Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании предметов ухода за больными и игрушек

6.2.1. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании предметов ухода за больными

6.2.1 Л. Предметы ухода за больными можно поделить на 2 группы в зависимости от возможного загрязнения биосубстратами и степени контаминации вирусами:

•    наконечники к клизмам соприкасаются при их использовании со слизистой оболочкой прямой кишки, поэтому требования к их обработке и критерии эффективности ДС такие же, как к ИМН. Органическая нагрузка в экспериментах должна составлять 40 % сыворотки, а способ обеззараживания - путем погружения в раствор ДС;

•    подкладные клеенки могут быть загрязнены любыми выделениями, поэтому органическая нагрузка должна быть такая же, как и в экспериментах с ИМН - 40 %, а способ обеззараживания - погружение в раствор или однократное, при необходимости - двукратное протирание;

•    пузыри для льда и грелки соприкасаются только с кожей, они, как правило, не загрязнены выделениями, однако могут быть контаминиро-ваны вирусами. При разработке режимов их обеззараживания органическая нагрузка на тест-объектах не обязательна, а способ обработки -одно- или двукратное протирание.

МУ 3.5.2431—08

6.2.1.2.    В качестве тест-объектов, имитирующих предметы ухода за больными, используют тест-поверхности размером 10x10 см², изготовленные из резиновых грелок, пузырей для льда, медицинской клеёнки, а также наконечники к клизмам и др., игрушки из разных материалов. Их контаминируют смесью ВС с 40 % инактивированной сыворотки. Наконечники к клизмам контаминируют вирусом по такой же методике, что и ИМН, имеющие каналы, затем подсушивают до полного высыхания при температуре (20 ± 2) °С.

6.2.1.3.    Подготовленные тест-объекты протирают одно- или двукратно с интервалом 15 мин салфеткой, смоченной раствором ДС. Кроме того, тест-объекты, изготовленные из медицинской клеёнки, погружают в дезинфицирующий раствор.

6.2.1.4.    Мелкие предметы (наконечники к клизмам и др.) погружают в раствор ДС, заполняя им полости и каналы, избегая образования пузырьков воздуха.

6.2.1.5.    Через 30, 60, 90, 120 мин смывы берут марлевыми салфетками размером 5x5 см, смоченными в нейтрализаторе. Предметы ухода, имеющие каналы, промывают нейтрализатором (не более 5 мл), который собирают в стерильные пробирки и оставляют на 10 мин для нейтрализации. Марлевые салфетки погружают в широкогорлые пробирки с бусами (с 5 мл нейтрализатора, приготовленного на поддерживающей среде), которые отмывают в шуггель-аппарате в течение 10 мин. Далее -как в п. 6.1.1.4.

Оптимальное время обеззараживания предметов ухода за больными -не более 120 мин.

6.2.2. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании игрушек

При обеззараживании игрушек (мелких и средних) определение вирулицидной активности ДС при обработке проводят способами протирания, погружения в раствор ДС или орошения (для крупных игрушек).

6.2.2.1.    С этой целью игрушки (без отверстий) контаминируют ВС из расчета 0,5 мл на 100 см², но так, чтобы вся их поверхность была ею покрыта. Мелкие игрушки погружают полностью в ВС. Затем их подсушивают при температуре 18—20 °С до полного высыхания.

6.2.2.2.    Поверхность игрушек протирают салфеткой, смоченной раствором ДС (в контроле - стерильной водой), мелкие игрушки погружают в раствор ДС, препятствуя их всплытию; крупные игрушки оро-

17

шают раствором ДС. Норма расхода раствора ДС способом протирания 100—150 мл/м² при однократной обработке, способом орошения -150 мл/м² при обработке распылителем типа «Квазар» и 300 мл/м² - при обработке распылителем типа «Автомакс» или гидропультом. При необходимости обработку способом протирания или орошения повторяют через 5—15 мин.

6.2.2.3. Через определенные интервалы времени (от 15 до 120 мин) с помощью марлевой салфетки (5x5 см), смоченной нейтрализатором, приготовленным на поддерживающей среде или физрастворе, с игрушек берут смывы. Салфетки погружают в пробирки со стеклянными бусами и нейтрализатором. Далее - как в п. 6.1Л .4.

