ГОСУДАРСТВЕННАЯ комиссия по химическим средствам БОРЬл'и

С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗШШ РАСГШы И СОРНЯКА,1И ПРИ МСХ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОДИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ Б ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Чаоть УП

Москва - 1976 г.

II

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТ/щИДОВ В ШСЕ, ШСОПРОДУКТАХ И ШчВОТНШ ЖИРАХ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В

ТОНКОМ СЛОЕ

Принцип метода,

Метод основан на экстракции пестицидов из пробы ацетоном* первичной очистке экстракта от основной части жира "вымораживанием", окончательной адсорбционной очистке экстракта путем колоночной хроматографии на силикагеле АСК и последующей хроматографии очищенных и сконцентрированных экстрактов в тонком слое окисиалюг'ния или. силикагелл.

Чувствительность метода: С,02-0,08 мг/кг продукта*

Реактивы и растворы.

Гексан, хч.

Петролейный эфир, (температура кипения 40-70°), ч.

Ацетон, ч.

Бензол, чда.

Натрий сернокислый безводный, хч, просушенный при 150° в тел з-аие 5 часов.

Натрий сернокислый - водный раствор и насыщенный водный рас* вор.

Адсорбенты для тонкослойной хроматографии;

-    окись алюминия П степени активности - адсорбент предварительно многократно промывают дистиллированной водой до отрицательной реакции на ион хлора и высушивают на воздухе, просеивают через сито 100 мош;

-    силикагель марки КОК (очистку см. "Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, почве и воде”,

М., I960);

-    пластинки "Силуфол" (ЧССР), предварительно промытые водой в хроматографической камере и просушенные на воздухе, перед использованием активируют в.сушильном шкафу при 65° в течение 4 мин„

Кальций сернокислый, npocynetmutt при 150° в течение б час^ з.

х) Разработан Шуыковой И,А., Карповой И И,, Ликуновой С.А. и Рузанковой Л.Д. (Всесоюзный научно-исследовательский институт мясной промышленности)*

Утверждено 23 января 1975 г.,М 1222-75.

12

Стандартные растворы пестицидов:

- основной раствор: р,р-ДЛТ и р,р~ДДЭ по 16 мг и и ^ -ГХЩ* по 64 ит растворяют в 100 мл гексана;

* рабочие j астворы готовят путем разведения основного раствора гексаном в 4 и 8 раз*

Силикагель АСК.

Этиловый спирт, гидролизный, высшей очистки.

Проявляющий реактив:

ОД г азотнокислого серебра растворяют в I мл дистиллированной воды, добавляют 2 мл раствора аммиака (уд*вес 0,9) и доводят лбъем ацетоном до 20 мл.

Гигроскопическая вата, обезжиренная в аппарате Соколята.

Приборы и посуда.

Сито на 100 меш (диаметр отверстий 0Д4? мм).

Гомогенизатор или микроизмельчитель тканей.

Ртутно-кварцевая лампа (ПРК-2 или ПРК-4).

Прибор для отгонки органических растворителей или роторный испаритель.

Камера для хроматографирования (стеклянный сосуд с притертой крышкой или эксикатор).

Пульверизаторы стеклянные для опрыскивания пластинок.

Камера для опрыскивания.

Вани водяные.

Колбы с притертыми пробками на 260 мл.

Длительные воронки не 100, 250 и 600 мл.

Колбы мерные на 50 и 100 мл.

Пипетки на 5 и 10 мл.

Колбы круглодонные на 150, 250 и 500 мл.

Медицинские шприцы на X мл с делениями 0,020-0,025 «л для нанесения проб и стандартных растворов.

Стеклянные хроматографические волонки 400 х 20 мы.

Пластинки для ;фомдтографйи. Стеклянную пластинку 9x12 см моют водой с содой, хромовой сиесыо, дистиллированной'водой, сушат, перед использованием .ir-отирает спиртом.

13

Приготовление пластинок с тонким слоем адсорбента

Окись алюминия и сернокислый кальций тщательно небольшими порциями перетирают в фарфоровой ступке, переносят в колбу и встряхивают с бидистиллированной водой до образование однородной массы* Эта масса должна иметь консистенцию, позволяющую ей свободно растекаться по поверхности стеклянной пластинки без расслоения на твердую фазу и воду.

Так как различные партии адсорбента часто отличается по своим свойствам, количество добавляемой воды подбирают опытным путег, варьируя его а небольших пределах.

При это 1.1 критерием служит консистенция получающейся сорбционной массу:.

Соотношение компонентов - окись алюминия: сернокислый кальции: вода - 50.4:90 - 100; силикагель: сернокислый кальций; вода « 35:2:90.

10 г сорбционной массы (2 чайных ложки) наливают на пластинку и равномерно распределяют по всей поверхности. Пластинки сушат при комнатной температуре 18-20 часов и хранят в эксикаторе.

Описание определения

Подготовка пробы.