Оптимальное время обеззараживания - не более 120 мин.

6.3. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании белья, спецодежды и других изделий из тканей

При определении вирулицидной активности ДС при обеззараживании белья учитывают соотношение раствора ДС и белья (при особо опасных инфекциях расход раствора составляет 5 л на 1 кг сухого белья, при прочих - 4 л раствора на 1 кг сухого белья), температуру раствора, степень и характер загрязнения белья.

6.3.1. Определение эффективности ДС при обеззараживании белья без видимых загрязнений

6.3.1.1.    Исследования проводят с помощью батистовых тестов. Контаминированные вирусом тесты подсушивают при комнатной температуре, затем их закладывают (по 5 штук в каждый) в бязевые стерильные мешочки размером 5 х 8 см с пришитой к углу каждого из них прочной нитью длиной около 0,5 м. Мешочки закрывают в виде конверта.

6.3.1.2.    Белье (старые бязевые халаты, полотенца и др.) погружают в емкость с раствором ДС, последовательно замачивая одну вещь за другой, следя за тем, чтобы между вещами не образовывалось воздушных прослоек, препятствующих процессу дезинфекции. Одновременно между слоями белья распределяют (сверху, в середине и внизу) мешочки с контаминированными вирусом тестами.

6.3.1.3.    Через определенные промежутки времени (15, 30, 60 и более мин) мешочки с тестами извлекают одновременно из трех слоев.

6.3.1.4.    Тесты вынимают из мешочка стерильным пинцетом, погружают в широкогорлые пробирки с нейтрализатором и бусами, далее - как в п. 6.1 Л .4.

МУ 3.5.2431—08

6.3.2. Определение вирулицидной активности ДС

при обеззараживании белья, загрязненного кровью, фекалиями

6.3.2Л. С целью изучения эффективности средства при обеззараживании белья, загрязненного кровью (имитация в виде 40 % сыворотки), медицинских отходов из тканей, марли, ваты (одноразовое хирургическое белье и акушерские комплекты, перевязочный материал, марлевые салфетки, ватные тампоны и др.) к 6 мл вируссодержащей жидкости прибавляют 4 мл инактивированной СКРС, смешивают и заливают тесты, подсушивают их и используют в опыте, как в п. 6.3 Л.

Оптимальное время обеззараживания белья - не более 120 мин, медицинских отходов - не более 240 мин.

6.3.2.2, Для имитации загрязнения белья и медицинских отходов из тканей фекалиями в экспериментах с тест-вирусом используют фекальную эмульсию. Фекальную эмульсию готовят следующим образом: к 6 мл 10 % ВС добавляют 4 мл 40 % эмульсии фекалий. Для этого 8 г простерилизованных фекалий (1,5 атм в течение 30 мин) растирают в ступке с 20 мл стерильной воды. В качестве органической нагрузки можно использовать также 80 % инактивированной СКРС из расчета: 8 мл сыворотки и 2 мл ВС, тщательно перемешивают и этой смесью заливают тесты. Избыток жидкости через 15 мин удаляют с помощью пипетки, тесты подсушивают при комнатной температуре. Далее эксперимент проводят по схеме для незагрязненного белья (п. 6.3.1).

Оптимальное время обеззараживания белья и медицинских отходов, загрязненных фекалиями, - не более 240 мин.

6.4. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании посуды, в том числе лабораторной

6.4.1. Методика обеззараживания посуды без остатков пищи, а также без других видимых загрязнений

При обеззараживании посуды без остатков пищи, лабораторной посуды без видимых загрязнений в качестве тест-объектов используют тарелки, стаканы, эмалированные кружки; столовые приборы - ножи, вилки, ложки; лабораторной посуды - пипетки, в т. ч. микропипетки, наконечники к ним, предметные стекла, пробирки.

6.4.1.1. Чистую посуду контаминируют ВС, которую наносят пипеткой из расчета 0,5 мл на 100 см² и равномерно распределяют по поверхности стерильным стеклянным шпателем. Вилки, ложки и ножи

ББК51.9

И32

И32 Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010.—39 с.

ISBN 978—5—7508—0804—5

1.    Разработаны ФГУН НИИ дезинфектологии Роспотребнадзора (М. Г. Шандала, Л. Г. Пантелеева); ГУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН (Д, К. Львов, Н. Н. Носик, Д. Н. Носик, П, Г. Дерябин); ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН (М. И. Михайлов, Н. А. Замятина, К. К. Кюрегян, Р. М. Элбакян); Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Л. С. Бойко, О. В. Романченко).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 апреля 2008 г. N® 1).

3.    Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей н благополучия человека Г. Г. Онищенко 13 декабря 2008 г.

4.    Введены взамен «Методических рекомендаций по определению вирулицидной активности препаратов» № 1119—73.

ББК 51.9

ISBN 978—5—7508—0804—5

© Роспотребнадзор, 2010 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010

МУ 3.5.2431—08

погружают в ВС на 10—15 мин (за исключением ручек), каналы пипеток контаминируют вирусом.

6.4.1.2.    Посуду, столовые приборы подсушивают при комнатной температуре. После полного высыхания погружают в раствор ДС, полностью их покрывая (расход раствора составляет примерно 2 л на комплект посуды: чашка, блюдце, 2 тарелки, ложка, вилка, нож) раствором.

6.4.1.3.    Через определенные интервалы времени (15, 30, 60, 90, 120 мин) посуду извлекают из раствора ДС. Для оценки эффективности обеззараживания стерильными марлевыми салфетками размером 5 х 5 см (вначале увлажненной нейтрализатором, затем сухой) тщательно протирают контаминированные вирусом части каждого предмета. Салфетки помещают в стерильную широкую пробирку с бусами и 5 мл стерильного нейтрализатора. Далее - как в п. 6.1 Л .4.

Оптимальное время обеззараживания - не более 60 мин.

6.4.1.4.    Контролем служит аналогичным способом контаминиро-ванная вирусом посуда, погруженная на максимальную экспозицию в стерильную или прокипяченную водопроводную воду.

6.4.2. Методика обеззараживания посуды с остатками пикци, а также загрязненной лабораторной посуды

Для изучения эффективности ДС при обеззараживании посуды с остатками пищи, загрязненной лабораторной посуды многократного использования и однократного применения (перед утилизацией) к ВС добавляют 80 % инактивированной СКРС из расчета: 20 % ВС и 80 % сыворотки, смесь наносят равномерно на посуду, подсушивают. Далее -как в п. 6.4.1.

Оптимальное время обеззараживания - не более 120 мин для посуды многократного использования и не более 240 мин - для посуды однократного применения (перед утилизацией).

6.5. Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании поверхностей

Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании тест-поверхностей проводят двумя способами: способом протирания (одно- или двукратного) или способом орошения.

6.5.1. В экспериментах используют тест-поверхности размером 10 х 10 см, гладкие, шероховатые, впитывающие и невпитывающие ДС из различных материалов: деревянные, оштукатуренные, окрашенные масляной или клеевой и других красками, оклеенные обоями, а также из линолеума, пластика, стекла, кафеля, метлахской плитки, фаянса, искус-

МУ 3.5.2431—08

Содержание

1.    Область применения...............................................................................................5

2.    Нормативные ссылки..............................................................................................6

3.    Общие положения...................................................................................................6

4.    Тест-вирусы, модельные системы, критерии оценки и основные условия,

которые необходимо соблюдать при исследованиях вирулицидной активности ДС и их субстанций, применение нейтрализатора.........................7

4.1.    Тест-вирусы.....................................................................................................7

4.2.    Модельные системы для исследований ДС и субстанций..........................8

4.3.    Критерии оценки вирулицидной активности ДС и субстанций.................8

4.4.    Основные условия, которые следует соблюдать при исследованиях

вирулицидной активности ДС и субстанций...............................................9

4.5.    Применение нейтрализатора ДС и субстанции............................................9