2G0-250 г образца 1-3 раза измельчают на мясорубке, тщательно перемешивают.

Рекомендуется дополнительное более тонкое измельчение образцов (кроме «провой ткани) в гомогенизаторе.

Экстракция .пестицидов и первичная очистка экстрактов.

25 г измельченного образца заливают 50 ш ацетона, тщательно перемешивают и нагревают на горячей водяной бане до заьппания растворителя,, Колбу охгпждают, добавляют в нее Ю мл с .лажденногс 1% раствора сернокислого натрия, перемешивают и охлаждают 30 минут и ледяной ^ане. Затем сливают ацетоновый с,ой в круглодонную колбу через слой обезжиренной Ьаты. Экстракцию ацетоном с последующим вымораживанием жира повторяют erne 2 раза. Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон на

14

роторном испарителе или в приборе для отгонки органических растворителей температура бани не более 70+2°) и трижды экстрагируют ПетролеИным эфиром: порциями 20 мл, 10 мл и IG шь Продолжительность Т-Й экстракции ■ I .час, последующих - 15 минут* При этом каждый раз перемешивают содержимое в течение 2-х минут, дают слоям разделиться и слой петролейного эфира переносят в делительную воронку (емкость - 500 мл) с 40 мл 2% раствора сернокислого .натрия. Смесь осторожно перемешивают в течение 2 минут, дают слоям разделиться и водную фазу отбрасывают.

Для улучшении разделения слоев можно добавить несколько мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Операцию промывки экстракта повторяют еще 2 раза, после чего петролейный эфир сливают в стакан с 20 г безводного сернокислого натрии, споласш вают делительную воронку дважды 5 мл петролейяоявго эфира. Подсушенный экстракт количественно переносят в мерный цилиндр на 50 ил и доводят петролеМшан эфире л до 30 мл. Стакан с сернокислым натрием сохраняют.

К о л о н о ч н ая хр о ыа т о гр афп я

Ь нижнюю часть хроматографической колонки помещают около 500 мг обезжиренной ваты. Затем насыпают силикагель АС К (75 мл длн очг.'тки экстрактов свиного жире и 70 мл - для всех остальных).

Силикагель слегка уплотняют постукиванием, колонку промывают 50 ил петролейного эфира и отжигают сорбент с помощью рези овой груши. Наносят на колонку 30 мл экстракта, дают жидкости стечь и снова отжимают сорбент. Прошедший через колонку растворитель отбрасывают.

Пестициды элюируют I10 мл смеси бензол-потролойный эфир (30:60), Злюирующу» смесь вносят порциями по 30 мл, споласкивая каждый раз цилиндр из-под экстракта и стаканчик с безводным сернокислым натрием, в котором под ушивали экстракт.

Злюат собирают в круглодонную колбу на 150 цд. Через 10 мин. после отекании последней порции растворителя отжимают сорбент с поиидьх) роз.цовой груии.    ₉

Злпат упаривают до объема ОД ыл и nanocf на хроиато-J р а»; л ч и с к уп пластинку.

15

Все органические растворители, остающиеся после упаривания проб и промывки колонок могут использоваться повторно после перегонки над активированным углей или азотнокислым серебром (I г/л).

Хроматография в тонкого слое.

Перед нанесением проб хроматографические пластинки размечают по трафарету, как показано на рис Л. Слой в В мм с вертикальных сторон удаляют, что способствует выравниванию фронта растворителя и улучшает разделение веществ.

Пробу и стандартные раствора наносят медицинским шприцом строго в одну точку, чтобы диаметр пятна не превышал 5-6 мм.

Для получения количественных данных каждый образец анализируют дважды: первый раз на пластинку по обе стороны от пробы наносят в три точки стандартный раствор с содержанием пестицидов I; 5 и 10 мкг (по ДдТ); второй раз содержание пестицидов в "стандарте" подбирается с учетом тайных первого определения .

Б случае необходимости проведения серийного анализа в производственных условиях можно наносить в одну точку стандартный раствор с содержанием ДДТ-0,5 мкг и три испытуемых пробы*

При необходимости количественной характеристики проб с остатками пести»|идс^0,5 мкг анализ повторяют, как .указано выше.

В качестве подвижного растворителя используют 1$~ый раствор ацетона в гексане*

Содержание остатков пестицидов определяют путем измерения на хроматограммах площадей пятен веществ исследуемой пробы и стандарта со строго одинаковой интенсивностью окраски. Для измерения площадей с хроматограммы снимают копию на кальку, просветленную вазелиновым маслом. Площадь пятен определяют путем наложения копий на кальке на миллиметровую бумагу.

Формула для расчета содержания остатков пестицидов в исследуемом образце (в мк/кг);

16

5 л . юоо

^ — .л

S,- 25. ЮОО

где Spl* площадь пятна вещества испытуемой пробы;

З_с- площадь пятна вещества стандарта;

А - содержание вещества в пятне стандарта в мкг; 25 - навеска образца, взятая для определения в г.