5.    Основные этапы и методы изучения вирулицидной активности ДС и

субстанций.................................... 10

5.1.    Суспензионный метод..................................................................................11

5.2.    Метод батистовых тест-объектов................................................................12

6.    Методы изучения и оценки эффективности ДС при обеззараживании

различных объектов.............................................................................................12

6.1.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании

изделий медицинского назначения (ИМИ)................................................13

6.1.1.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании ИМИ (кроме эндоскопов)

из различных материалов...................................................................13

6.1.2.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании эндоскопов, включая дезинфекцию

высокого уровня (ДВУ)......................................................................14

6.1.3.    Определение вирулицидной активности ДС при

обеззараживании стоматологических оттисков................................15

6.1.4.    Особенности постановки экспериментов по изучению вирулицидной активности при обеззараживании ИМН

в установках (моюще-дезинфицирующие машины и др.)...............16

6.2.    Определение вирулицидной активности ДС при

обеззараживании предметов ухода за больными и игрушек....................16

6.2.1.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании

предметов ухода за больными............................................................16

6.2.2.    Определение вирулицидной активности ДС при

обеззараживании игрушек..................................................................17

6.3.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании

белья, спецодежды и других изделий из тканей........................................18

3

6.3.1.    Определение эффективности ДС при обеззараживании белья

без видимых загрязнений ...................................................................18

6.3.2.    Определение вирулицидной активности ДС при

обеззараживании белья, загрязненного кровью, фекалиями........19

6.4.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании

посуды, в том числе лабораторной.............................................................19

6.4.1.    Методика обеззараживания посуды без остатков пищи,

а также без других видимых загрязнений.........................................19

6.4.2.    Методика обеззараживания посуды с остатками пищи, а также

загрязненной лабораторной посуды..................................................20

6.5.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании

поверхностей.................................................................................................20

6.6.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании

выделений (мочи, фекалий), крови, мокроты.............................................22

6.7.    Определение вирулицидной активности аэрозолей ДС при

обеззараживании воздуха в помещениях...................................................23

7.    Определение вирулицидной активности кожных антисептиков.....................24

8.    Определение вирулицидной активности антимикробных тканей..................25

9.    Определение вирулицидной активности лакокрасочных материалов...........25

10.    Определение вирулицидной активности ДС при обеззараживании

медицинских отходов..........................................................................................26

Перечень сокращений и условных обозначений....................................................26

Список литературы...................................................................................................27

Приложение 1. Тест-вирусы и методы их культивирования................................29

Приложение 2. Метод батистовых тест-объектов..................................................33

Приложение 3. Статистическая обработка результатов.........................................35

Приложение 4. Схема написания научного отчета о результатах изучения

вирулицидной активности ДС.....................................................39

4

МУ 3.5.2431—08

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Г. Г. Онищенко

13 декабря 2008 г.

Дата введения: с момента утверждения

3.5. ДЕЗИНФЕКТОЛОГИЯ

Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств

Методические указания МУ 3,5.2431—08

1. Область применения

1.1.    Настоящие методические указания содержат описание методов изучения и оценки вирулицидной активности дезинфицирующих средств (ДС) и субстанций (активных компонентов целевого действия ДС). Указания гармонизированы с Европейским стандартом 14476 «Химические дезинфектанты и антисептики. Вируцидный количественный суспензионный тест для химических дезинфектантов и антисептиков, используемых в медицине. Тест-методы и требования (фаза 2/ступень 1)», 2005; «Протоколом тестирования эффективности дезинфектантов, используемых для инактивации вируса гепатита В уток и поддержания соответствующего уровня требований», США, ЕРА 2000 г.; «Комиссии по антивирусной дезинфекции Немецкого Объединения по борьбе с вирусными заболеваниями (DVV)», 2004.

1.2.    Методические указания предназначены для специалистов лабораторий, аккредитованных на исследования и испытания ДС в целях их государственной регистрации и сертификации в России.

5

2. Нормативные ссылки

1.    Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ.

2.    «Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании», утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.00 № 554.

3.    СП 3.1.1275—03 «Профилактика инфекционных заболеваний при эндоскопических манипуляциях».

4.    МУ 3.5.1937—04 «Очистка, дезинфекция и стерилизация эндоскопов и инструментов к ним».

5.    МУ №287-113 «Методические указания по дезинфекции, пред-стерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения» от 30.12.98.

6.    СанПиН 2.1.7.728—99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений».

3. Общие положения

3.1.    Вирусы обладают разной устойчивостью к действию физических и химических факторов, в т. ч. ДС и субстанций. Устойчивость вирусов к ДС определяется их структурой и химическим составом. Более устойчивы к действию ДС вирусы без липидсодержащей оболочки, например пикорнавирусы, парвовирусы. Вирусы с липидсодержащей оболочкой, например вирусы гриппа, герпеса, ВИЧ относительно легко инактивируются. Механизм действия ДС на вирусы различен и зависит от химического состава. Они могут избирательно повреждать нуклеиновую кислоту вируса, белки нуклеокапсида или липопротеины суперкапсидной оболочки. Возможно синхронное воздействие на эти структурные элементы, дезинтеграция вирусной частицы или блокировка рецепторов на ее поверхности за счет накопления амфотерных веществ дезинфектанта. Для оценки вирулицидной активности следует использовать несколько тест-вирусов с различной устойчивостью, что позволяет оценить активность ДС в отношении широкого спектра вирусов.

3.2.    Результаты исследований вирулицидной активности ДС зависят также от характера используемого вируссодержащего материала, метода индикации вируса, метода определения вирулицидных свойств ДС, состава испытываемого ДС (действующие вещества - ДВ и другие компоненты).

3.3.    При изучении вирулицидной активности ДС необходимо иметь его подробную характеристику с указанием рецептуры, физико-

МУ 3.5.2431—08

химических свойств (включая растворимость и стабильность), подтвержденных результатами входного химического контроля.

3.4.    ДС, принимаемые для исследований, должны отвечать следующим требованиям: обладать хорошей растворимостью в воде, сохранять свою активность в присутствии органических веществ (кровь и другие биологические субстраты), быть нетоксичными или мало токсичными для людей (и животных), не иметь неприятного запаха, не портить обеззараживаемых предметов.

3.5.    Непременным условием при исследованиях вирулицидной активности ДС является использование нейтрализатора.

4. Тест-вирусы, модельные системы, критерии оценки и основные условия, которые необходимо соблюдать при исследованиях вирулицидной активности ДС и их субстанций, применение нейтрализатора

4.1. Тест-вирусы

4.1.1.    При исследованиях вирулицидной активности ДС необходимо использовать как РНК-, так и ДНК-содержащие тест-вирусы. При этом следует учитывать наличие лабораторной модели; безопасность для лиц, работающих с вирусом.

4.1.2.    Обязательным для всех ДС является испытание на двух тест-вирусах: вирусе полиомиелита I типа (вакцинном штамме Sabin (LSc-2ab) (далее - «полиовирус») и аденовирусе V типа (штамм Аденоид 75) (далее - «аденовирус»).

Средство, показавшее способность инактивировать полно- и аденовирус, включают в группу ДС с вирулицидной активностью. ДС с вирулицидной активностью могут быть использованы для дезинфекции при любой вирусной (включая особо опасные) инфекции, имеющей значение в инфекционной патологии человека.

4.1.3.    Для ДС, применяемых при повышенной (до 60 °С) температуре растворов (например, для обеззараживания белья), в качестве тест-вируса используют бычий парвовирус (штамм Хаден).

4.1.4.    В связи с эпидемиологической и социальной значимостью гепатита А для дезинфекции в инфекционных очагах проводят также исследования с вирусом гепатита А. Для изучения и оценки активности ДС в отношении вируса гепатита А используют вирус гепатита А человека (штамм HAS-15). ДС, инактивирующие вирус гепатита А, входят в группу средств с вирулицидной активностью.

4.1.5.    Для изучения вирулицидной активности ДС в отношении вируса гепатита В применяют суррогатный вирус ~ вирус гепатита В уток (ВГВУ), в отношении вируса гепатита С - суррогатный вирус - вирус диареи крупного рогатого скота ВД-БС (штамм ВК-1В1-№ 28) или вирус гепатита С человека (штамм Д1).

4.1.6.    Спектр тест-вирусов может быть расширен, в таком случае дают дополнительную информацию о результатах исследований на конкретном вирусе.

4.2. Модельные системы для исследований ДС и субстанций

4.2.1.    Исследования in vitro в культуре клеток. В экспериментах используют культуры клеток, чувствительные к тест-вирусу (прилож. 1).

4.2.2.    Исследования in vivo. В экспериментах используют чувствительных лабораторных животных (белые мыши), уток и др.

43. Критерии оценки вирулицидной активности ДС и субстанций

4.3.1.    Вирулицидное ДС (субстанция) должно подавлять инфекци-онность обязательных для испытаний тест-вирусов - полиовируса и аденовируса на исследуемых объектах не менее, чем на 4 log₁₀ ТЦИД₅₀ (т. е. степень инактивации должна быть не менее 99,99 %).

4.3.2.    Критерием вирулицидной активности ДС (субстанций) для других тест-вирусов (включая вирусы - возбудители особо опасных инфекций) является отсутствие инфекционности, определяемое современными методами индикации.

4.3.3.    Степень инактивации тест-вируса определяют в чувствительных модельных системах по подавлению инфекционной, цитопа-тической или бляшкообразующей активности вируса в культуре клеток, или по отсутствию маркеров инфицирования, или по специфической гибели лабораторных животных (белые мыши) и др. Для получения более точных результатов тест-вирус следует использовать с максимальным титром.

4.3.4.    Показателем вирулицидной активности ДС (субстанций) является скорость инактивации, которая представляет собой соотношение концентрации тест-вируса, выраженное в десятичных логарифмах, до и после воздействия ДС за определенный промежуток времени (экспозиция). Степень снижения вирусной инфекционности вычисляется в десятичных логарифмах по разнице титров вируса до и после обработки ДС.

МУ 3.5.2431—08

4.4.    Основные условия, которые следует соблюдать

при исследованиях вирулицидной активности ДС и субстанций

•    Использовать нейтрализатор, подобранный к конкретному ДС (или дезинфицирующей субстанции, далее в этом разделе - ДС).

•    При проведении сертификационных испытаний ДС хранить в соответствии с правилами сертификации.

•    Растворы ДС готовить на стерильной водопроводной дехлорированной воде.

•    Поддерживать температуру растворов исследуемых ДС в течение всего эксперимента в пределах (20 ± 2) °С (если по условиям эксперимента не рекомендована другая температура), независимо от температуры окружающей среды.

•    Использовать рабочие растворы ДС, производимых в форме гранул, порошков, таблеток и др. только после полного их растворения.

•    Кратность постановки экспериментов должна быть не менее трех (при условии получения одинаковых результатов).

•    При отсутствии цитопатического эффекта пробы подвергают необходимой обработке с целью проведения второго, а при необходимости и третьего слепого пассажа для определения полноты ингибирования тест-вируса.

•    Эксперименты должны сопровождаться всеми необходимыми контролями, в т. ч. контролем полноты нейтрализации дезинфектанта, жизнеспособности тест-вируса, контаминации тест-объекта тест-вирусом, культуры клеток или лабораторных животных (мыши), утки и др.

•    Исследуемые ДС до, во время и после исследований (испытаний) должны храниться в соответствии с требованиями технических условий (ТУ). При отсутствии ТУ необходимо соблюдать общие требования: избегать попадания прямых солнечных лучей и влаги, воздействия высоких температур и замораживания.

•    При исследованиях ДС следует строго соблюдать рекомендуемые меры индивидуальной защиты (перчатки, очки, респираторы и др.).

4.5.    Применение нейтрализатора ДС и субстанции

Для нейтрализации ДС (субстанции) используют вещество - нейтрализатор (или комплекс из нескольких веществ), останавливающее действие ДС. Нейтрализатор либо добавляют непосредственно в питательную среду, либо промывают им тест-объекты после воздействия ДС

9